魏　清，李正鵬

(1.皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，安徽　六安　237005；2.安徽科技學(xué)院，安徽　鳳陽　233100)

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綿地花菌黃酮類化合物抗氧化活性的研究

魏清1，李正鵬2

(1.皖西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，安徽六安237005；2.安徽科技學(xué)院，安徽鳳陽233100)

摘要：目的：探討綿地花菌黃酮類化合物的抗氧化活性。方法：采用有機(jī)溶劑萃取的方法，獲取綿地花菌子實(shí)體黃酮類化合物，以VC作為對(duì)照，測(cè)定清除DPPH·、羥基自由基、亞硝酸鹽、超氧陰離子的能力等指標(biāo)。結(jié)果：綿地花菌黃酮類化合物能有效的清除DPPH·、羥自由基、亞硝酸鹽和超氧陰離子，其清除能力的大小與濃度呈正相關(guān)。結(jié)論：綿地花菌黃酮類化合物具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性。

關(guān)鍵詞：綿地花菌；子實(shí)體；黃酮類物質(zhì)；抗氧化

綿地花菌(Albatrellusovinus)是屬于多孔菌目、地花菌科、地花菌屬的稀有蕈菌[1]。有研究表明其子實(shí)體富含蛋白質(zhì)、氨基酸、微量元素、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)[2]，同時(shí)還含有多糖、多酚類、三萜類等特殊活性成分，具有治療高血壓、抗腫瘤、抗衰老、抑菌等功效[3-4]，是一種極具有開發(fā)前景的藥食同源菌。

黃酮類化合物是一類廣泛存在于大型真菌與植物體中的次生代謝產(chǎn)物，具有降血脂、抗病毒、抗氧化、防衰老及抗癌等多種藥用功效。目前已有不少關(guān)于黃酮類化合物抗氧化活性的報(bào)道[5-6]，但有關(guān)綿地花菌黃酮類物質(zhì)的相關(guān)報(bào)道較少。為此本實(shí)驗(yàn)通過體外化學(xué)檢測(cè)法，對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行了初步的研究，以期為綿地花菌的開發(fā)及次生代謝產(chǎn)物的深入研究提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試材料

綿地花菌子實(shí)體，購自于安徽省岳西縣。

1.2方法

1.2.1黃酮類化合物樣品的制品稱取子實(shí)體粉末10 g，加入正己烷-乙醇混合溶劑(10 ∶1，v/v)100 mL 脫脂2 h，抽濾，重復(fù)2次。脫脂后的粉末再加入100 mL 70%乙醇分別置于電熱恒溫水浴鍋于60 ℃條件下提取12 h，提取液冷卻至室溫，抽濾后，真空冷凍干燥備用。

1.2.2黃酮類化合物含量的測(cè)定精確稱取120℃干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解，稀釋至刻度，即得0.2 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。參照遲恩忠等[7]的方法：準(zhǔn)確吸取0.0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL 分別置于25mL 具塞試管中，加入1.5% AlCl3 8 mL 和醋酸-醋酸鈉的緩沖液( pH 5.5) 4 mL，并用70%乙醇溶液定容至刻度，搖勻，靜置0.5 h。以0 號(hào)管作參比，在波長415 nm 處測(cè)定各溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程。準(zhǔn)確稱取黃酮類化合物的粗提物100 mg，用70%乙醇配制成濃度為0.2 mg/mL樣品液。通過上述方法測(cè)定樣品液的吸光值，由回歸方程計(jì)算出粗提物中黃酮類化合物的含量。

1.2.3黃酮類化合物抗氧化活性的測(cè)定精確稱取黃酮類化合物樣品，先利用70%的乙醇配制成質(zhì)量濃度為5 mg/mL黃酮類化合物溶液，根據(jù)需要再利用70%稀釋成不同濃度的樣品液。參照繆成貴等[8]的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行DPPH自由基清除率測(cè)定；參照李正鵬等[9]的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行羥自由基清除率測(cè)定；參照吳雪輝等[10]的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行亞硝酸鹽清除率測(cè)定；采用鄰苯三酚法[11]進(jìn)行超氧陰離子自由基的清除率測(cè)定。所有實(shí)驗(yàn)測(cè)定均采用與樣品相同濃度的抗壞血酸(VC)作陽性對(duì)照，并進(jìn)行三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

2結(jié)果與分析

2.1綿地花菌黃酮類化合物對(duì)DPPH·的清除作用

對(duì)二苯代苦味?；杂苫?DPPH·)的清除率的測(cè)定，是最常用的檢測(cè)樣品抗氧化能力的方法之一。綿地花菌黃酮類化合物對(duì)DPPH·的清除率如圖1所示。在設(shè)定的濃度范圍內(nèi)，隨著黃酮類化物及VC溶液濃度的增大，其對(duì)DPPH·的清除率也逐漸提高。在濃度達(dá)到0.25 mg/mL時(shí)，兩者對(duì)DPPH·的清除率分別為77.52%和89.07%。表明兩者對(duì)DPPH·都有較高的清除效率。但綿地花菌黃酮類化合物對(duì)DPPH·的清除率要小于同等濃度的VC溶液。

圖1　綿地花菌黃酮類化合物對(duì)DPPH·的清除作用

2.2綿地花菌黃酮類化合物對(duì)羥基自由基的清除作用

對(duì)羥基自由基的清除效率是反映物質(zhì)抗氧化作用的重要指標(biāo)。綿地花菌黃酮類化合物對(duì)羥自由基的清除率結(jié)果如圖2所示。在設(shè)定的濃度范圍內(nèi)，綿地花菌黃酮類化合物和VC對(duì)隨著濃度的增加，在濃度為0.25 mg/mL時(shí)，兩者對(duì)羥自由基的清除率分別達(dá)到38.93%和39.15%。方差分析表明在兩者濃度為0.25 mg/mL時(shí)對(duì)羥自由基的清除率差異不顯著(P<0.05)。

圖2　綿地花菌黃酮類化合物對(duì)羥基自由基清除作用

2.3綿地花菌黃酮類化合物對(duì)亞硝酸鹽的清除作用

亞硝酸鹽類物質(zhì)在人體內(nèi)積累，可能會(huì)導(dǎo)致基因突變等嚴(yán)重危害人體健康的情況發(fā)生。對(duì)亞硝酸鹽的清除能力，也是反映物質(zhì)抗氧化活性強(qiáng)弱的重要指標(biāo)之一。綿地花菌黃酮類化合物對(duì)亞硝酸鹽的清除率如圖3所示。隨著樣品濃度的增加，其對(duì)亞硝酸鹽清除率也相應(yīng)增加。在濃度為0.25 mg/mL時(shí)清除率達(dá)到58.69%。方差分析表明此濃度下綿地花菌黃酮類化合物與VC對(duì)亞硝酸的清除率之間差異不顯著(P<0.05)。

圖3　綿地花菌黃酮類化合物對(duì)亞硝酸鹽的清除作用

2.4綿地花菌黃酮類化合物對(duì)超氧陰離子的清除作用

圖4　綿地花菌黃酮類化合物對(duì)超氧陰離子的清除作用

超氧陰離子會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生嚴(yán)重的毒害，檢測(cè)清除超氧陰離子的能力是測(cè)定物質(zhì)抗氧化活性的重要指標(biāo)之一。綿地花菌黃酮類化合物對(duì)超氧陰離子的清除結(jié)果如圖4所示。隨著樣品濃度增加，綿地花菌黃酮類化合物和VC對(duì)超氧陰離子的清除率呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系，當(dāng)濃度為0.25 mg/mL時(shí)清除率分別為60.64%和58.5%。方差分析表明此濃度下綿地花菌黃酮類化合物與VC對(duì)超氧陰離子的清除率之間差異不顯著(P<0.05)。

3結(jié)論與討論

眾多人類疾病如癌癥、糖尿病、心血管疾病等都與體內(nèi)自由基過剩有關(guān)，抗氧化物質(zhì)能夠通過清除體內(nèi)過多的自由基從而保護(hù)機(jī)體的健康。人工合成的抗氧化劑如叔丁基對(duì)甲酚、特丁基對(duì)苯二酚等能夠清除體內(nèi)過多的有害自由基，但同時(shí)會(huì)產(chǎn)生毒副作用導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生病變，所以從自然界中尋找植物和真菌天然抗氧化物質(zhì)成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。謝學(xué)明等[12]的研究證實(shí)華南忍冬的乙醇提取物對(duì)DPPH·有很強(qiáng)的抗氧化活性；徐望龍等[13]的研究表明山銀花黃酮類化合物具有顯著的抗氧化損傷及恢復(fù)細(xì)胞活性作用。中國真菌資源十分豐富，其中食藥用真菌多達(dá)1400余種，其提取物中的成分是天然安全抗氧化劑的主要來源之一。謝宗波等[14]研究表明菌核側(cè)耳黃酮具有較強(qiáng)的清除自由基的能力。綿地花菌是食用菌中最不易保鮮貯藏的一類真菌，采后的后熟作用非常強(qiáng)烈，目前的利用主要是曬干食用，人們對(duì)其活性成分研究報(bào)道還較少。本研究通過化學(xué)模擬法探討綿地花菌黃酮類化合物的體外抗氧化能力，結(jié)果表明其對(duì)DPPH·、羥自由基、亞硝酸鹽、超氧陰離子均具有較強(qiáng)的清除能力，且作用效果部分與陽性對(duì)照物VC相當(dāng)，說明綿地花菌黃酮類化合物具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性，可以作為天然抗氧化劑，值得進(jìn)一步的深入研究與開發(fā)。

參考文獻(xiàn)：

[1]陸曉民，王松華，高青海，等．安徽地花菌屬一新記錄種——綿地花菌[J]．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40(3)：1275-1276．

[2]鄭煥娣，劉培貴．地花菌屬的研究概況和進(jìn)展[J]．微生物學(xué)通報(bào)，2006，33(6)：104-107．

[3]陸曉民，劉良燕，李正輝，等．綿地花菌(Albatrellusovinus)中的grifolin及其衍生物[J]．天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2013，25(5)：617-619．

[4]李正鵬，尚耘，向麗，等．兩種地花菌子實(shí)體水提物抗氧化活性的研究[J]．食品工業(yè)科技，2014，35(24)：104-106, 112．

[5]方玉梅，張春生，譚萍，等．金針菇黃酮類化合物的抗氧化性作用[J]．食品研究與開發(fā)，2012，33(3)：15-18．

[6]張強(qiáng)，王松華，孫玉軍，等．洋蔥中黃酮類化合物體外抗氧化活性研究[J]．農(nóng)業(yè)機(jī)械學(xué)報(bào)，2009，40(8)：139-142．

[7]遲恩忠，王麗，杜傳來，等．藍(lán)莓花黃酮飲料的配方優(yōu)化[J]．安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，29(6)：101-106．

[8]繆成貴，陳慶榆，何華奇．采用DPPH法測(cè)定四大藥用名菊抗氧化活性[J]．安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，26(4)：39-42．

[9]李正鵬，吳萍，吳蘇青．樹舌胞內(nèi)多糖抗氧化活性的研究[J]．食品工業(yè)科技，2010，31(6)：108-110．

[10]吳雪輝，張喜梅，李廷群，等．板栗花粗提物的抗氧化活性研究[J]．現(xiàn)代食品科技，2008，24(1)：14-16, 19．

[11]CHEUNG Y C, SIU K C, LIU Yuan-shuai, et al. Molecular properties and antioxidant activities of polysaccharide-protein complexes from selected mushrooms by ultrasound-assisted extraction[J]. Process Biochemistry, 2012, 47(5): 892-895.

[12]謝學(xué)明，鐘遠(yuǎn)聲，李熙燦，等．22種華南地產(chǎn)藥材的抗氧化活性研究[J]．中藥藥理與臨床，2006，22(1)：48-50．

[13]徐望龍，李云貴，孫林軍，等．山銀花黃酮粗提物抗氧化活性的體外觀察[J]．中成藥，2014，36(6)：1292-1294．

[14]謝宗波，陳赟，樂長高．菌核側(cè)耳黃酮的超聲法提取及體外抗氧化性能[J]．東華理工大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2013，36(3)：332-335．

(責(zé)任編輯：馬世堂)

收稿日期：2015-12-12

基金項(xiàng)目：國家星火計(jì)劃項(xiàng)目(2015GA710012)。

作者簡(jiǎn)介：魏清(1972-)，女，安徽省六安市人，碩士，講師，主要從事病理學(xué)教學(xué)與基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究。

中圖分類號(hào)：O629. 9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-8772(2016)03-0035-04

Study on Antioxidant Activities of Flavonoids fromAlbatrellusovinus

WEI Qing1， LI Zheng-peng2

(1.West Anhui Health Vocational College，Luan 237005, China;2. Anhui Science and Technology University，F(xiàn)engyang 233100, China)

Abstract：Objective:To discuss antioxidant activity in vitro of flavonoids from Albatrellus ovinus(FAO). Method: The flavonoids were derived from fruiting body of A. ovinus using solvent extraction method. The antioxidant activity of FAO was evaluated by determining its capability in eliminating DPPH·, hydroxyl radical, sodium nitrite and superoxide anion free radical, in comparison with VC. Results: The FAO are greatly effective in sca-

venging DPPH·, hydroxyl radical, sodium nitrite and superoxide anion free radical, whose activities were positively correlated with its concentration. Conclusion: The FAO have good antioxidant activity in vitro.

Key words:Albatrellus ovinus; Fruiting body; Flavonoids; Antioxidant activity