甘亞平

(湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 咸寧 437100)

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胃賁門腺癌p-cadherin表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性研究

甘亞平

(湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 咸寧 437100)

摘要：目的 通過(guò)檢測(cè)p-鈣粘蛋白(p-cadherin)在胃賁門腺癌及癌旁正常組織表達(dá)情況，探討p-cadherin蛋白在胃癌中表達(dá)是否與患者年齡、性別、腫瘤大小、組織學(xué)類型、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床相關(guān)病理參數(shù)有關(guān)聯(lián)。方法 采用免疫組化技術(shù)，檢測(cè)121例胃賁門腺癌及40例相應(yīng)癌旁正常胃黏膜p-cadherin蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 p-cadherin蛋白在正常胃黏膜組織為陰性表達(dá)；在中高分化胃腺癌組織陽(yáng)性表達(dá)較高(22/24,92%)，高于低分化腺癌(58/79,73%)，與粘液腺癌及印戒細(xì)胞癌(5/18,28%)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)； p-cadherin表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小、臨床腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 p-cadherin蛋白的表達(dá)與胃賁門腺癌分化程度呈明顯相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：胃腺癌；p-cadherin；免疫組織化學(xué)

胃癌是目前世界發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤，也是我國(guó)目前最常見(jiàn)的十大惡性腫瘤之一，預(yù)后往往很差，嚴(yán)重威脅著人們的健康，而胃癌的發(fā)生是一個(gè)多因素多步驟的過(guò)程，到目前真正的機(jī)制尚未明確，亦缺乏靈敏度和特異性都很高的腫瘤生物標(biāo)記[1]。不斷有研究發(fā)很多細(xì)胞-細(xì)胞粘附分子的表達(dá)或功能的變化，可牽涉腫瘤進(jìn)展的很多步驟[2]。

鈣粘蛋白是細(xì)胞與細(xì)胞粘附分子的一類，是一個(gè)橫跨膜糖蛋白家族，其中包括上皮型鈣粘蛋白(E-cadherin)、神經(jīng)鈣粘蛋白(N-cadherin)和胎盤鈣粘蛋白(P-cadherin)[3]。p-cadherin基因(CDH3)和E-cadherin基因 (CDH1)都位于16q22.1，CDH3 32 kb是CDH1的上游基因[4]。E-cadherin的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性已做了很多的研究，但p-cadherin在腫瘤中研究相對(duì)較少。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)p-cadherin在胃賁門腺癌中的表達(dá)，分析其表達(dá)與腫瘤的分化、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象收集121例胃賁門癌標(biāo)本。標(biāo)本來(lái)自市人民醫(yī)院 2009—2012年外科切除的胃賁門癌病例，年齡32～80歲，平均62歲，其中女29例，男92例，男女比例3.17∶1。所有胃賁門腺癌標(biāo)本嚴(yán)格按最新WHO胃癌的診療標(biāo)準(zhǔn)、經(jīng)過(guò)幾級(jí)病理醫(yī)師閱片簽字確診，并進(jìn)行腫瘤的分級(jí)和綜合臨床病歷資料進(jìn)行臨床分期。通過(guò)對(duì)每例所有腫瘤標(biāo)本閱片，每例選擇結(jié)構(gòu)清楚、病變典型、符合實(shí)驗(yàn)條件的蠟塊為本實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象；并選擇其中40個(gè)病例癌旁正常黏膜組織蠟塊同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。臨床病理資料參數(shù)有：性別、年齡、腫瘤的大小、組織學(xué)分類分級(jí)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床分期TNM。

1.2主要試劑小鼠抗人p-cadherin單克隆抗體、抗小鼠型二抗，購(gòu)自美國(guó)BD公司產(chǎn)品，p-cadherin克隆號(hào)：56/P-Cadherin 。

1.3方法121胃癌病例及部分對(duì)應(yīng)的癌旁正常黏膜組織進(jìn)行P-cadherin免疫組化染色檢測(cè)。用已知乳腺癌陽(yáng)性染色的標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替I抗為陰性對(duì)照。

1.4結(jié)果判定每張切片免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度按無(wú)著色、淡棕色、黃棕色和棕褐色分別計(jì)分為0、1、2、3分；按免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞面積分別計(jì)分為0(0%)、1(1%～25%)、2(26%～50%)、3(>51%)。然后根據(jù)兩項(xiàng)評(píng)分之積判斷結(jié)果：0分為陰性(-)，≤3分為弱陽(yáng)性(+)，4～6分為中度陽(yáng)性(++)，>6分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。P-cadherin表達(dá)病例分組：≤3分為陰性病例，≥4分為陽(yáng)性病例。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0處理數(shù)據(jù)，分類變量相關(guān)性的分析使用χ2檢驗(yàn)，P值≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1胃組織p-cadherin蛋白的表達(dá)胃組織p-cadherin蛋白免疫組織化學(xué)染色，結(jié)果見(jiàn)圖1(封三)。

2.1.140例癌旁正常黏膜p-cadherin在賁門癌旁相對(duì)正常被覆鱗狀上皮的基底細(xì)胞及近基底的棘細(xì)胞層有較強(qiáng)的表達(dá)，見(jiàn)圖①(封三)，在胃柱狀黏膜上皮及腺上皮基本沒(méi)有表達(dá)，少數(shù)在腺體的頸部部分細(xì)胞有弱表達(dá)，見(jiàn)圖②(封三)。

2.1.2121例胃癌標(biāo)本85例(70.2%)顯示中度到強(qiáng)的膜染色，其中，在中高分化腺癌腫瘤區(qū)，大部分病例呈中度到強(qiáng)的膜染色，見(jiàn)圖③(封三)。在其余36例(29.8%)呈弱陽(yáng)性或陰性，見(jiàn)圖④(封三)。其中在低分化和粘液及印戒細(xì)胞癌中，大部分腫瘤區(qū)呈陰性或局灶性弱染色，見(jiàn)圖⑤(封三)。在同一低分化腺癌，有腺管形成的區(qū)域明顯表達(dá)陽(yáng)性，而在無(wú)腺管形成的細(xì)胞區(qū)域明顯表達(dá)低下或陰性表達(dá)，見(jiàn)圖⑥(封三)。

2.2p-cadherin蛋白表達(dá)與患者資料的關(guān)系表1通過(guò)對(duì)P-cadherin表達(dá)數(shù)據(jù)總結(jié)了與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，p-cadherin表達(dá)與腫瘤細(xì)胞分化程度相關(guān)，中高分化、低分化、粘液和印戒細(xì)胞癌之間p-cadherin表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.001)。但是，p-cadherin的表達(dá)與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床TNM分期在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)發(fā)現(xiàn)有顯著相關(guān)性。

表1　p-cadherin蛋白表達(dá)與患者臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系

3討論

免疫組織化學(xué)檢測(cè)p-cadherin在胃賁門癌旁相對(duì)正常被覆鱗狀上皮的基底細(xì)胞及近基底的棘層細(xì)胞有較強(qiáng)的表達(dá)，其下的腺體陰性表達(dá)，這與以前的研究[5]，在人體正常的被覆復(fù)層上皮基底層及基底旁表達(dá)陽(yáng)性結(jié)果一致，可以在一定程度上反應(yīng)細(xì)胞的增殖能力。在本實(shí)驗(yàn)胃黏膜被覆鱗狀上皮p-cadherin陽(yáng)性染色效果很好，可作為陽(yáng)性表達(dá)對(duì)照組織。在胃被覆的單層柱狀黏膜上皮及腺體p-cadherin基本表達(dá)陰性，少數(shù)在腺體的頸部增殖區(qū)部分細(xì)胞有弱表達(dá)，與以前研究結(jié)果一致，并且有實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，正常胃黏膜p-cadherin蛋白的陰性表達(dá)是與其CDH3基因啟動(dòng)子正常狀態(tài)下甲基化修飾相關(guān)[6,7]。

在本實(shí)驗(yàn)，在高分化管狀腺癌腫瘤區(qū)，大部分呈完整腺管排列的腫瘤細(xì)胞呈中度到強(qiáng)的膜染色，p-cadherin表達(dá)明顯上調(diào)。有研究顯示[7，8]，在胃癌中，CDH3基因啟動(dòng)子異常去甲基化是經(jīng)常發(fā)生的分子事件，在中高分化胃癌致癌作用中，P-鈣粘蛋白的表達(dá)可能起主要的作用；最近，在P-cadherin超表達(dá)腫瘤模型中，一種新的和高度選擇性的人類單克隆抗p-鈣粘蛋白的produced-PF-03732010，具有顯示在不同的方面的抗腫瘤活性[9]，有望作為p-cadherin高表達(dá)腫瘤患者新的生物治療制劑。

在本實(shí)驗(yàn)，在低分化腺癌、粘液及印戒細(xì)胞癌中，大部分腫瘤區(qū)呈陰性或局灶性弱染色，粘液腺癌及印戒細(xì)胞癌基本陰性表達(dá)。更具特點(diǎn)的是在同一低分化腺癌中，腫瘤有異質(zhì)性，少數(shù)腫瘤細(xì)胞分化形成腺管的區(qū)域明顯陽(yáng)性表達(dá)，而在圍繞腺管的大片分化低無(wú)腺體形成的細(xì)胞區(qū)域明顯表達(dá)很弱或呈陰性，顯示當(dāng)腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步演進(jìn)、出現(xiàn)異質(zhì)性、腫瘤細(xì)胞分化差時(shí)，P-cadherin表達(dá)降低。提示在癌變過(guò)程中，P-cadherin表達(dá)調(diào)控程序可能不只是一種機(jī)制，如CDH3基因的甲基化和去甲基化存在，可能還受其他不同的程序調(diào)控，如轉(zhuǎn)錄、翻譯、P-cadherin和E-cadherin與 p120ctn相互干擾結(jié)合等信號(hào)通路的異常[10,11]。Shimomura 等描述[12]，P63(p53家族有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子)是一個(gè)調(diào)節(jié)P-cadherin表達(dá)的關(guān)鍵點(diǎn)，可直接轉(zhuǎn)錄調(diào)控CDH3基因。

綜上所述，P-cadherin在胃被覆正常鱗狀上皮基底層及基底旁細(xì)胞明顯表達(dá)，在正常柱狀上皮被覆的胃黏膜及腺體無(wú)表達(dá)。在胃賁門腺癌病例，p-cadherin的表達(dá)與腫瘤的類型和分化程度呈明顯的相關(guān)性，中高分化管狀腺癌表達(dá)較強(qiáng)，低分化癌和粘液印戒細(xì)胞癌表達(dá)弱或陰性。胃癌腫瘤的異質(zhì)性很大，早期診斷和有效治療方案均存在很多盲區(qū)，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)，有望為尋找胃癌治療的生物學(xué)制劑和選擇不同的患者因人而治的方案提供一定的可靠形態(tài)數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)，在以后的研究中將進(jìn)一步探討p-cadherin表達(dá)轉(zhuǎn)錄調(diào)控的相關(guān)機(jī)制。

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Association of p-cadherin Protein Expression with Clinical Pathological Parameters in Carcinoma of Gastric Cardia

GAN Ya-ping

(SchoolofBasicMedicine，HubeiUniversityofScienceandTechnology,XianningHubei437100,China)

ABSTRACT：Objective To investigate the expression of p-cadherin protein in gastric cardia adenocarcinoma its correlation with clinical pathological parameters，such as patient age，sex，tumor size，lymph node metastasis，histological type，grade and pTNM stage. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of p-cadherin protein in 121 cases of gastric cardia adenocarcinoma and 40 cases of adjacent normal gastric mucosa.Results The positive rate of P-cadherin protein expression in well-middle differentiated gastric adenocarcinoma was 92% (22/24)，higher than that in poor differentiated adenocarcinoma (73%) or that in mucinous adenocarcinoma and signet ring cell carcinoma (28%)，and the differences were statistically significant (P<0.001).However，P-cadherin protein expression was not correlated with patient sex，age，tumor size,lymph node metastasis and TNM stage(P>0.05).Conclusion The expression P-cadherin protein is correlated with the differentiation degree of gastric cardia adenocarcinoma.

KEY WORDS：Gastric adenocarcinoma；p-cadherin；Immunohistochemistry

中圖分類號(hào)：R735.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2095-4646(2016)03-0194-03

DOI:10.16751/j.cnki.2095-4646.2016.03.0194

(收稿日期：2016-02-20)