漢　利　王新偉　單恒云　張　曉

(山東省日照市中醫(yī)醫(yī)院外一科，日照，276800)

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大柴胡湯加減方對(duì)肝功能和凝血機(jī)制的作用研究

漢利王新偉單恒云張曉

(山東省日照市中醫(yī)醫(yī)院外一科，日照，276800)

摘要目的：探討大柴胡湯加減方對(duì)肝功能和凝血機(jī)制的作用。方法：50只大鼠隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組(A組)10只，模型組(B組)20只，大柴胡湯組(C組)20只。C組大鼠于造模前2 d分別灌胃大柴胡湯10 mL/(kg·d)，A、B組予同等劑量0.9%氯化鈉注射液灌胃，B、C組大鼠均采用皮下注射硫代乙酰胺0.2 g/kg，24 h后相同劑量重復(fù)皮注1次，48 h后完成急性肝衰竭動(dòng)物模型，首次注射硫代乙酰胺的大鼠，予皮下注射10%葡萄糖注射液0.25 g/kg。觀察造模完成后繼續(xù)予大柴胡湯灌胃3 d，A組大鼠予同等劑量0.9%氯化鈉注射液灌胃，3 d后取血處死所有大鼠，保存大鼠血清和病理組織。觀察3組大鼠病理組織、肝功能(ALT、AST、ALB、CHE)、凝血功能(PT)指標(biāo)的情況。結(jié)果：與模型組比較，大柴胡湯組大鼠組織肝衰竭減輕；模型組大鼠ALT、AST、TBiL與正常組大鼠比較，明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組大鼠ALB、CHE與正常組大鼠比較，顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，大柴胡湯組大鼠ALT、AST、TBiL與模型組大鼠比較，明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，大柴胡湯組大鼠ALB、CHE與正常組大鼠比較，顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組大鼠PT與正常組大鼠比較，明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，大柴胡湯組大鼠PT與模型組大鼠比較，明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：大柴胡湯加減方對(duì)肝功能和凝血機(jī)制具有保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞大柴胡湯加減；肝功能；凝血機(jī)制；急性肝衰竭；研究

急性肝衰竭(Acute Hepatic Ailure，AHF)是由多種因素引起的嚴(yán)重肝功能損害，導(dǎo)致其合成、解毒、排泄和生物等功能發(fā)生嚴(yán)重失代償，主要出現(xiàn)以凝血機(jī)制障礙、黃疸、腹水等為主要表現(xiàn)的一組臨床綜合征。具有起病迅速、進(jìn)展快、預(yù)后差等特點(diǎn)[1]，死亡率高達(dá)70%以上[2]。西醫(yī)治療主要是保肝、抗炎、抗纖維化，其中人工肝支持系統(tǒng)[3]雖然是目前最有效的治療急性肝衰竭的方法，但價(jià)格昂貴，且具有嚴(yán)格的禁忌和適應(yīng)證。中醫(yī)中藥注重“整體觀念”，因不良反應(yīng)較小、價(jià)格便宜、備受人們青睞，經(jīng)方的現(xiàn)代臨床運(yùn)用展現(xiàn)了獨(dú)特的魅力，在各系統(tǒng)疾病中取得了肯定的療效。為此，本研究選用大柴胡湯加減，探討對(duì)急性肝衰竭大鼠肝功能和凝血功能作用的機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用清潔級(jí)大鼠50只，體重220～240 g，雌雄各半,上海奉賢輝煌養(yǎng)殖場(chǎng)提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK(滬)2009-0022。

1.2主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑主要實(shí)驗(yàn)儀器：離心機(jī)采用德國(guó)HETTICH，型號(hào)：MIKRO 120；全自動(dòng)生化儀：意大利愛(ài)康ECHO-PLUS；顯微鏡：奧林巴斯CX31-32C02；病理組織切片機(jī)：歐貝爾生產(chǎn)的micro Tec旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)。

主要實(shí)驗(yàn)試劑：硫代乙酰胺:上海萬(wàn)疆生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBiL)、白蛋白(ALB)、膽堿酯酶(CHE)和凝血酶原時(shí)間(PT)試劑盒由南京建成生物工程研究所有限公司生產(chǎn)。大柴胡湯加減方組成[4]：柴胡15 g、黃芩10 g、白芍10 g、半夏10 g、茵陳15 g、枳實(shí)10 g、大黃9 g、黃芪30 g、生姜3片、金錢(qián)草15 g、木香15 g。藥液制備方法：500 mL清水浸泡重要20 min，煮沸后文火煎15 min，過(guò)濾藥液，同樣方法熬取第二遍，取兩次藥液混合，恒溫水浴濃縮至100 mL，2～8 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。給藥劑量參考《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》[5]：按人與大鼠體表面積折算等效劑量經(jīng)口灌胃大柴胡湯10 mL/(kg·d)。

2實(shí)驗(yàn)方法

分組：50只大鼠隨機(jī)分為3組，正常對(duì)照組(A組)10只，模型組(B組)20只，大柴胡湯組(C組)20只。造模方法[6]:C組大鼠于造模前2 d分別灌胃大柴胡湯10 mL/(kg·d)，A、B組予同等劑量0.9%氯化鈉注射液灌胃，繼而B(niǎo)、C組大鼠均采用皮下注射硫代乙酰胺0.2 g/kg，24 h后相同劑量重復(fù)皮注1次，48 h后完成急性肝衰竭動(dòng)物模型，同時(shí)首次注射硫代乙酰胺后，予大鼠皮下注射10%葡萄糖注射液0.25 g/kg，頻次為每12 h。參考AHF的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]：急性起病，2周內(nèi)出現(xiàn)Ⅱ度及以上肝性腦病并合并以下癥狀：1)極度乏力，有嚴(yán)重消化道癥狀；2)黃疸短期進(jìn)行性加深；3)明顯出血傾向，血漿凝血酶原活動(dòng)度PTA≤40%；4)肝臟進(jìn)行性縮??；5)肝細(xì)胞呈大塊或亞大塊壞死，或橋接壞死。觀察造模完成后繼續(xù)予大柴胡湯灌胃3 d，A組大鼠予同等劑量0.9%氯化鈉注射液灌胃，3 d后取血處死所有大鼠，于3 500 r/min離心10 min分離血清，并迅速剪取相同部位的肝臟組織用預(yù)冷氯化鈉溶液進(jìn)行勻漿，制成10%勻漿液,于4 000 r/min離心10 min分離上清液,將分離的血清和肝勻漿液保存-80 ℃冰箱待測(cè)。肝臟病理組織制備如下：取相同部位的肝組織10%中性甲醛固定，沖洗，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，最后染色。

3檢測(cè)指標(biāo)

觀察3組大鼠病理組織、肝功能(ALT、AST、ALB、CHE)、凝血功能(PT)指標(biāo)的情況。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

5結(jié)果

5.1大柴胡湯加減方對(duì)病理組織的作用在電鏡下觀察，正常組大鼠的肝細(xì)胞形態(tài)良好肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝板排列整齊，肝細(xì)胞無(wú)變性、壞死(見(jiàn)圖1)；模型組可見(jiàn)大量肝細(xì)胞壞死、變性，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，殘留少量肝細(xì)胞,但嚴(yán)重變性、腫脹，有明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，說(shuō)明造模成功(見(jiàn)圖2)；大柴胡湯組可見(jiàn)肝小葉結(jié)構(gòu)尚完整，肝板排列欠整齊，肝小葉內(nèi)可見(jiàn)點(diǎn)片狀壞死,匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，與模型組比較，肝細(xì)胞壞死程度輕微(見(jiàn)圖3)。

圖1　正常組大鼠病理組織　圖2　模型組大鼠病理組織

圖3　大柴胡湯組大鼠病理組織

5.2大柴胡湯加減方對(duì)肝功能的作用模型組大鼠ALT、AST、TBiL與正常組大鼠比較，明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);模型組大鼠ALB、CHE與正常組大鼠比較，顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；大柴胡湯組大鼠ALT、AST、TBiL與模型組大鼠比較，明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);大柴胡湯組大鼠ALB、CHE與正常組大鼠比較，顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　3組大鼠肝功能指標(biāo)比較

注：與正常組比較*P<0.05，與模型組比較#P<0.05。

5.3大柴胡湯加減方對(duì)凝血功能的作用模型組大鼠PT與正常組大鼠比較，明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);大柴胡湯組組大鼠PT與模型組大鼠比較，明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2　3組大鼠凝血指標(biāo)比較±s)

注：與正常組比較*P<0.05，與模型組比較#P<0.05。

6討論

大柴胡湯一方首見(jiàn)于《傷寒論》和《金匱要略》，由柴胡、黃芩、半夏、枳實(shí)、芍藥、大黃、生姜、大棗組成，主治少陽(yáng)病兼里實(shí)之癥，后世醫(yī)家將其廣泛應(yīng)用于臨床，多有效驗(yàn)?？梢灾委熌懯Y[8]、膽囊炎、膽道蛔蟲(chóng)，急性水腫性胰腺炎及其保護(hù)胰腺作用，治療急性傳染性肝炎、慢性肝炎、肝膿瘍等[9]。本研究大柴胡湯加減方中，柴胡味苦、微寒，歸肝膽實(shí)經(jīng)，主要成分為揮發(fā)油、柴胡皂苷，以及多糖等；黃芩味苦性寒，入肺、大小腸、脾、膽經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效，研究發(fā)現(xiàn)柴胡-黃芩藥對(duì)，共奏“透散半表之邪、清瀉半里之熱”之功，具有解熱、抗炎和保肝作用[10]。楊廣棟等[11]發(fā)現(xiàn)茵陳具有很好的保肝降酶、利膽退黃之功,有一定的利尿作用，在調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、調(diào)節(jié)血脂水平等方面,亦有良好效果。大黃、金錢(qián)草味苦、性寒，生大黃提取物能明顯改善硫代乙酞胺誘導(dǎo)的肝性腦病大鼠的神經(jīng)反射，顯著降低血氨、血漿內(nèi)毒素濃度,減輕肝臟病理?yè)p傷[12]；也有學(xué)者認(rèn)為[13]金錢(qián)草乙醇提取物對(duì)肝損傷具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與降低小鼠肝脂質(zhì)過(guò)氧化、增強(qiáng)超氧化物歧化酶及過(guò)氧化氫酶活力有關(guān)，且金錢(qián)草提取物保肝活性可能與其所含槲皮素和山柰酚的含量多少有關(guān)。急性肝衰竭，往往為邪盛正虛，正氣不足無(wú)力抵御外邪導(dǎo)致發(fā)病，正氣不足是其發(fā)病的關(guān)鍵因素，黃芪性味甘、微溫，歸肺、脾、肝、腎經(jīng)，能補(bǔ)一身之氣。方中加此味藥，意在防止苦寒諸藥傷及正氣，“正氣存內(nèi)，邪不可干”，眾多報(bào)道黃芪主要成分有多糖、皂苷、黃酮、氨基酸及微量元素，可抗纖維化，在體內(nèi)、體外都可促進(jìn)人臍干細(xì)胞生長(zhǎng)并分化為肝細(xì)胞[14]，減少肝臟損耗，同時(shí)對(duì)體液免疫、細(xì)胞免疫、非特異性免疫，均有顯著的免疫雙向調(diào)節(jié)作用[15]。白芍柔肝止痛，枳實(shí)破氣消積，白芍-枳實(shí)藥對(duì)還可治療復(fù)雜病情，調(diào)和藥物之間的偏性，減少藥物不良反應(yīng)[16]。肝病患者多有胃腸消化道不適，半夏、生姜降逆止嘔，生姜并可以顧護(hù)胃氣。木香理氣健脾，脾氣健，則精微有所化生。諸藥共奏清肝利膽，補(bǔ)中益氣之功效。本實(shí)驗(yàn)急性肝衰竭大鼠通過(guò)大柴胡湯加減方的干預(yù)，肝功能和凝血機(jī)制均有不同程度的改善，這與以上研究是一致的。

綜上所述，大柴胡湯加減方對(duì)大鼠的肝功能和凝血功能具有保護(hù)的作用，但本實(shí)驗(yàn)仍屬于初步探索階段，樣本量較少，且如何把握藥物的最佳用量需要進(jìn)一步探索。臨床實(shí)際急性肝衰竭患者的病情更是多種多樣，中醫(yī)中藥在該領(lǐng)域具有廣闊的前景，怎樣將中醫(yī)藥運(yùn)用實(shí)踐，提高患者生存質(zhì)量，需要廣大醫(yī)務(wù)工作者不斷努力。

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(2016-01-08收稿責(zé)任編輯：洪志強(qiáng))

Research of Modified Major Bupleurum Decoction's Effect on Liver Function and Blood Coagulation Mechanism

Han li，Wang Xinwei，Shan Hengyun，Zhang Xiao

(RizhaoCityHospitaloftraditionalChineseMedicine,Rizhao276800，China)

AbstractObjective:To evaluate the Modified Major Bupleurum Decoction's effect on liver function and blood coagulation mechanism.Methods:A total of 50 rats were randomly divided into three groups:normal group (A group) with 10 rats,model group (B group) with 20 rats and Bupleurum Decoction group (C group) with 20 rats.C group were given 10 mL/(kg.d) oral Bupleurum Decoction 2 days before modeling.A and B group were given the same dose of 0.9%NaCl.B and C group rats were given subcutaneous injection of thioacetamide 0.2 g/kg per 24h for two days and then the acute liver failure models were established.For rats injected with thioacetamide for the first time,10%GS 0.25 g/kg were also administrated.After the model was established,Major Bupleurum Decoction lavage were given for three days,and A group rats were given the same dose of 0.9%NaCl.Three days later,all the rats were killed to take blood sample,and rats serum and tissue pathology were kept after 3 days.Pathological tissue,liver function indexes (ALT,AST,ALB,CHE),blood coagulation function indexes (PT) were compared among the three groups.Results:Compared with model group,the tissue of Major Bupleurum Decoction group was better; ALT,AST,TBiL of model group leveled up significantly compared with normal group rats(P<0.05),ALB and CHE of model group rats decreased significantly compared with normal group (P<0.05).Compared with model group,ALT,AST,TBiL of Major Bupleurum Decoction group decreased significantly(P<0.05),ALB、CHE of Major Bupleurum Decoction group increased significantly (P<0.05); PT of model group increased significantly compared with the normal group(P<0.05),PT of Major Bupleurum Decoction group decreased significantly compared with model group(P<0.05).Conclusion:Modified Major Bupleurum Decoction plays a protective role in liver function and blood coagulation mechanism.

Key WordsMajor Bupleurum Decoction; Liver function; Blood coagulation mechanism; Acute hepatic failure; Research

中圖分類號(hào)：R289.1;R575.3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.06.034