黃培玲++劉邦輝++方彰勝++陳紅++王廣軍++張志敏++梁浩亮

摘要：將尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）（♀）、奧利亞羅非魚（Oreochromisco aureus）（♂）各分成2組：完全符合標準組（NⅠ、AⅠ）、基本符合標準組（NⅡ、AⅡ），將它們進行1對1雜交，形成4個不同組合的尼奧魚：NⅠ×AⅠ、NⅠ×AⅡ、NⅡ×AⅠ、NⅡ×AⅡ。結(jié)果表明：4個不同組合中，NⅠ×AⅠ組合子代的雄性率穩(wěn)定在93.0%左右，優(yōu)于NⅡ×AⅠ，顯著高于NⅠ×AⅡ、NⅡ×AⅡ（P<0.05）；成活率的結(jié)果類似。生長比較數(shù)據(jù)顯示：NⅡ×AⅠ生長最快，NⅠ×AⅠ次之，且均高于其他2組（P<005）。由結(jié)果可知，在生產(chǎn)中使用完全符合國家標準的NⅠ×AⅠ組合，在制備高雄性尼奧雜交魚NⅡ×AⅠ方面亦頗具潛力。

關(guān)鍵詞：奧利亞羅非魚（♂）×尼羅羅非魚（♀）；1對1雜交；雄性率；早期成活率；生長率

中圖分類號： S917.4；S965.125文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2016）05-0338-02

收稿日期：2015-03-09

項目資助：廣東省海洋漁業(yè)科技推廣專項（編號：A201301B12、A201101G02）。

作者簡介：黃培玲（1974—），男，廣東饒平人，高級講師，從事水產(chǎn)動物增養(yǎng)殖研究。E-mail：hplscxx@163.com。

通信作者：王廣軍，碩士，副研究員，從事水產(chǎn)動物健康養(yǎng)殖研究。E-mail：wgj5810@163.com。羅非魚（Oreochromis spp.）別稱非洲鯽魚，原產(chǎn)于非洲，屬于慈鯛科的暖水性魚類，是聯(lián)合國糧農(nóng)組織重點推廣的優(yōu)質(zhì)魚類之一。奧尼羅非魚與其他種類羅非魚相比，具有生長快、規(guī)格齊、耐寒、起捕率高等優(yōu)點，已經(jīng)成為我國廣東等地出口創(chuàng)匯的主要養(yǎng)殖品種之一[1]。奧尼羅非魚理論上可以達到100%的雄性率，且雄性魚在生長、抗病方面優(yōu)勢顯著，在苗種生產(chǎn)中尼奧魚雄性率不高等因素已經(jīng)嚴重影響羅非魚產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟效益[2-4]。目前，我國現(xiàn)有尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）、奧利亞羅非魚（Oreochromisco aureus）品種較多，在苗種生產(chǎn)中易近親交配，同型合子數(shù)量增加，致使群體遺傳基因庫萎縮，從而加速衰退進程[5]。因此，選擇合理親本開展苗種培育尤為重要。為進一步確定選育目標及檢驗選育親本種質(zhì)是否純化，準確地確定尼羅羅非魚、奧利亞羅非魚純種生物學性狀，本研究開展了不同組合尼羅羅非魚（♀）與奧利亞羅非魚（♂）的雜交研究，以期通過檢驗雜交苗種雄性率來判斷所選尼羅羅非魚、奧利亞羅非魚親本的純度，并為羅非魚良種選育標準、選育路線的制定提供理論參數(shù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗親本羅非魚來源于廣東省惠州市水產(chǎn)科學技術(shù)研究所從中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心引進的尼羅羅非魚親本與奧利亞羅非魚親本子二代。尼羅羅非魚、奧利亞羅非魚選擇標準分別符合SC 1027—1998《尼羅羅非魚》、SC 1042—2000《奧利亞羅非魚》。

1.2試驗方法

1.2.1分類標準分別將尼羅羅非魚（♀）、奧利亞羅非魚（♂）分成2組，分別為尼羅標準Ⅰ（NⅠ）、尼羅標準Ⅱ（NⅡ），奧利亞標準Ⅰ（AⅠ）、奧利亞標準Ⅱ（AⅡ），其選擇形態(tài)分類標準如下。NⅠ：尾紋整齊且平行，之間互不交叉，其他性狀符合SC 1027—1998《尼羅羅非魚》。NⅡ：尾紋第3與第4條互相交叉，其他性狀符合SC 1027—1998《尼羅羅非魚》。AⅠ：背部顏色分界明顯，其中上半部為紫藍色，下半部為灰白色；上頜至頭頂2眼之間為藍色，頭頂后半部分為紫藍色；泄殖孔肥大且突出。AⅡ：體色呈灰藍色，頭部顏色分布不明顯，其中上頜為淺藍色，腮蓋后緣有藍點，泄殖孔相對偏?。▕W利亞標準Ⅰ、奧利亞標準Ⅱ的其他性狀均符合SC 1042—2000《奧利亞羅非魚》）[6-8]。將NⅠ、NⅡ、AⅠ、AⅡ親本分開飼養(yǎng)在長×寬×高為 5 m×6 m×1 m的水泥池中備用。

1.2.2制種方法選出體質(zhì)量在500 g以上且性成熟的NⅠ、NⅡ、AⅠ、AⅡ4種親本各30尾，兩兩（即NⅠ×AⅠ、NⅡ×AⅠ、NⅠ×AⅡ、NⅡ×AⅡ）配組進行雜交，分開飼養(yǎng)，直至魚苗培育至體長4 cm以上。使用型號為HS5900LF的電子標記槍，將每尾親本打上編號，2013年4—6月開始第1次試驗，使用電子檢驗器準確找回第1次試驗的1對1親本組合，并于2013年8—10月重復(fù)驗證第1次試驗。

分別對各試驗組奧尼苗種進行雄性檢驗并統(tǒng)計雄性率。

1.2.3數(shù)據(jù)處理采用Excel、SPASS 17.0進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以“平均值±標準差（x±s）”表示。在單因子方差分析（ANOVA）基礎(chǔ)上采用t檢驗分析比較，取95%置信度（P<0.05）或99%置信度（P<0.01）。

2結(jié)果與分析

2.1雄性率

由表1可見，2次制種，NⅠ×AⅠ組合的雄性率分別為94.5%、92.0%，均最高且較穩(wěn)定；NⅡ×AⅠ組合分別為915%、92.8%，次之；再次是NⅡ×AⅡ組合，分別為846%、83.5%；NⅠ×AⅡ組合分別為76.0%、79.0%。在2次制種中，以奧Ⅰ為父本的雜交組合均產(chǎn)生了雄性率接近100.0%的奧尼雜交子代，NⅠ×AⅠ組合第1次制種的1個試驗組中也產(chǎn)生了100.0%的高雄性率的子代。經(jīng)過方差分析與Duncans多重比較，NⅠ×AⅠ與NⅡ×AⅠ組合的雄性率顯著高于NⅡ×AⅡ、NⅠ×AⅡ組合（P<0.05）。

2.2生長比較試驗

由表2絕對生長率結(jié)果可知，NⅡ×AⅠ組合生長最快，NⅠ×AⅠ組合次之，NⅠ×AⅡ、NⅡ×AⅡ組合最慢。2次制種中，NⅠ×AⅠ、NⅡ×AⅠ組合的絕對生長率分別為0.36、036，0.40、0.37，均最高且較穩(wěn)定，顯著高于NⅠ×AⅡ組合的0.28、0.26、NⅡ×AⅡ組合的0.23、0.28（P<0.05）。試驗結(jié)果表明，NⅠ×AⅠ、NⅡ×AⅠ組合奧尼雜交魚子代的絕對生長率顯著高于NⅡ×AⅡ、NⅠ×AⅡ組合（P<0.05）。

2.3早期成活率

由表3可見，NⅠ×AⅠ存活率最高，NⅡ×AⅠ、NⅡ×AⅡ組合次之，NⅠ×AⅡ組合最低。2次制種中，NⅠ×AⅠ、NⅡ×AⅠ組合的早期成活率均最高且較穩(wěn)定，分別為8504%、88.31%，86.47%、84.54%，遠遠高于NⅠ×AⅡ組合的7748%、76.99%，NⅡ×AⅡ組合的76.97%、76.07%。經(jīng)過方差分析與Duncans多重比較，NⅠ×AⅠ、NⅡ×AⅠ組合早期成活率顯著高于NⅡ×AⅡ、NⅠ×AⅡ組合（P<005）。

3討論

3.1奧尼魚雄性率的穩(wěn)定性問題

從本研究可以看出，雄性率表現(xiàn)比較穩(wěn)定。同一批制種、同一組合的不同重復(fù)間，或同一組合、同一重復(fù)的2次制種間，子代雄性率的差異不大，其中更穩(wěn)定的是NⅠ×AⅠ組合，其子代雄性率基本都在93%左右。這與筆者之前進行親本的純度驗證結(jié)果相似。越來越多的試驗證明，除了性染色體外，常染色體、環(huán)境因子等其他隨機因素對羅非魚的性別形成也有影響。然而，奧尼魚雄性率的波動究竟是由環(huán)境因子還是遺傳因子引起，尚無明確的解釋，生產(chǎn)上多歸因于種質(zhì)不純。但是同一批魚在不同的環(huán)境條件下，性別比也會發(fā)生變化，不排除環(huán)境因子與遺傳表達存在著交互聯(lián)系，溫度、基因型對羅非魚性別控制有交互影響[9-11]，從遺傳-環(huán)境的交互作用解釋奧尼魚雄性率不穩(wěn)定的問題可能更為合理。

值得注意的是，Tuan等用泰國品系尼羅羅非魚95個家系（1雌1雄配對）正常交配得到子代7 822尾，其總體雄性率為50.5%[12]；然而，各個家系間子代性別比波動很大（155%～100.0%），其中有51個（53.7%）家系子代的性別比經(jīng)卡方檢驗與1 ∶ 1有顯著差異，有5個家系還出現(xiàn)了近乎全雌或全雄的極端的性別比。這些結(jié)果說明，即使在同一品系內(nèi)，羅非魚的性別決定也存在不穩(wěn)定性。因此，在選擇生產(chǎn)奧尼魚的親本時，僅選到品系的水平是不夠的，還應(yīng)進一步在品種內(nèi)建立純系。同時，研究遺傳-環(huán)境互作因子對雜交魚性別的影響，有可能成為提高雜交魚雄性率穩(wěn)定性的重要途徑。由本試驗結(jié)果可以看出，以AⅠ作為父本的雜交后代雄性率明顯高于以AⅡ作為父本的雜交后代雄性率，因此可以推斷AⅠ純度較高。

3.2奧尼魚雄性率與早期成活率關(guān)系

在生產(chǎn)實際中很難確定遺傳因子、環(huán)境因子在哪個環(huán)節(jié)對性別起到?jīng)Q定作用，但是可以通過雜交子代的雄性率、成活率以及親本出苗數(shù)的不同來分析性別差異的原因[5，10]。因此設(shè)計雜交魚早期成活率這一指標，考察20～35日齡的雜交魚苗的平均成活率。這段時間正是羅非魚性別分化階段，早期成活率的高低在某種意義上反映羅非魚在該階段生理代謝的穩(wěn)定性。生理代謝穩(wěn)定，則成活率高，羅非魚性別分化受到的干擾也少，性別決定越穩(wěn)定。如NⅠ×AⅠ組合的雄性率最高，早期成活率也最高；NⅠ×AⅡ組合的雄性率最低，早期成

活率也最低。從某種角度反映了魚苗成活率與雄性率存在一定關(guān)系，與Tuan等研究的結(jié)果[12]基本一致。

3.3對親本的評價

從分析結(jié)果可知，NⅠ×AⅠ組合子代的雄性率穩(wěn)定在93%左右，且成活率、生長率也較好，顯然是目前生產(chǎn)奧尼魚較理想的親本組合。在NⅡ×AⅠ組合的2次制種中均出現(xiàn)了98%及以上的高雄性率，表明NⅡ×AⅠ的高雄特征是可能出現(xiàn)并予以保持的。另外，NⅠ×AⅠ組合的第1次制種中也出現(xiàn)了100.0%的高雄性率。這些均表明，以AⅠ羅非魚為父本有生產(chǎn)高雄性雜交魚的較大潛力；而且，相對于NⅠ來說，以NⅡ為母本，可以獲得較高的雄性率以及生長率，因此筆者推薦NⅠ×AⅠ組合，也就是符合國家標準的組合。

參考文獻：

[1]戈賢平. 新編淡水養(yǎng)殖技術(shù)手冊[M]. 上海：上?？茖W技術(shù)出版社，2005.

[2]李思發(fā). 我國羅非魚養(yǎng)殖業(yè)世紀展望[J]. 中國水產(chǎn)，2000，290（1）：15-20.

[3]戈賢平，俞菊華. 無公害羅非魚標準化生產(chǎn)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005：1-5.

[4]夏德全. 中國羅非魚養(yǎng)殖現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J]. 科學養(yǎng)魚，2000（5）：4，21.

[5]李思發(fā)，蔡完其. 我國尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚養(yǎng)殖群體的遺傳漸滲[J]. 水產(chǎn)學報，1995，19（2）：105-111.

[6]李家樂，李思發(fā)，李勇，等. 尼奧魚[尼羅羅非魚（♀）×奧利亞羅非魚（♂）]同其親本的形態(tài)和判別[J]. 水產(chǎn)學報，1999，23（3）：261-265.

[7]李思發(fā). 主要養(yǎng)殖魚類種質(zhì)資源研究進展[J]. 水產(chǎn)學報，1993，17（4）：344-358.

[8]趙金良，李思發(fā)，李晨虹. 不同品系尼羅羅非魚生化遺傳標志研究[J]. 上海海洋大學學報，1997，6（3）：166-170.

[9]Mair G C，Beardmore J A，Skibinski D O F. Experimental evidence for envionmental sex-determination in Oreochromis spp.[C]//Hirano R，Hanyu I. Tokyo，Japan：Proceedings of the Second Asian Fisheries Forum，1990：555-558.

[10]Baroiller J F，Chourrout D，F(xiàn)ostier A，et al. Temperature and sex chromosomes govern sex ratios of the mouthbrooding Cichlid fish Oreochroomis niloticus[J]. J Exp Zool，1995，273（3）：216-223.

[11]Abucay J. Genetic and environmental factor affecting growth and sex ratio in the Nile tilapia，Oreochrpmis niloticus L.[D]. U K，Swansea：University of Wales Swansea，1998：326.

[12]Tuan P A，Mair G C，Little D C，et al. Sex determination and the feasibility of genetically male tilapia production in the Thai-Chitralada strain of Oreochromis niloticus （L.）[J]. Aquaculture，1999，173（1）：257-269.