寧軍號,白偉,宋堅(jiān),張曉森,常亞青
(大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧大連116023)
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4種重金屬離子對偏頂蛤的急性毒性效應(yīng)
寧軍號,白偉,宋堅(jiān),張曉森,常亞青
(大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧大連116023)
摘要:為探究偏頂蛤Modiolus modiolus對幾種重金屬離子的耐受能力,在水溫為21~23℃、鹽度為32.1、pH為8.2的試驗(yàn)條件下,采用靜水試驗(yàn)法研究了Pb2+、Zn2+、Cu2+、Cd2+對濕質(zhì)量為 (73.28±6.11)g的成體偏頂蛤的急性毒性作用。結(jié)果表明:偏頂蛤死亡率隨重金屬離子濃度的升高而增大,表現(xiàn)出明顯的劑量—效應(yīng)關(guān)系;4種重金屬離子對試驗(yàn)蛤48、72、96 h的半數(shù)致死質(zhì)量濃度 (LC50)分別為Pb2+372.392、223.357、129.122 mg/L,Zn2+292.415、113.501、62.230 mg/L,Cu2+3.373、1.189、0.506 mg/L,Cd2+106.170、47.973、24.949 mg/L;Pb2+、Zn2+、Cu2+、Cd2+對偏頂蛤的安全濃度分別為 1.291、0.622、0.005、0.250 mg/L。研究表明,單一金屬對偏頂蛤的毒性大小依次為Cu2+>Cd2+>Zn2+>Pb2+,其中Cu2+對偏頂蛤?qū)儆诟叨拘?,而偏頂蛤?qū)b2+、Cd2+均具有極強(qiáng)的耐受性。
關(guān)鍵詞:偏頂蛤;重金屬離子;半致死濃度;安全濃度
偏頂蛤Modiolus modiolus隸屬于軟體動物門Mollusca、瓣鰓綱 Lamellibranchia、異柱目 Anisomyaria、貽貝科Mytilidea,俗稱毛海紅,該蛤自潮間帶以下至水深50 m等海域均有分布,在中國主要分布于黃、渤海海域[1-2]。偏頂蛤在大連地區(qū)較為常見,因其個(gè)體大、肉味鮮美、營養(yǎng)價(jià)值高、脂防低[3-4],深受消費(fèi)者喜愛,是一種具有較大開發(fā)前景的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)貝類[5]。
隨著中國經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展,大量含重金屬的污染物排入河流、湖泊和近岸海域,嚴(yán)重威脅海洋生物健康和近岸海域生態(tài)系統(tǒng)的安全[6-7]。近年來,盡管中國加強(qiáng)了對陸源重金屬等污染物排放的監(jiān)管和控制,并取得明顯成效,但近岸海域鎘、汞等重金屬離子超標(biāo)排放問題仍然存在[7]。重金屬對水產(chǎn)動物的危害主要表現(xiàn)為極強(qiáng)富集和濃縮作用,不僅影響其正常生長、繁衍,嚴(yán)重時(shí)還導(dǎo)致其死亡[8]。偏頂蛤天然儲量日益枯竭的原因之一便是海域重金屬污染。重金屬亦可通過食物鏈傳遞,引發(fā)人類食物中毒等健康問題[9]。
目前,國內(nèi)外關(guān)于重金屬對魚類[7-8]、貝類[6,10-14]、刺參[9]等海洋生物的毒性研究較多,而有關(guān)重金屬對偏頂蛤的急性毒性研究尚未見報(bào)道。偏頂蛤營底棲群居生活,重金屬對其富集和濃縮效應(yīng)更劇烈。為此,本研究中進(jìn)行了 Pb2+、Cu2+、Zn2+、Cd2+對偏頂蛤的急性毒性試驗(yàn),旨在探究偏頂蛤?qū)ι鲜?種重金屬離子脅迫的敏感性,以期為其養(yǎng)殖環(huán)境的監(jiān)控、保護(hù)研究提供依據(jù)。
1.1材料
試驗(yàn)用偏頂蛤采自大連海域,殼長為(78.42±5.13)mm,濕質(zhì)量為 (73.28±6.11)g,將試驗(yàn)蛤運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)一周后開始試驗(yàn)。
試驗(yàn)用試劑均為分析純,CdCl2·2.5H2O(分子量為228.35)由天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司生產(chǎn),Pb(NO3)2(分子量為331.21)由天津市大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn),ZnSO4·7H2O(分子量為287.56)、CuSO4·5H2O(分子量為249.61)由天津市博迪化工股份有限公司生產(chǎn)。上述4種分析純均用雙蒸水將其配制成母液裝于棕色磨口瓶中,避光冷藏備用。試驗(yàn)時(shí),將母液用過濾海水按所設(shè)系列濃度稀釋,現(xiàn)配現(xiàn)用。
1.2方法
偏頂蛤暫養(yǎng)期間持續(xù)充氣,早晚各換水1次,換水后投喂,餌料為湛江等鞭金藻Isochrysis zhanjiangensis,輔以市售螺旋藻粉。試驗(yàn)前24 h停止飼喂,試驗(yàn)蛤挑選健康活潑、殼形完整的個(gè)體。海水經(jīng)三級沙濾,水溫為21~23℃,鹽度為32.1,pH 為8.2。采用靜水試驗(yàn)法,首先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn),按照等比數(shù)列和等對數(shù)間距方法設(shè)置質(zhì)量濃度,以初步確定4種重金屬離子對偏頂蛤的致死濃度范圍。Pb2+濃度設(shè)為100.00、126.00、158.50、199.50、251.00、315.23 mg/L;Cu2+濃度設(shè)為0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/L;Zn2+濃度設(shè)為25.12、39.81、63.10、100.00、158.50、251.20mg/L;Cd2+濃度設(shè)為10.00、15.85、25.12、39.81、63.10、100.00、158.50 mg/L。每個(gè)濃度組設(shè)3個(gè)平行,每個(gè)平行放14只成體偏頂蛤,同時(shí)設(shè)置空白對照。試驗(yàn)蛤放入50 L藍(lán)色聚乙烯水槽中,每個(gè)水槽注入上述配好的系列試驗(yàn)液40 L。
試驗(yàn)期間不投餌、不充氣,以保證重金屬離子濃度相對穩(wěn)定。試驗(yàn)開始后,連續(xù)8 h觀察并記錄偏頂蛤的生活情況,之后每隔1 d觀察并記錄偏頂蛤的活動狀態(tài)和死亡個(gè)體,試驗(yàn)共進(jìn)行96 h。當(dāng)試驗(yàn)蛤貝殼大開,且用玻璃棒刺激軟體部無反應(yīng),放入正常海水中5 h貝殼不能閉合時(shí),判定為死亡,及時(shí)清除死亡個(gè)體并計(jì)算存活率。
1.3數(shù)據(jù)處理
試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2010軟件進(jìn)行處理,重金屬對偏頂蛤的半致死濃度 (LC50)和95%置信區(qū)間利用SPSS 17.0軟件的Probit模塊分析處理。安全濃度 (SC)計(jì)算公式[14]為
其中AF為應(yīng)用系數(shù),本試驗(yàn)中4種重金屬均屬積累性強(qiáng)且難分解的金屬污染物,故AF取值0.01。將死亡率換算成相應(yīng)的概率單位,計(jì)算4種重金屬離子濃度的常用對數(shù)。利用SPSS 17.0軟件對急性毒性的概率單位-濃度對數(shù)進(jìn)行線性回歸分析。
2.1Pb2+對偏頂蛤的急性毒性
在 Pb2+濃度為 100.00、126.00、158.00、199.50、251.00、315.23 mg/L時(shí),分別進(jìn)行Pb2+對偏頂蛤的急性毒性試驗(yàn)。從圖1可見:在水溫為21~23℃、鹽度為32.1、pH為8.2的試驗(yàn)條件下,偏頂蛤?qū)b2+的耐受性較強(qiáng),各濃度組試驗(yàn)蛤在48 h內(nèi)的死亡率均較低,不足40%;72 h后偏頂蛤死亡率隨Pb2+質(zhì)量濃度的升高基本呈直線增加趨勢。Pb2+對偏頂蛤48、72、96 h的半致死濃度分別為372.392、223.357、129.122 mg/L,96 h安全濃度為1.291 mg/L(表1)。
圖1 Pb2+濃度對偏頂蛤急性中毒死亡率的影響Fig.1 Effect of Pb2+concentration on mortality of clam Modiolus modiolus at acute toxicity
表1 Pb2+對偏頂蛤不同暴露時(shí)間的半致死濃度Tab.1 Median lethal concentration of Pb2+to clam Modiolus modiolus at different exposure time
2.2Zn2+對偏頂蛤的急性毒性
在Zn2+濃度為25.12、39.81、63.10、100.00、158.50、251.20 mg/L時(shí),分別進(jìn)行Zn2+對偏頂蛤的急性毒性試驗(yàn)。從圖2可見,24 h內(nèi),偏頂蛤僅在Zn2+最高濃度組出現(xiàn)個(gè)別死亡,其余各組均未出現(xiàn)死亡個(gè)體;48 h時(shí)偏頂蛤死亡率仍較低,均不足30%。Zn2+對偏頂蛤48、72、96 h的半致死濃度分別為292.415、113.501、62.230 mg/L,96 h安全濃度為0.622 mg/L(表2)。
圖2 Zn2+濃度對偏頂蛤急性中毒死亡率的影響Fig.2 Effect of Zn2+concentration on mortality of clam Modiolus modiolus at acute toxicity
2.3Cu2+對偏頂蛤的急性毒性
在 Cu2+濃度為 0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/L時(shí),分別進(jìn)行Cu2+對偏頂蛤的急性毒性試驗(yàn)。從圖3可見,偏頂蛤?qū)u2+較為敏感,24 h內(nèi)偏頂蛤僅在Cu2+最高濃度組出現(xiàn)死亡個(gè)體,死亡率低于20%;48 h時(shí)除最高濃度組外,偏頂蛤死亡率均較低,不足15%。Cu2+對偏頂蛤48、72、96 h的半致死濃度分別為3.357、1.148、0.522 mg/L,96 h安全濃度為0.005 mg/L(表3)。
圖3 Cu2+濃度對偏頂蛤急性中毒死亡率的影響Fig.3 Effect of Cu2+concentration on mortality of clam Modiolus modiolus at acute toxicity
表2 Zn2+對偏頂蛤不同暴露時(shí)間的半致死濃度Tab.2 Median lethal concentration of Zn2+to clam Modiolus modiolus at different exposure time
表3 Cu2+對偏頂蛤不同暴露時(shí)間的半致死濃度Tab.3 Median lethal concentration of Cu2+to clam Modiolus modiolus at different exposure time
2.4Cd2+對偏頂蛤的急性毒性
在Cd2+濃度為10.00、15.85、25.12、39.81、63.10、100.00、158.50 mg/L時(shí),分別進(jìn)行 Cd2+對偏頂蛤的急性毒性試驗(yàn)。從圖4可見,24 h內(nèi),偏頂蛤死亡率均低于30%;48 h時(shí)Cd2+最高濃度組死亡率高達(dá)76.7%。Cd2+對偏頂蛤48、72、96 h的半致死濃度分別為 106.170、47.973、24.949 mg/L,96 h安全濃度為0.250 mg/L(表4)。
圖4 Cd2+濃度對偏頂蛤急性中毒死亡率的影響Fig.4 Effect of Cd2+on mortality of clam Modiolus modiolus at acute toxicity
3.1偏頂蛤中毒癥狀表現(xiàn)
4種重金屬離子對成體偏頂蛤均具有較強(qiáng)的毒害作用,中毒癥狀出現(xiàn)的時(shí)間不同,但癥狀基本相似。12 h內(nèi),高濃度組絕大多數(shù)試驗(yàn)蛤雙殼緊閉,少數(shù)個(gè)體貝殼微張,不伸足;低濃度組開殼個(gè)體較多,刺激可迅速閉殼,足可伸出活動,但不見分泌足絲固著,與對照組活動狀況基本一致;24~48 h內(nèi),對照組試驗(yàn)蛤均能分泌足絲重新固著生活,足伸出,活動狀態(tài)良好;重金屬離子脅迫組多數(shù)試驗(yàn)蛤閉殼,少數(shù)開殼個(gè)體刺激后可緩慢閉合;隨著攻毒時(shí)間的延長,偏頂蛤貝殼逐漸張開,刺激不能閉合,足無力伸長,出現(xiàn)產(chǎn)卵排精現(xiàn)象,精卵排放后沉于池底不擴(kuò)散,內(nèi)臟團(tuán)、外套膜、鰓開始腐爛變臭,激烈刺激后無任何收縮反應(yīng),已無生命跡象。
表4 Cd2+對偏頂蛤不同暴露時(shí)間的半致死濃度Tab.4 Median lethal concentration of Cd2+to clam Modiolus modiolus at different exposure time
3.24種重金屬離子對偏頂蛤的急性毒性效應(yīng)
本試驗(yàn)中研究了偏頂蛤?qū)?Pb2+、Cu2+、Zn2+、Cd2+4種重金屬的耐受力,獲得4種重金屬離子96 h的半致死質(zhì)量濃度。Pb2+、Zn2+、Cu2+、Cd2+對偏頂蛤96 h LC50值分別為129.122、62.230、0.522、24.949 mg/L。試驗(yàn)結(jié)果表明,4種重金屬離子對偏頂蛤毒力大小依次為Cu2+>Cd2+>Zn2+>Pb2+。孫振興等[9]研究認(rèn)為,重金屬離子對刺參幼參毒性大小依次為Cu2+>Cd2+>Zn2+>Cr6+,與本研究結(jié)果一致。林國清[11]研究認(rèn)為,重金屬離子對泥東風(fēng)螺Babylonia lutusa幼螺急性毒性大小依次為Cu2+>Zn2+>Cd2+>Pb2+,與本研究結(jié)果有所不同,推測與研究對象的種屬、規(guī)格、生活習(xí)性等差異有關(guān)。
3.34種重金屬離子對偏頂蛤的致毒機(jī)理
鉛是生物蓄積性有毒物質(zhì),對食物鏈頂層的人類健康危害尤為嚴(yán)重。Pb2+可與多種蛋白質(zhì)、酶和氨基酸內(nèi)的巰基結(jié)合,從而干擾機(jī)體正常生理、生化功能[15];Pb2+對肝、腎、性腺和血管等器官均有損害,并可引起紅細(xì)胞溶血,尤其對骨髓造血系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)損害最為嚴(yán)重[16]。
鋅是生物體所必需微量元素之一,能參與某些激素和含鋅指結(jié)構(gòu)酶的合成,以及生物體多種新陳代謝過程[17]。硫酸鋅作為常見的重金屬殺蟲藥,其作用機(jī)理是Zn2+與蟲體細(xì)胞蛋白質(zhì)結(jié)合生成蛋白鹽,使蛋白質(zhì)沉淀失活;同時(shí),Zn2+可通過結(jié)合巰基蛋白使細(xì)胞酶失活[18],從而實(shí)現(xiàn)殺蟲效果。
銅是生物富集性很強(qiáng)的污染物,對生物體的毒性與其濃度、蓄積時(shí)間呈正相關(guān)[19]。Cu2+的致毒機(jī)理是其與生物蛋白質(zhì)巰基結(jié)合使其變性,從而抑制相關(guān)酶的活性,阻斷生物正常的新陳代謝;破壞體內(nèi)抗氧化酶活力,造成生物體內(nèi)脂質(zhì)過氧化,損傷細(xì)胞甚至死亡[19-20]。
鎘對人和動物有較大危害,Cd2+可與含巰基、氨基、羧基蛋白質(zhì)分子結(jié)合,導(dǎo)致多種酶活性受到抑制,使細(xì)胞代謝失常,生理功能紊亂[13]。另外,Cd2+可通過離子通道進(jìn)入細(xì)胞,其中一部分可直達(dá)細(xì)胞核,引起遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能改變[21]。
3.44種重金屬離子安全濃度評價(jià)
本研究中,Pb2+、Zn2+、Cu2+、Cd2+對偏頂蛤的安全濃度分別為1.291、0.622、0.005、0.250 mg/L。張宜奎等[13]進(jìn)行了重金屬Cd2+、Cu2+對成體文蛤Meretrix meretrix急性毒性試驗(yàn),得出Cd2+、Cu2+對文蛤的安全濃度分別為 0.130、0.0012 mg/L,表明文蛤?qū)@兩種重金屬離子的耐受能力均低于偏頂蛤。Cd2+和Pb2+對成體菲律賓蛤仔Ruditapes philippinarum的安全濃度分別為 0.677、1.844 mg/L[22],均高于偏頂蛤,表明菲律賓蛤仔對這兩種重金屬離子具有較高的耐受性。漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定[23]:ρ(Pb2+)≤0.050 mg/L,ρ(Zn2+)≤0.100 mg/L,ρ(Cu2+)≤0.010 mg/L,ρ(Cd2+)≤0.005 mg/L。本研究中,除Cu2+外,其他3種重金屬離子的安全濃度均高于漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn),尤其是Pb2+、Cd2+,分別高出26倍和50倍。本研究結(jié)果表明:Cu2+對偏頂蛤?qū)儆诟叨拘噪x子,因此,硫酸銅不宜用于偏頂蛤養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中的病害防治;Pb2+、Zn2+、Cd2+對偏頂蛤均屬于低毒性離子,偏頂蛤?qū)b2+、Cd2+具有極強(qiáng)的耐受性,因此,對野生偏頂蛤活鮮和干制品應(yīng)注重鉛和鎘含量的監(jiān)測。
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中圖分類號:S966.9
文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A
DOI:10.16535/j.cnki.dlhyxb.2016.03.011
文章編號:2095-1388(2016)03-0290-05
收稿日期:2016-01-06
基金項(xiàng)目:國家海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng) (201205031-03);遼寧省科技攻關(guān)重大項(xiàng)目 (2015203003)
作者簡介:寧軍號 (1988—),男,碩士。E-mail:ningjunhaook@126.com
通信作者:常亞青 (1967—),男,博士,教授,博士生導(dǎo)師。E-mail:yqchang@dlou.edu.cn
Acute toxicity of four kinds of heavy metal ions to clam Modiolus modiolus
NING Jun-hao,BAI Wei,SONG Jian,ZHANG Xiao-sen,CHANG Ya-qing
(Key Laboratory of Mariculture&Stock Enhancement in North China’s Sea,Ministry of Agriculture,Dalian Ocean University,Dalian 116023,China)
Abstract:The acute toxicity of Cu2+,Pb2+,Zn2+and Cd2+to clam Modiolus modiolus was studied using static test method at water temperature 21-23℃,salinity 32.1 and pH 8.2 in order to explore tolerance of the clam to several kinds of heavy metal ions.The results showed that the mortality of the clam was found to be increased with the increase in metal concentration,with obvious dose-dependent effect.The medium lethal concentration(LC50)values of Pb2+treatment was 372.392 mg/L for 48 h,223.357 mg/L for 72 h and 129.122 mg/L for 96 h with safe concentration of 1.291 mg/L,whereas LC50of Zn2+was 292.415 mg/L for 48 h,113.501 mg/L for 72 h and 62.230 mg/L for 96 h with safe concentration of 0.622 mg/L.The LC50of Cu2+was 3.373 mg/L for 48 h,1.189 mg/L for 72 h and 0.506 mg/L,for 96 h safe concentration of 0.005 mg/L.The LC50of Cd2+was 106.170 mg/L for 48 h,47.973 mg/L for 72 h and 24.949 mg/L for 96 h with safe concentration of 0.250 mg/L.In conclusion,the acute toxicity of four kinds of heavy mental ions to the clam was in the order of Cu2+>Cd2+>Zn2+>Pb2+.Cu2+was high toxicant to the clam,and the clam had strong tolerance to Pb2+and Cd2+.
Key words:Modiolus modiolus;heavy metal ion;median lethal concentration;safe concentration