李宗河， 王日方彤， 陳小平， 李艷友

(1.成都大學 四川抗菌素工業(yè)研究所抗生素研究與再評價四川重點實驗室， 四川 成都　610052；2.北京嘉事聯(lián)博醫(yī)藥科技有限公司， 北京　100076)

?

D-異苯環(huán)戊胺對小鼠急性毒性和一般行為活動及自主活動的影響實驗

李宗河1， 王日方彤1， 陳小平2， 李艷友2

(1.成都大學 四川抗菌素工業(yè)研究所抗生素研究與再評價四川重點實驗室， 四川 成都610052；2.北京嘉事聯(lián)博醫(yī)藥科技有限公司， 北京100076)

摘要：目的：觀察D-異苯環(huán)戊胺單次灌胃給藥對小鼠的急性毒性和一般性無活動、自主活動的影響.方法：通過對實驗動物灌胃單次給予0.5 g·kg-1、0.8 g·kg-1、1.4 g·kg-1和2.4 g·kg-1劑量的D-苯異環(huán)戊胺后，觀察給藥后產(chǎn)生的急性毒性反應情況；分別給小鼠單次灌胃20 mg·kg-1、90 mg·kg-1和400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺后，觀察對小鼠一般行為活動和自主活動的影響.結果：急性毒性實驗結果顯示，D-異苯環(huán)戊胺小鼠灌胃單次給藥在劑量0.5 g.kg-1、0.8 g·kg-1、1.4 g·kg-1和2.4 g·kg-1時呈劑量—效應關系，其最大無毒性反應劑量接近0.5 g·kg-1，最大耐受量為1.4 g·kg-1，最低致死劑量為2.4 g·kg-1；各劑量D-異苯環(huán)戊胺單次灌胃給藥均未見對小鼠一般行為活動和自主活動有明顯影響.結論：D-異苯環(huán)戊胺單次灌胃給藥對小鼠最大耐受量為1.4 g·kg-1，最低致死劑量為2.4 g·kg-1，無嚴重急性毒性反應，該化合物無嚴重急性中毒的風險；單次灌胃給藥20 mg·kg-1、90 mg·kg-1和400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺對小鼠一般行為活動和自主活動沒有明顯影響.

關鍵詞：D-異苯環(huán)戊胺；一般行為；自主活動

0引言

肥胖已成為一種全球性的威脅人類健康的流行病，且肥胖患者較正常人更易罹患冠心病、高血壓、高脂血癥、糖尿病、腦血管意外等，特別是內(nèi)臟脂肪堆積常伴隨胰島素抵抗或II型糖尿病、高尿酸血癥等所謂的代謝綜合征發(fā)生[1]，全球每年因此而死亡的人數(shù)大概有 300 萬，世界衛(wèi)生組織將肥胖認定為全球成人最大的慢性疾病[2-3].西布曲明是一種減肥輔助治療藥物，2010年10月SFDA綜合國內(nèi)外監(jiān)測和研究資料的評估結果以及國內(nèi)臨床專家的意見，認為西布曲明可能會造成嚴重心血管風險，減肥治療的風險大于效益，建議治療肥胖的患者與醫(yī)生商討可替代的藥物.D-異苯環(huán)戊胺是通過對雙脫甲基西布曲明結構上的游離氨基進行氨基酸?；男揎椂@得的新化合物，通過動物模型實驗，證明D-異苯環(huán)戊胺對肥胖模型大鼠均有不同程度的減肥作用，臟器系統(tǒng)解剖觀察未見異常，其作用甚至優(yōu)于西布曲明[4].研究還發(fā)現(xiàn)，D-異苯環(huán)戊胺可降低大鼠體脂質(zhì)量、減小脂肪細胞直徑、增加脂肪細胞個數(shù)，同時能顯著降低肥胖大鼠的血糖、血脂水平，改善肥胖大鼠的代謝紊亂狀況[5].為確保D-異苯環(huán)戊胺使用的安全性，本實驗進行了D-異苯環(huán)戊胺對小鼠急性毒性和一般行為活動及自主活動的影響的研究，擬為D-異苯環(huán)戊胺的臨床研究提供安全依據(jù).

1材料

1.1藥物與試劑

D-異苯環(huán)戊胺，由北京嘉事聯(lián)博醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)提供，用滅菌蒸餾水配制成所需濃度.

1.2動物

昆明種(KM)小鼠，體質(zhì)量18～22 g，SPF級，實驗中選擇檢疫合格的動物，雌雄各半，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司(許可證號：SCXK(滬)2007-0005)，飼養(yǎng)于中國醫(yī)藥集團安全性評價研究中心屏障系統(tǒng)內(nèi).飼料為鼠全價顆粒飼料，由上海斯萊克實驗動物有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)許可證號，滬飼審(2008)04002)，符合GB14924.3-2001標準，經(jīng)鈷60照射滅菌后使用；飲用水為高壓蒸汽滅菌的自來水，參照國標GB/T14925-94和GB5749-85， 每6個月檢測一次，由第三方進行，檢測結果符合國家標準.

1.3儀器

ZIL-2型程控自主活動箱，中國醫(yī)學科學院藥物研究所生產(chǎn).

2方法

本實驗嚴格按照《化學藥物一般藥理學研究技術指導原則》要求進行設計實施.

2.1灌胃D-異苯環(huán)戊胺對小鼠急性毒性實驗

將檢疫合格小鼠隨機分5組：溶媒對照組、D-異苯環(huán)戊胺低、中、高、較高4個劑量組，每組10只，雌雄各半，D-異苯環(huán)戊胺低、中、高、較高劑量組，分別給小鼠灌胃給予0.5 g·kg-1、0.8 g·kg-1、1.4 g·kg-1和2.4 g·kg-1的配制液，溶媒對照組給予等容積蒸餾水.給藥后進行籠旁觀察和記錄，連續(xù)2周，每天觀察至少2次，每周稱量體質(zhì)量2次.觀察結束后對動物進行系統(tǒng)解剖觀察.

2.2灌胃D-異苯環(huán)戊胺對小鼠一般行為活動影響

參照文獻[6-7]中的相關方法，將檢疫合格的小鼠按體質(zhì)量隨機分為4組：溶媒對照組與D-異苯環(huán)戊胺低、中、高3個劑量組，每組10只，雌雄各半，D-異苯環(huán)戊胺低、中、高劑量動物組分別單次灌胃給予20 mg·kg-1、90 mg·kg-1、400 mg·kg-1的配制液，溶媒對照組給予等容積蒸餾水，給藥后即刻觀察動物的一般行為表現(xiàn)、姿勢、步態(tài)、有無流涎、肌顫等變化，觀察至給藥結束后24 h.

2.3灌胃D-異苯環(huán)戊胺對小鼠自法活動影響

參照文獻[6-7]中的相關方法，將檢疫合格的小鼠按體質(zhì)量分層隨機分為5組：溶媒對照組和D-異苯環(huán)戊胺低、中、高3個劑量組及陽性對照組，每組12只，雌雄各半，D-異苯環(huán)戊胺低、中、高劑量組動物分別灌胃給予20 mg·kg-1、90 mg·kg-1、400 mg·kg-1的配制液，陽性對照艾司唑侖劑量為5 mg·kg-1，溶媒對照組給予等容積蒸餾水，給藥1 h后進行試驗.根據(jù)平行對照的原則，每次從不同組里按順序取1只小鼠放入獨立的自主活動箱內(nèi)，待其適應5 min后開始記錄10 min內(nèi)各箱內(nèi)小鼠活動數(shù).

2.4統(tǒng)計學方法

3結果

3.1灌胃D-異苯環(huán)戊胺對小鼠一般行為活動影響

實驗發(fā)現(xiàn)：1.4 g·kg-1和2.4 g·kg-1劑量組動物給藥后1 h后出現(xiàn)興奮竄跳現(xiàn)象，3 h左右出現(xiàn)困乏嗜睡現(xiàn)象，2.4 g·kg-1劑量組1只雄性動物死亡，24 h后恢復正?；顒?；各組存活小鼠體重增長變化沒有明顯差異，經(jīng)大體解剖未發(fā)現(xiàn)組織器官有明顯異常.具體體質(zhì)量變化見表1、表2.

表1　D-異苯環(huán)戊胺灌胃小鼠單次給藥毒性試驗雌性動物給藥后體質(zhì)量統(tǒng)計表±s)

表2　D-異苯環(huán)戊胺灌胃小鼠單次給藥毒性試驗

3.2灌胃D-異苯環(huán)戊胺對小鼠一般行為活動影響

實驗發(fā)現(xiàn)：在對小鼠灌胃20 mg·kg-1、90 mg·kg-1和400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺和等體積的蒸餾水后至給藥后240 min，觀察小鼠的一般行為表現(xiàn)、姿勢、步態(tài)等變化，未見D-異苯環(huán)戊胺對小鼠有主要藥效學以外的一般行為活動的影響.

3.3灌胃D-異苯環(huán)戊胺對小鼠自主活動影響

實驗發(fā)現(xiàn)：在對小鼠灌胃給予20 mg·kg-1、90 mg·kg-1、400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺后，90 mg·kg-1和400 mg·kg-1組小鼠自主活動次數(shù)有減少趨勢，但與溶媒對照組比較P>0.05，差異無統(tǒng)計學意義.檢測結果詳見表3.

表3　灌胃D-異苯環(huán)戊胺對小鼠自主活動的影響±s)

注：**表示與溶媒對照組比較，P<0.01.

4討論

在過去的幾十年里，絕大多數(shù)減肥藥物上市后由于嚴重的不良反應而相繼撤出市場[8]，時隔13年之后，美國FDA于2012年6月批準了由Arena 制藥有限公司和衛(wèi)材公司合作開發(fā)的鹽酸勞卡色林片劑(lorcaserin hydrochloride/Belvig)，用作飲食和運動療法的輔助用藥，長期管理成人肥胖(體質(zhì)指數(shù)≥30 kg/m2)或至少有1種與體重相關共患疾病如高血壓、高脂血癥、2型糖尿病或中心型肥胖的超重(體質(zhì)指數(shù)≥27 kg/m2)患者的體質(zhì)量.鹽酸勞卡色林屬選擇性5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受體亞型5-HT2C受體激動劑，能經(jīng)特異性地刺激腦中的5-HT2C受體而促使產(chǎn)生飽腹感和降低食欲效應[9].有報道指出：鹽酸勞卡色林在臨床試驗中用于治療不患有2型糖尿病的肥胖或超重患者的最常見不良反應是頭痛、頭暈、疲乏、惡心、口干和便秘；用于治療患有2型糖尿病的肥胖或超重患者的最常見不良反應是低血糖癥、頭痛、腰痛、咳嗽和疲乏[10].

D-異苯環(huán)戊胺是經(jīng)西布曲明通過去甲基和經(jīng)氨基修飾改構的新化合物，西布曲明在動物體內(nèi)迅速代謝為活性代謝物M1和M2，M1和M2的藥理作用是對NA和5-HT再攝取的抑制作用[11]，體外實驗顯示，M2可以增強胰島素對肌肉細胞攝取葡萄糖的促進作用[12].Coletta等[13]研究發(fā)現(xiàn)，M2可降低小鼠血糖，呈劑量依賴性，M2干預的小鼠其肌肉對葡萄糖的攝取能力也顯著增強.本實驗結果顯示：灌胃D-異苯環(huán)戊胺對小鼠最大耐受量為1.4 g·kg-1，最低致死劑量為2.4 g·kg-1，LD50明顯大于2000 mg·kg-1，無嚴重急性毒性反應風險；灌胃20 mg·kg-1、90 mg·kg-1和400 mg·kg-1的D-異苯環(huán)戊胺，對小鼠一般行為活動和自主活動沒有明顯影響，其中劑量400 mg·kg-1相當于藥效學等效劑量的40倍，臨床擬用劑量的190.5倍.相關調(diào)查發(fā)現(xiàn)，同類上市藥物鹽酸勞卡色林屬選擇性5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受體亞型5-HT2C受體激動劑，臨床常見不良反應有低血糖癥、疲乏等.所以，在D-異苯環(huán)戊胺的其他試驗研究和臨床應用中需關注這些方面的影響和不良反應.

在減肥藥的開發(fā)中，科研人員需要更細致地搞清導致肥胖的機理和藥物作用的靶向[14]，結合D-異苯環(huán)戊胺的藥效和毒性作用的進一步研究，希望其能成為毒副作用小、減肥效果好的新減肥藥物，彌補國產(chǎn)減肥藥空缺.

參考文獻：

[1]Calle E E,Rodriguez C,Walker-Thurmond K,et al.Overweight,obesity,andmortalityfromcancerinaprospectivelystudiedcohortofU.S.adults[J].N Engl Med,2003，348(17):1625-1638.

[2]Khaodhiar L，Cummings S，Apovian C M．Treatingdiabetesandprediabetesbyfocusingonobesitymanagement[J]．Curr Diabetes Rep,2009,9(5):348-354．

[3]Tziomalos K，Dimitroula H V，Katsiki N，et al．Effectsoflifestylemeasures，antiobesityagents，andbariatricsurgeryonserologicalmarkersofinflammationinobesepatients[J]．Mediators Inflamm，2010;2010:364957．

[4]丁浩，溫守明，趙書強，等．苯基環(huán)丁基酰胺衍生物及其光學異構體、制備方法和用途：CN200810103525[P].2008-04-01.

[5]李娟，何海霞，周遠大，等．D-異苯環(huán)戊胺對營養(yǎng)性肥胖模型大鼠的減肥作用研究[J].中國藥房,2010,(21)29:2738.

[6]徐叔云，卞如濂，陳修．藥理實驗方法學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:.

[7]呂秋軍.新藥藥理學研究方法[M].北京:化學工業(yè)出版社,2007.

[8]Astrup A.Drugmanagementofobesity-efficacyversussafety[J]. N Engl J Med，2010，363(3)：288-290.

[9]Smith S R,Prosser W A,Donahue D J,et al.Lorcaserin(APD356),aselective5-HT2Cagonist,reducesbodyweightinobesemenandwomen[J].Obesity，2009,17(3):494-503.

[10]馬培奇.抗肥胖藥物研究進展[J].上海醫(yī)藥,2013，34(5):52-55.

[11]Heal D J，Aspley S，Prow M R，et al．Sibutramine:anovelanti-obesitydrug．Areviewofthepharmacologicalevidencetodifferentiateitfromd-amphetamineandd-fenfluramine[J]．Int J Obes Relat Metab Disord，1998，22(Sup.1):18-28．

[12]Bailey C J，Turner S L，Bates S H，et al．Sibutraminemetabolitesincreaseglucosetransportbyculturedratmusclecells[J]．Int J Obes Relat Metab Disord，2001，25(4):478-485．

[13]Coletta D K，Bates S H，Jones R B，et al．ThesibutraminemetaboliteM2improvesmuscleglucoseuptakeandreduceshepaticglucoseoutput:preliminarydata[J]．Diab Vasc Dis Res，2006，3(3):186-188．

[14]王進.減肥藥開發(fā)成“燙手山芋”[J].中國處方藥,2010，10(103):12.

Experiments on Effects of D-iso-phenylcyclopentylamine on Mice Acute Toxity,and Their General and Spontaneous Activities

LIZonghe1,WANGFangtong1,CHENXiaoping2,LIYanyou2

(1.Antibiotics Research and Re-evaluation Key Laboratory of Sichuan Province,Sichuan Industrial Institute of Antibiotics, Chengdu University, Chengdu 610052, China;2.Beijing Cachet Biomedical Co., Ltd., Beijing 100076, China)

Abstract：The paper is going to observe the effects of D-iso-phenylcyclopentylamine(D-IPCPA) on mice's acute toxicity,and their general and spontaneous activities.The acute toxicity reaction of mice was observed after being given single intragastric administration with different doses(0.5,0.8,1.4 and 2.4 g·kg-1) of D-IPCPA.Then,mice were given single intragastric administration with different doses(20,90,400 mg·kg-1) of D-IPCPA,after which their general and spontaneous activities were observed.The results show that D-IPCPA demonstrates dose-dependent relationship at the dose of 0.5,0.8,1.4 and 2.4 g·kg-1.The largest non-toxic reaction dose is close to 0.5 g·kg-1.The maximum tolerance dose and minimum lethal dose is 1.4 and 2.4 g·kg-1.D-IPCPA has no significant influence on mice's general and spontaneous activities.The conclusion drawn from experiments is that the maximum tolerance dose and minimum lethal dose is 1.4 and 2.4 g·kg-1respectively.There are no acute toxicity effects of D-IPCPA on mice.The compound demonstrates no risk of acute toxicity.D-IPCPA has no significant influence on mice general and spontaneous activities when mice are given intragastric administration at the dose of 20,90 and 400 mg·kg-1.

Key words：D-iso-phenylcyclopentylamine;general activities;spontaneous activities

文章編號：1004-5422(2016)02-0116-04

收稿日期：2016-04-16.

基金項目：成都大學校青年基金項目(2015XJZ29).

作者簡介：李宗河(1980 — )， 男， 碩士， 助理研究員， 從事抗腫瘤藥效試驗與新藥安全性評價研究.

中圖分類號：R965

文獻標志碼：A