陳則東++沈曉鵬++穆洪云

摘要：為研究胰島素樣生長(zhǎng)因子2基因（IGF2）多態(tài)性及其對(duì)雞生產(chǎn)性能的影響，采用DNA測(cè)序、PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP）技術(shù)分析基因單核苷酸多態(tài)性，并對(duì)雞的生產(chǎn)性能進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果可知：共發(fā)現(xiàn)2個(gè)SNPs位點(diǎn)，P1位點(diǎn)對(duì)4周齡雞體質(zhì)量具有顯著影響（P<0.05）。研究結(jié)果初步表明：IGF2基因可能是影響雞生長(zhǎng)繁殖性狀的1個(gè)主效基因或是與其存在緊密遺傳連鎖的1個(gè)標(biāo)記。

關(guān)鍵詞：雞；IGF2基因；外顯子1；遺傳多態(tài)性；生產(chǎn)性能

中圖分類號(hào)： S831.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2016）06-0331-02

收稿日期：2015-05-19

作者簡(jiǎn)介：陳則東（1985—），男，江蘇宿遷人，碩士，助教，從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與教學(xué)研究。E-mail：m15852953053@163.com。

IGF2（insulin-like growth factor2）基因是最早發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性印跡基因[1]，IGF2為單鏈多態(tài)，分子量7.5 ku[2]。研究發(fā)現(xiàn)，IGF2是影響動(dòng)物胚胎生長(zhǎng)分化的重要因子，參與多種代謝的調(diào)節(jié)[3]。IGF2基因表達(dá)具有時(shí)間特異性，如小鼠胚胎中IGF2基因開始為雙等位基因表達(dá)，但在胚胎形成后期則表現(xiàn)為母源單等位基因表達(dá)[4-5]。本研究以雞為研究對(duì)象，以IGF2基因?yàn)楹蜻x基因，采用PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP）方法[6]檢測(cè)基因是否存在單核苷酸多態(tài)性，探討不同基因型與雞生產(chǎn)性能的相關(guān)性。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料與處理

210羽母雞血樣采自翔龍企業(yè)有限公司，同時(shí)記錄其生長(zhǎng)性狀（初始質(zhì)量、4、8、12、16周齡體質(zhì)量）及繁殖性狀（開產(chǎn)日齡、開產(chǎn)體質(zhì)量、開產(chǎn)蛋質(zhì)量、300日齡產(chǎn)蛋數(shù)）；翅靜脈采集血樣1.5 mL，肝素鈉抗凝，-20 ℃保存；DNA提取試劑盒[Omega Blood DNA Kit（200次）]法抽提基因組DNA。

1.2引物設(shè)計(jì)

根據(jù)GenBank中雞的IGF2基因（GenBank登錄號(hào)：NC_006092）設(shè)計(jì)IGF2基因第1外顯子引物P1，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。引物的詳細(xì)信息：F：5′-TGTGCTGCCAGGCAGATAC-3′；R：5′-CCCCAACCCAGCTCTATCT-3′。

1.3PCR-SSCP分析

將3 μL PCR產(chǎn)物加入7 μL變性緩沖液中，98 ℃變性 10 min，然后迅速冰浴5 min。將變性好的PCR產(chǎn)物點(diǎn)樣加入到10%聚丙烯酰胺凝膠中，于140 V電泳12 h。在電泳結(jié)束后，進(jìn)行銀染顯色并拍照記錄結(jié)果。

1.4IGF2基因統(tǒng)計(jì)分析

配合以下模型進(jìn)行方差分析：

yijk =μ+Gi+Gj+Gij+eijk。

式中：yijk為性狀測(cè)定值；μ為群體平均值；Gi、Gj為基因型效應(yīng)；Gij為位點(diǎn)i與位點(diǎn)j間的互作效應(yīng)；eijk為第i個(gè)品種在第j個(gè)環(huán)境、第k次重復(fù)的試驗(yàn)誤差。

2結(jié)果與分析

2.1PCR-SSCP結(jié)果

P1引物擴(kuò)增片段采用PCR-SSCP分析。由圖1可知，P1擴(kuò)增片段有3種帶型，分別定義為AA、AB、BB。

2.2序列分析結(jié)果

測(cè)序結(jié)果（圖2）顯示，P1引物擴(kuò)增的IGF2基因外顯子1檢測(cè)到2個(gè)突變位點(diǎn)：1個(gè)為C-A突變，導(dǎo)致蘇氨酸變化為賴氨酸；另一個(gè)為G-A突變，導(dǎo)致丙氨酸變成蘇氨酸。

2.3IGF2基因P1引物擴(kuò)增的不同基因型與生產(chǎn)性能的關(guān)聯(lián)分析

由表1可知：在4周齡，AA基因型體質(zhì)量顯著低于AB基因型（P<0.05）。

3討論

SNPs指基因組中單個(gè)核苷酸的變異引起的DNA序列多態(tài)性，包括堿基轉(zhuǎn)換（A與G之間或T與C之間的替換）、顛換（嘌呤和嘧啶之間的替換）、單堿基插入或缺失等變化，而且其中最少的一種等位基因在群體中的頻率不低于1%。研究表明，DNA序列中單個(gè)堿基發(fā)生轉(zhuǎn)換、顛換約占DNA變異的90%以上，是最常見的一種變異形式[7]。本試驗(yàn)在雞的IGF2基因外顯子1中檢測(cè)到2個(gè)突變位點(diǎn)，1個(gè)為C-A顛換，導(dǎo)致蘇氨酸變化為賴氨酸，另一個(gè)為G-A轉(zhuǎn)換，導(dǎo)致丙氨酸變化為蘇氨酸；P1位點(diǎn)AA型個(gè)體4周齡體質(zhì)量顯著低于AB型（P<0.05），因此初步認(rèn)為AB與4周齡體質(zhì)量呈正相關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

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