王俊偉，陳利鋒，王華松，陳 芳，王麗平，劉 琴（.湖北中醫(yī)藥大學(xué)針灸骨傷學(xué)院，武漢430065；.廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院，武漢 430060）

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簡(jiǎn) 訊

一種實(shí)驗(yàn)兔膝關(guān)節(jié)滑膜組織提取新方法

王俊偉1，陳利鋒2，王華松2，陳 芳2，王麗平2，劉 琴2
（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)針灸骨傷學(xué)院，武漢430065；2.廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院，武漢 430060）

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）典型病理表現(xiàn)之一為滑膜組織增生。成纖維樣滑膜細(xì)胞（FLSs）在RA的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。在原代FLSs體外培養(yǎng)過(guò)程中，滑膜組織提取成功與否是實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的關(guān)鍵。以往兔膝關(guān)節(jié)滑膜組織提取大都是提起髕骨上下進(jìn)行分離，在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)將髕骨提起分離兩側(cè)及脛骨時(shí)需要將髕骨翻轉(zhuǎn)，此時(shí)難以辨認(rèn)關(guān)節(jié)囊內(nèi)外層組織的解剖關(guān)系，致使分離困難，可能將纖維層混雜導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞純度不高。本研究在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改良，建立一種簡(jiǎn)單易行的提取方法并附圖做詳盡說(shuō)明。

方法：取新西蘭兔一只，耳緣靜脈空氣栓塞處死，75%酒精浸潤(rùn)雙大腿皮膚5 min。沿踝關(guān)節(jié)切開皮膚至大腿根部，充分剝離皮膚，顯露膝關(guān)節(jié)。將膝關(guān)節(jié)周圍筋膜層剝離，捫及髕骨骨性標(biāo)志。采取髕骨下極上緣0.5 cm處切開長(zhǎng)約1 cm橫行切口，離斷髕腱，保留髕下脂肪墊作為識(shí)別滑膜組織標(biāo)志。沿切口向內(nèi)外側(cè)髁游離，提夾關(guān)節(jié)囊層，必要時(shí)離斷內(nèi)外側(cè)副韌帶。仔細(xì)辨認(rèn)關(guān)節(jié)囊內(nèi)壁一層薄薄的組織，即為滑膜。助手輔助下仔細(xì)分離小心鉗夾，剔出滑膜組織上的血液及脂肪組織。將取出滑膜組織置于EP管中（內(nèi)含100 U/mL青霉素、100 mg/mL鏈霉素的PBS液）。

提取前明確滑膜組織解剖關(guān)系將大大減少術(shù)中辨認(rèn)時(shí)間（圖1）。本研究中，取髕骨下極上緣0.5 cm處切口，考慮此處為關(guān)節(jié)間隙水平，其下方為髕下脂肪墊。髕下脂肪墊與滑膜組織毗鄰，可作為滑模層辨認(rèn)的標(biāo)志，術(shù)中需離斷外側(cè)副韌帶（圖2）。橫行切開髕韌帶，從一側(cè)打開即可肉眼見到關(guān)節(jié)囊的內(nèi)外分層，內(nèi)層即為實(shí)驗(yàn)所需的滑膜層（圖3）。研究組以該法提取兔膝關(guān)節(jié)滑膜組織，操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)時(shí)間約1 h，組織純度高，經(jīng)傳代培養(yǎng)，細(xì)胞呈典型纖維樣改變（圖4），是一種切實(shí)可行且簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)方法。

術(shù)中注意：（1）提取時(shí)需避免滑膜組織混雜血液及脂肪；（2）正?；そM織透亮，有一定黏性，但韌度不足，操作需動(dòng)作輕柔，切勿粗暴。關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)模型兔滑膜組織則因充血、炎性增生而變厚、質(zhì)韌，形態(tài)學(xué)發(fā)生一定改變，需注意辨清層次關(guān)系。

圖1 正常膝關(guān)節(jié)解剖

圖2 實(shí)驗(yàn)兔膝關(guān)節(jié)組織層次關(guān)系

圖3 實(shí)驗(yàn)兔膝關(guān)節(jié)組織層次關(guān)系

圖4 所提取滑膜培養(yǎng)的細(xì)胞

【中圖分類號(hào)】

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1671-7856（2016）06-0094-01

doi：10.3969.j.issn.1671-7856.2016.06.017

［基金項(xiàng)目］湖北省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研課題（2013Z-Y37）；廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院課題（YZ201422）。

［作者簡(jiǎn)介］王俊偉，湖北中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，2014級(jí)碩士研究生在讀。

［通訊作者］陳利鋒，廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，副主任醫(yī)師。