何娜，涂宗財，*，王凡，石燕，王輝，沙小梅，黃濤

1(南昌大學 食品科學與技術國家重點實驗室，江西 南昌，330047)2(江西師范大學 生命科學學院，江西 南昌，330022)

?

鰱魚魚油不飽和脂肪酸乙酯化工藝優(yōu)化

何娜1，涂宗財1，2*，王凡1，石燕1，王輝1，沙小梅2，黃濤1

1(南昌大學 食品科學與技術國家重點實驗室，江西 南昌，330047)2(江西師范大學 生命科學學院，江西 南昌，330022)

摘要以鰱魚魚油為原料，采用堿催化法對魚油進行乙酯化，通過單因素實驗和正交試驗優(yōu)化條件，確定魚油乙酯化反應的最佳工藝參數(shù)組合為：催化劑NaOH添加量為魚油質(zhì)量的 0.2%、醇油摩爾比為 8∶1、反應溫度為 75℃、反應時間為 1.5 h，該工藝下脂肪酸乙酯得率為 97.47%。

關鍵詞鰱魚魚油；不飽和脂肪酸；乙酯化；堿催化法

鰱魚，為四大家魚之一，具有生長快、疾病少、產(chǎn)量高、價格低等特點，已成為淡水魚加工的主要原料之一。鰱魚的脂肪含量達 25% 左右，富含亞油酸，亞麻酸等多不飽和脂肪酸[1-2]。因此鰱魚魚油是一種附加值較高的功能性油脂。

魚油中富含二十碳五烯酸 (EPA) 和二十二碳六烯酸 (DHA)，具有降血脂、預防動脈硬化和老年癡呆等功效，被廣泛應用于保健品和醫(yī)藥品領域[3-5]。魚油產(chǎn)品按 EPA 和 DHA 的存在形式分為甘油三酯型和非甘油三酯型(乙酯型和游離脂肪酸型)。甘油三酯型性質(zhì)穩(wěn)定，易吸收，但天然魚油中甘油三酯型的含量較少不足以滿足消費者的需求。因此，將甘油三酯型魚油轉換成乙酯型，通過不同的富集方法得到高含量不飽和脂肪酸乙酯型魚油，再將它轉換成甘油三酯型，已成為當今研究熱點之一[6-7]。國內(nèi)外對深海魚油乙酯化的研究較多[8-11]，鮮見對淡水魚油乙酯化的研究。然而，我國是淡水魚養(yǎng)殖大國，對淡水魚油進行乙酯化研究，并對其進行富集，有利于提高我國淡水魚油的綜合利用價值。

油脂乙酯化工藝按催化劑的不同主要分為3種：酸催化法、堿催化法以及酶催化法[12]。酸催化法催化速率較慢且多用于酸值高的甘油酯[13]，酶催化法乙酯得率不理想且價格昂貴，難以規(guī)?；a(chǎn)[16]；堿催化法催化速率較快且溫度較低，避免多不飽和脂肪酸的氧化分解[14-15]。因此，本研究以鰱魚魚油為原料，采用堿催化法對鰱魚魚油進行乙酯化，研究催化劑添加量、醇油比、反應溫度和反應時間對乙酯得率的影響，確定最佳乙酯化工藝參數(shù)。

1材料和方法

1.1實驗材料

鰱魚魚油(實驗室自制)；無水乙醇，正戊烷(分析純，天津市永大化學試劑有限公司)； NaOH(分析純，西隴化工股份有限公司)； NaCl，無水Na2SO4(分析純，天津大茂化學試劑廠)。

1.2儀器與設備

DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，上海予正儀器設備有限公司； SHB-Ⅲ 循環(huán)水式多用真空泵，河南省予華儀器有限公司； HH-4 數(shù)顯恒溫磁力攪拌水浴鍋，常州愛華儀器制造有限公司； N-1001 旋轉蒸發(fā)儀，上海愛郎儀器有限公司。

1.3實驗方法

1.3.1魚油乙酯化

如圖1所示，精確稱取一定量的鰱魚魚油(記為m0)于250 mL三口燒瓶中，先置于恒溫水浴鍋中，機械攪拌下預熱 30 min 至魚油達到反應溫度，按一定比例加入無水乙醇及NaOH固體，控制在反應溫度下加熱回流。反應結束后，將反應液倒入分液漏斗，趁熱用飽和 NaCl 洗滌3次，靜置分層?；厥丈蠈佑拖?，減壓旋轉蒸發(fā)除去過量的乙醇，然后加入無水Na2SO4，靜置過夜去除多余的水分。減壓過濾除去Na2SO4晶體，得到粗乙酯產(chǎn)品，稱量(記為m1)；將粗乙酯產(chǎn)品與同等體積的正戊烷混合，待液體完全互溶后，放置于-20 ℃ 冰箱中12 h ；減壓抽濾去除未反應的甘油三酯，濾液通過旋轉蒸發(fā)除去正戊烷，得到脂肪酸乙酯產(chǎn)品，稱量(記為m2)。

(1)

1.恒溫磁力攪拌器：2.三口燒瓶；3.冷凝管；4.溫度計；5.磁力攪拌子；6.N2導管圖1　乙酯化反應裝置圖Fig.1　Schematic diagram of esterification reacteror

1.3.2魚油乙酯化工藝條件的選擇

1.3.2.1乙酯化單因素實驗

以醇油比、催化劑添加量、反應時間、反應溫度為單因素，以乙酯得率為指標，通過單因素實驗選出魚油乙酯化的最佳工藝范圍。參考其他乙酯化試驗[9-10]，各因素試驗范圍設定如下：醇油比(無水乙醇與魚油的摩爾比)為 4∶1、5∶1、6∶1、7∶1、8∶1，催化劑NaOH添加量(占魚油的質(zhì)量)為： 0.10%、0.20%、0.30%、0.40%、0.50% ；反應時間為 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h ；反應溫度為65、70、75、80、85 ℃。

1.3.2.2魚油乙酯化工藝正交試驗設計

根據(jù)上述單因素實驗，選取催化劑添加量、醇油比、反應溫度、反應時間這4個因素，每個因素取3個水平，制定 L9(34) 正交實驗表進行正交試驗分析，以乙酯得率為指標，確定最佳反應條件。

表1　L9(34) 正交實驗因素水平表

1.3.3數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用 SPSS 17.0 軟件進行分析。Origin 7.5 軟件作圖。

2結論與討論

2.1單因素實驗結果與討論

2.1.1醇油比對魚油乙酯化反應的影響

如圖 2 所示，隨著醇油比的增大，乙酯得率也隨之增大；之后繼續(xù)增加醇油比，乙酯得率無明顯增加并趨于平緩。在 7∶1 之前都沒有明顯的分層，這是因為反應未完全產(chǎn)生的甘油一酯和甘油二酯導致乳化現(xiàn)象使得分層不明顯。7∶1 之后過量的乙醇則造成浪費，且甘油極性溶解使得后期產(chǎn)物分離困難。因此，確定最佳醇油比為 7∶1。

圖2　醇油比對乙酯得率的影響Fig.2　Effect of alcohol oil ratio on the yield of ethyl

2.1.2催化劑添加量對魚油乙酯化反應的影響

如圖3所示，隨著催化劑添加量增加，乙酯得率先增加后降低；當催化劑添加量達到魚油質(zhì)量的 0.2% 時，乙酯得率達到最大值；繼續(xù)增加反而會使得NaOH和甘油三酯脂肪酸發(fā)生皂化反應，從而降低乙酯得率。因此，確定催化劑的最佳添加量為 0.2%。

圖3　催化劑添加量對乙酯得率的影響Fig.3　Effects of catalyst concentration on the yield of ethyl

2.1.3反應時間對魚油乙酯化反應的影響

如圖 4 所示，隨著反應時間的增加，乙酯得率先增加后降低，在 2.0 h 時乙酯得率達到最高；繼續(xù)延長反應時間，使得部分乙酯型魚油被皂化，乙酯得率反而呈下降趨勢?？紤]到時間的延長對乙酯得率的影響，因此本實驗選擇 2.0 h 作為魚油乙酯化反應的最優(yōu)時間。

圖4　反應時間對乙酯得率的影響Fig.4　Effects of reaction time on the yield of ethyl

2.1.4反應溫度對魚油乙酯化反應的影響

如圖 5 所示，隨著反應溫度的升高，乙醇在反應過程中以氣液兩相狀態(tài)存在，使得無水乙醇與魚油接觸充分，乙酯得率呈上升趨勢；當溫度達到 75 ℃ 時，乙酯得率達到最大；然而繼續(xù)升高溫度，無水乙醇揮發(fā)速度加快，造成反應不完全，同時會加劇皂化反應速率，乙酯得率反而降低。因此，本實驗確定最佳的反應溫度為 75 ℃。

圖5　反應溫度對乙酯得率的影響Fig.5　Effects of reaction temperature on the yield of ethyl

2.2正交試驗分析優(yōu)化鰱魚魚油乙酯化反應

對表2進行分析，結果顯示，這4個因素對魚油乙酯得率的影響大小依次為，醇油比>反應時間>催化劑添加量>反應溫度。由表 3 方差分析結果可知，醇油比和反應時間對魚油乙酯得率的影響有極顯著差異 (P<0.01)，而催化劑濃添加量和反應溫度對乙酯得率的影響不顯著 (P>0.05)。綜合表 2、表 3 分析結果，顯示出最佳工藝組合為A2B3C2D1，即催化劑添加量為魚油質(zhì)量的 0.2%，醇油比為 8∶1，反應溫度為 75 ℃，反應時間為 1.5 h。

2.3最佳工藝驗證

根據(jù)上面的分析，得到最佳工藝A2B3C2D1組合。按照優(yōu)化的魚油乙酯化的工藝條件，經(jīng)行3次驗證實驗，結果得到魚油乙酯得率平均值為 97.47%，高于正交試驗結果中的最優(yōu)值，表明正交設計實驗可行。

表2　正交試驗結果

表3　方差分析結果

3結論

本實驗對鰱魚魚油預處理工藝——魚油乙酯化制備工藝條件進行優(yōu)化，通過單因素實驗和正交試驗研究催化劑添加量、醇油比、反應溫度、反應時間4個因素對乙酯得率的影響，得到最佳工藝條件是A2B3C2D1，即催化劑添加量為鰱魚魚油含量的 0.2%，醇油摩爾比為 8∶1，反應溫度為 75 ℃，反應時間為 1.5 h，魚油乙酯化得率可以達到 97.47%。本實驗結果可以用于富集鰱魚魚油中的多不飽和脂肪酸，以提高鰱魚魚油的產(chǎn)品附加值。

參考文獻

[1]羅永康. 7種淡水魚肌肉和內(nèi)臟脂肪酸組成的分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)大學學報,2001,6(4):108-111.

[2]張立堅,楊會邦,蔡春. 3種淡水魚油脂肪酸的含量分析[J]. 食品研究與開發(fā),2011,32(4):115-117.

[3]朱路英,張學成,宋曉金,等.n-3多不飽和脂肪酸DHA、EPA研究進展[J].海洋科學,2007,31(11):78-85.

[4]VON S C, HARRIS W S. Cardiovascular benefits of omega-3 fatty acids[J]. Cardiovascular Research, 2007, 73(2): 310-315.

[5]WALKER C G, JEBB S A, CALDER P C. Stearidonic acid as a supplemental source of ω-3 polyunsaturated fatty acids to enhance status for improved human health[J]. Nutrition, 2013, 29(2): 363-369.

[6]馬永鈞,楊博. 海洋魚油深加工技術研究進展[J]. 中國油脂,2011,36(4):1-6.

[7]FRASER B H, PERLMUTTER P, WIJESUNDERA C，et al. Practical syntheses of triacylglycerol regioisomers containing long-chain polyunsaturated fatty acids[J]. J Am Oil Chem Soc,2007,84(1):11-21.

[8]ARMENTA R E, VINATORU M, BURJA A M, et al. Transesterification of fish oil to produce fatty acid ethyl esters using ultrasonic energy[J]. Journal of the American Oil Chemists′ Society, 2007, 84(11): 1 045-1 052.

[9]FADHIL A B, AHMED A I. Ethanolysis of fish oil via optimized protocol and purification by dry washing of crude ethyl esters[J]. Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers, 2016(58):71-83.

[10]FADHIL A B, ALI L H. Alkaline-catalyzed transesterification of Silurus triostegus Heckel fish oil: Optimization of transesterification parameters[J]. Renewable Energy, 2013(60): 481-488.

[11]傅紅,裘愛泳. 魚油脂肪酸乙酯化工藝研究[J]. 糧食與油脂,2004(5):27-30.

[12]張金廷. 脂肪酸及其深加工手冊[M]. 北京：化學工業(yè)出版社, 2002.

[13]傅紅,史學懿,蔣琦霞,等. 高酸值魚油酸法催化乙酯化工藝的研究[J]. 中國油脂,2003,28(11):50-52.

[14]程楠. 魚油脂肪酸乙酯制備及分離純化研究[D].天津：天津大學,2013.

[15]劉潤哲,畢艷蘭,楊國龍,等. 紅花籽油醇解法制備脂肪酸乙酯[J]. 中國油脂,2009,34(1):50-53.

[16]WENDY M W, ALEJANDRO G M. Food lipids. Enzymatic interesterification[M]. USA: Mamel Dekker INC, 2000.

Ethyl esterification for unsaturated fatty acids of fish oil from Silve Carp

HE Na1,TU Zong-cai1,2*,WANG Fan1,SHI Yan1,WANG Hui1,SHA Xiao-mei1,HUANG Tao1

1(State Key Laboratory of Food Scie1nce and Technology,Nanchang University,Nanchang 330047,China)2(College of Life Science,Jiangxi Normal University,Nanchang 330022,China)

ABSTRACTIn this study, fish oil from Silver Carp was used as the raw material to study unsaturated acid esterification catalyzed by sodium hydroxide. By the single factor experiments and the orthogonal experiments, the best conditions for fish oil ethyl ester were obtained as following. The addition amount of sodium hydroxide was 0.2% (w/w) of fish oil weight. The molar ratio of methanol to oil was 8∶1. The reaction temperature was 75 ℃, and the reaction time was 1.5h. The yield of ethyl ester was 97.47%.

Key wordsfish oil from Silve Carp; unsaturated fatty acid; ethyl esterification; alkali catalysis

DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201606023

基金項目：國家高技術研究發(fā)展計劃專項經(jīng)費資助(863項目)(No.2011AA100803);江西省重大生態(tài)安全問題監(jiān)控協(xié)同創(chuàng)新中心資助項目(No.JSX-EW-00);江西省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系建設專項資金資助(JXARS-04)

收稿日期：2015-10-11，改回日期：2015-11-17

第一作者：碩士研究生(涂宗財為通訊作者，E-mail:tuzc_mail@aliyun.com)。