安麗艷，孟鎮(zhèn)，仇凱*，鐘其頂，楊彤暉，郭新光

1(中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院，北京，100015) 2(全國食品發(fā)酵標(biāo)準(zhǔn)化中心，北京，100015)

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應(yīng)用PCR-FINS技術(shù)鑒定金槍魚罐頭中金槍魚種類

安麗艷1,2，孟鎮(zhèn)1,2，仇凱1,2*，鐘其頂1,2，楊彤暉1,2，郭新光1,2

1(中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院，北京，100015) 2(全國食品發(fā)酵標(biāo)準(zhǔn)化中心，北京，100015)

摘要為考察金槍魚罐頭中DNA降解程度以及鑒定金槍魚罐頭中金槍魚種類，文中根據(jù)魚類線粒體基因組(m tDNA)細(xì)胞色素b(cyt b)基因和12S rDNA基因，利用3對(duì)通用引物分別擴(kuò)增片段大小為 358 bp(cyt b)、224 bp(12S rDNA)、123bp(cyt b)的目的片段，同時(shí)，基于123 bp線粒體cytb基因片段，通過法醫(yī)信息核苷酸測序(PCR-FINS)技術(shù)來鑒別金槍魚罐頭中金槍魚的種類，并對(duì)17個(gè)市售金槍魚罐頭樣品進(jìn)行金槍魚種類鑒定。結(jié)果表明：金槍魚罐頭中DNA降解嚴(yán)重，其片段大小在100～200 bp；該研究建立的PCR-FINS技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)金槍魚罐頭中金槍魚種類的準(zhǔn)確鑒別；17個(gè)市售金槍魚罐頭樣品中，58.8%來源于價(jià)格低廉的鰹魚，其次還包括長鰭金槍魚、青干金槍魚、扁鮀鰹、鮪魚。

關(guān)鍵詞PCR-FINS；金槍魚罐頭；種類鑒定

金槍魚類是硬骨魚綱、輻鰭亞綱、鱸形目、鯖科中金槍魚屬、狐鰹屬、舵鰹屬、鰹屬和鮪屬的統(tǒng)稱，多達(dá)17個(gè)金槍魚品種[1]。金槍魚罐頭因其營養(yǎng)美味、食用方便、貨架期長、便于攜帶等特點(diǎn)，深受廣大消費(fèi)者的喜愛[2]。然而，金槍魚罐頭市場魚目混雜，標(biāo)示不清[3]，市面上所銷售的金槍魚罐頭，大多僅標(biāo)示為金槍魚罐頭，未標(biāo)注所用原料的具體種屬信息。

水產(chǎn)加工品的原料品種鑒別已成為水產(chǎn)加工行業(yè)中面臨的重要問題之一。2003年，歐盟建立了魚類及其制品標(biāo)簽法，明確規(guī)定魚類制品必須貼有標(biāo)明商業(yè)名稱、生產(chǎn)方法和捕獲區(qū)域的標(biāo)簽[4]。美國食品藥品管理局(FDA)列出一個(gè)可食水產(chǎn)品名單，規(guī)定水產(chǎn)品標(biāo)示必須使用該名單中規(guī)定的名稱[5]。我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB7718—2011《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則》也明確要求，食品名稱應(yīng)清晰的反映食品的真實(shí)屬性[6]。

目前，國內(nèi)對(duì)魚類罐頭魚源性成分鑒別尚無相關(guān)報(bào)道。本研究采用PCR-FINS方法對(duì)金槍魚罐頭食品魚源性成分進(jìn)行鑒定，旨在建立高效、便捷的金槍魚罐頭中金槍魚種類的PCR-FINS鑒定方法。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

金槍魚罐頭，購自當(dāng)?shù)氐某?。黃鰭金槍魚生魚片作為陽性對(duì)照。

1.2主要試劑

CTAB裂解液[4% CTAB，100 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)，1.4 mol/L NaCl，20 mmol/L EDTA(pH 8.0)]；TE緩沖液(0.01 mol/L Tris，0.001 mol/L EDTA，pH 8.0)；Taq DNA聚合酶、dNTPs、100 bp Marker，均購自北京全式金生物技術(shù)有限公司；瓊脂糖、三氯甲烷/異戊醇體積比241、無水乙醇、異丙醇。

1.3主要儀器

冷凍離心機(jī)，美國Sigma公司；T gradient PCR擴(kuò)增儀，德國Biometra公司；DYY-8C型高壓電泳儀，北京六一儀器廠；CV-1000型凝膠成像系統(tǒng)，法國VIBER LOURMAT公司；壓力蒸汽滅菌鍋(LS-B50L)，上海醫(yī)用核子儀器廠。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1DNA提取

取100 mg金槍魚罐頭肌肉組織樣品于2 mL離心管中，加入1 mLV(三氯甲烷)∶V(甲醇)∶V(水)=1∶2∶0.8，室溫靜置過夜，5 000 r/min離心3 min，棄上清液，無菌去離子水清洗樣品，樣品組織于-40 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

參考UNSELD[7]的研究，并進(jìn)行適當(dāng)修改。取上述組織樣品，加入1mL CTAB提取液[4% CTAB，100 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)，1.4 mol/L NaCl，20 mmol/L EDTA(pH 8.0)]，65℃溫育1～2 h，期間每隔15 min顛倒混勻1次。溫育后，離心取上清液，等體積的V(三氯甲烷)∶V(異戊醇)=24∶1抽提2次。加2/3體積預(yù)冷的異丙醇沉淀DNA，-20 ℃，1 h。離心棄上清液，沉淀用體積分?jǐn)?shù)70%預(yù)冷的乙醇洗滌2次，干燥。沉淀用100 μL TE(0.01 mol/L Tris，0.001 mol/L EDTA，pH 8.0)緩沖液溶解，冰凍保存。

1.4.2基因擴(kuò)增

為了考察金槍魚罐頭中DNA降解程度，以7種不同加工工藝的金槍魚罐頭為研究對(duì)象，1.4.1提取的線粒體基因組DNA為模板，參考文獻(xiàn)[8-9]，根據(jù)魚類線粒體基因組(mt DNA)cytb基因和12Sr DNA 基因，選取3對(duì)通用引物(見表1)進(jìn)行PCR反應(yīng)。

表1　通用引物序列及擴(kuò)增產(chǎn)物大小

PCR擴(kuò)增體系為25μL：10×PCR buffer(Mg2+)2.5 μL，dNTP(2.5 mmol/L)2μL，20 pmol/μL引物各1 μL，模板DNA 2 μL，Taq DNA Polymerase 0.3 μL(1.5U)，ddH2O 16.2 μL。PCR擴(kuò)增條件為：94 ℃預(yù)變性300 s，94 ℃變性30 s，相應(yīng)退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)，最后在72 ℃延伸300 s。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.4.3市售樣品基因擴(kuò)增

將市面上采集的17個(gè)金槍魚罐頭樣品的線粒體基因組DNA利用通用引物59-3/59-5進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測并送往華大測序公司測序。

1.4.4數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用NCBI的BLAST程序，把所有樣品的PCR產(chǎn)物測序結(jié)果與GeneBank數(shù)據(jù)庫中已有金槍魚線粒體cytb基因序列進(jìn)行比較。

2結(jié)果與分析

2.1金槍魚罐頭DNA降解程度

由于金槍魚罐頭在加工過程中需經(jīng)過高溫高壓處理，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[10-11]，DNA片段降解嚴(yán)重，為了考察金槍魚罐頭中DNA降解程度，同時(shí)保證獲取足夠數(shù)量和質(zhì)量的DNA模板以適用于后續(xù)的分子生物學(xué)研究，使用表1中3對(duì)通用引物對(duì)提取的線粒體基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖見圖1，匯總結(jié)果見表2。

M-100bp Mark; 1-陽性對(duì)照(黃鰭金槍魚生魚片)；2-金槍魚罐頭(咖喱口味)；3-塊裝金槍魚(礦泉水浸罐頭)；4-油浸長鰭金槍魚罐頭；5-長鰭金槍魚(水浸)；6-金槍魚罐頭(原味)；7-金槍魚罐頭(沙拉醬味)；8-長鰭金槍魚罐頭(橄欖油浸漬)；9-空白圖1　3對(duì)通用引物(59-3/59-5、12S-F/12S-R、Cyt bL/ Cyt bH)PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.1　PCR amplification results of three universal primers(59-3/59-5、12S-F/12S-R、Cyt bL/ Cyt bH)

提取的DNA質(zhì)量用不同長度(123、224、358 bp)的目的片段來檢測。從圖1-A可以看出，所有樣品均可擴(kuò)增出123 bp目的片段，并且條帶明亮清晰。從圖1-B可以看出，3、4和8號(hào)罐頭樣品可以擴(kuò)增出224 bp的目的片段，1、2、5、6和7號(hào)罐頭樣品不能擴(kuò)增出224 bp目的片段。從圖1-C可以看出，除陽性對(duì)照樣品外，所有的金槍魚罐頭樣品均不能擴(kuò)增出358 bp的目的片段。

表2　3對(duì)通用引物PCR擴(kuò)增結(jié)果匯總

注：“+”表示對(duì)應(yīng)的PCR檢測結(jié)果為陽性，“-”表示對(duì)應(yīng)的PCR檢測結(jié)果為陰性。

結(jié)果說明金槍魚罐頭中DNA降解嚴(yán)重，所獲得片段大小在100～200 bp，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[10-11]。主要原因是：(1)高溫加熱引起DNA的降解；(2)輔料的添加對(duì)DNA造成一定程度的損傷，如DNA對(duì)酸堿環(huán)境十分敏感，7號(hào)罐頭樣品添加有沙拉醬，樣品處于酸性環(huán)境中，使DNA降解程度更為嚴(yán)重。此外，罐頭中某些添加劑可能會(huì)對(duì)PCR擴(kuò)增造成一定的抑制作用。

2.2金槍魚罐頭樣品123 bp目的片段PCR擴(kuò)增及測序結(jié)果分析

以17個(gè)金槍魚罐頭樣品的線粒體基因組DNA

為模板，利用通用引物59-3/59-5進(jìn)行PCR擴(kuò)增，目的片段長度為123 bp，擴(kuò)增結(jié)果見圖2。所有的樣品均可擴(kuò)增出清晰的條帶。將上述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序，測序結(jié)果在NCBI上BLAST比對(duì)，比對(duì)結(jié)果見表3。不同種類的金槍魚所占百分比見表4。

M：M-100bp Mark；1-陽性對(duì)照(黃鰭金槍魚生魚片)；2-金槍魚罐頭A；3-金槍魚罐頭B；4-金槍魚罐頭C；5-橄欖油浸金槍魚片；6-水浸金槍魚塊；7-水浸金槍魚；8-葵花籽油浸金槍魚；9-金槍魚罐頭(咖喱口味)；10-金槍魚罐頭(水浸)；11-金槍魚罐頭(植物油浸)；12-塊裝金槍魚(礦泉水浸罐頭)；13-橄欖油浸白肉金槍魚罐頭；14-金槍魚(辣味油浸罐頭)；15-油浸長鰭金槍魚罐頭；16-長鰭金槍魚(水浸)；17-植物油浸金槍魚；18-金槍魚罐頭(原味)；19-空白圖2　金槍魚罐頭樣品PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.2　PCR amplification results of canned tuna

編號(hào)商品名Cytb序列號(hào)相似度/%鑒定結(jié)果 標(biāo)稱原料2金槍魚罐頭AKF777811.1100Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚3金槍魚罐頭BKF777811.1100Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚4金槍魚罐頭CKF777811.1100Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚5橄欖油浸金槍魚片KF777796.1100Thunnustonggol(青干金槍魚)金槍魚6水浸金槍魚塊JN007677.198Thunnusalalunga(長鰭金槍魚)金槍魚7水浸金槍魚KF777811.198Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚8葵花籽油浸金槍魚AB106835.1100Auxisthazard(扁鮀鰹)金槍魚9金槍魚罐頭(咖喱口味)KM605252.1100Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚10金槍魚罐頭(水浸)JQ434036.198Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚11金槍魚罐頭(植物油浸)—100Euthynnusaffinis(巴鰹)或Euthynnuslineatus(黑鮪)金槍魚12塊裝金槍魚(礦泉水浸)KF777796.1100Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚13油浸白肉金槍魚罐頭KR023763.198Thunnusalalunga(長鰭金槍魚)金槍魚14金槍魚(辣味油浸罐頭)KF777811.1100Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚15油浸長鰭金槍魚罐頭KR023763.1100Thunnusalalunga(長鰭金槍魚)長鰭金槍魚16長鰭金槍魚(水浸)KR023763.1100Thunnusalalunga(長鰭金槍魚)長鰭金槍魚17植物油浸金槍魚KF777811.1100Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚18金槍魚罐頭(原味)KF777811.1100Katsuwonuspelamis(鰹魚)金槍魚

注：“—”：表示不能對(duì)應(yīng)到具體的某一序列號(hào)。

本研究17個(gè)供試樣品中，能夠清晰的鑒定到原料物種水平的有16個(gè)樣品，10號(hào)樣品鑒定為巴鰹(E.affinis)或黑鮪(E.lineatus)。所有的樣品中，其中2個(gè)樣品能夠使消費(fèi)者清晰的了解該罐頭的魚源性成分，標(biāo)示到具體的種類，其他15個(gè)樣品均標(biāo)示為金槍魚，對(duì)于具體的魚源性成分消費(fèi)者并不清楚。

表4　通用引物FINS鑒定結(jié)果

食品法典委員會(huì)CAC(CODEX STAN 70—1981)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，金槍魚屬、狐鰹屬、鰹屬和鮪屬中的14種金槍魚類均可加工成金槍魚罐頭[12]，16個(gè)樣品符合該規(guī)定，而我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T24403—2009《金槍魚罐頭》中僅規(guī)定金槍魚罐頭原料為鰹魚和鮪魚類[13]，11個(gè)樣品符合該規(guī)定。8號(hào)樣品鑒定為扁鮀鰹，不符合CAC標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定和我國《金槍魚罐頭》國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

根據(jù)鑒定結(jié)果，所采集金槍魚罐頭樣品中有58.8%來源于價(jià)格低廉的鰹魚。這說明市場上目前所銷售的金槍魚罐頭加工原料大部分為價(jià)格低廉的鰹魚，少數(shù)來自其他金槍魚種類。基于11號(hào)樣品僅僅能夠鑒定到鮪魚屬，Genebank中關(guān)于黑鮪(E. lineatus)cytb基因序列相關(guān)信息較少，其中522 bp的黑鮪(E.lineatus)cytb基因序列與巴鰹(E.affinis)的線粒體cytb基因序列相比較，僅有3個(gè)堿基的差異，相似度高達(dá)99%，后續(xù)還需尋找其他區(qū)域cytb目標(biāo)基因或線粒體其他區(qū)域(比如COI基因)的目標(biāo)基因，將上述123 bp目標(biāo)基因與其他目標(biāo)基因結(jié)合起來進(jìn)行金槍魚種類的鑒定，在一定程度上彌補(bǔ)單一分子標(biāo)記分析的不足。

3討論

利用PCR測序法來進(jìn)行物種鑒定的方法稱為FINS法[14]。FINS方法對(duì)物種進(jìn)行鑒別基于核苷酸序列變異，所以選取的目標(biāo)基因要有足夠的種間變異及較低的種內(nèi)變異[15]。在近親緣海洋動(dòng)物種屬鑒別中，線粒體DNA作為核外遺傳物質(zhì)，具有分子結(jié)構(gòu)簡單、嚴(yán)格的母系遺傳、無重組、快速進(jìn)化、多拷貝及穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)[16]，因此廣泛的用于分析進(jìn)化關(guān)系。在線粒體基因內(nèi)，由于不同的區(qū)域進(jìn)化速率存在差異，從而使得不同區(qū)域適于分析不同的分類單位。對(duì)于遠(yuǎn)緣物種間的分析可采用相對(duì)保守的基因序列進(jìn)行比較，例如，rDNA基因相對(duì)比較保守，常用于種或科以上水平的研究[17]。對(duì)于一些親緣關(guān)系較近的物種則需要依靠進(jìn)化速率相對(duì)較快的區(qū)域進(jìn)行分析，例如，cytb和D-loop基因進(jìn)化較快，適合種群水平差異的檢測[18]，尤其是cytb的結(jié)構(gòu)和功能較為清楚，現(xiàn)已被廣泛地用于親緣關(guān)系和系統(tǒng)進(jìn)化的研究。

本研究結(jié)果表明，所采集的17個(gè)市售金槍魚罐頭中，58.8%來源于價(jià)格低廉的鰹魚，其次還包括長鰭金槍魚、青干金槍魚、扁鮀鰹、鮪魚。從分類學(xué)的角度講，這幾個(gè)品種都屬于金槍魚類，在營養(yǎng)價(jià)值和價(jià)格上存在較大的差異，但是它們親緣關(guān)系比較近，外形和質(zhì)地比較相似，特別是經(jīng)過原料處理、蒸煮、殺菌等不同的加工工藝加工成罐頭后，消費(fèi)者很難判斷其真實(shí)的魚源性成分。此外，在某些種類的金槍魚魚體內(nèi)，組氨酸含量比其他品種金槍魚高很多，比如扁舵鰹極易腐敗，肌肉中高含量的游離組氨酸在產(chǎn)組胺菌的作用下容易發(fā)生脫羧反應(yīng)，生成大量組胺，為扁舵鰹的食用安全帶來了隱患[19]。

本研究中采用的PCR-FINS方法能夠準(zhǔn)確、快速的實(shí)現(xiàn)金槍魚罐頭中魚源性成分的鑒定，具有較強(qiáng)的實(shí)用性和應(yīng)用價(jià)值，可為食品安監(jiān)部門提供一定的借鑒和技術(shù)支持，對(duì)保護(hù)消費(fèi)者合法權(quán)益、規(guī)范金槍魚罐頭市場、保障食品質(zhì)量安全具有重要意義。該P(yáng)CR-FINS技術(shù)的建立為我國《金槍魚罐頭》標(biāo)準(zhǔn)與國際相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)接軌提供了技術(shù)依據(jù)，將進(jìn)一步提升和規(guī)范我國的罐頭工業(yè)市場。

參考文獻(xiàn)

[1]邱凡. 西太平洋藍(lán)鰭金槍魚和黃鰭金槍魚的遺傳多樣性及鯖科魚類分子系統(tǒng)學(xué)研究[D]. 廈門：廈門大學(xué), 2009：17-18.

[2]付才力, 李全宏, 黃尚榮,等. 世界主要魚罐頭市場概述[J]. 食品研究與開發(fā), 2014,35(4):109-112.

[3]http://www.greenpeace.org/international/Global/international/publications/oceans/2010/azti_tinned_tuna_report_IA10GP1A%20FINAL

[4]MORETTI V M, TURCHINI G M, BELLAGAMBA F, et al. Traceability issues in fishery and aquaculture products[J]. Veterinary research communications, 2003, 27(1): 497-505.

[5]http://www.fda.gov/Food/GuidanceRegulation/Guidance Documents RegulatoryInformation/ucm113260.htm

[6]GB7718—2011.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則[S].

[7]UNSELD M, BEYERMANN B, BRANDT P, et al. Identification of the species origin of highly processed meat products by mitochondrial DNA sequences[J]. Genome Research, 1995, 4(4): 241-243.

[8]張舒亞, 金麗琴, 蔣劍瓊, 等. 食品中魚源性成分 PCR 的檢測方法[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2010,36 (1): 142-145.

[9]REHBEIN H, KRESS G, SCHMIDT T. Application of PCR-SSCP to species identification of fishery products[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 1997, 74(1): 35-41.

[10]RAM J L, RAM M L, BAIDOUN F F. Authentication of canned tuna and bonito by sequence and restriction site analysis of polymerase chain reaction products of mitochondrial DNA[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1996, 44(8): 2 460-2 467.

[11]QUINTEIRO J, SOTELO C G, REHBEIN H, et al. Use of mtDNA direct polymerase chain reaction (PCR) sequencing and PCR-restriction fragment length polymorphism methodologies in species identification of canned tuna[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1998, 46(4): 1 662-1 669.

[12]ALIMENTARIUS C. Codex Standard for Canned Tuna and Bonito[J]. Codex Stan, 1995: 1 970-1 981.

[13]GB/T 24403—2009. 金槍魚罐頭[S].

[14]姚琳, 江艷華, 李青嬌,等. 基于DNA檢測技術(shù)鑒定水產(chǎn)加工品原料的研究進(jìn)展[J]. 中國漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn), 2013, 3(1):33-39.

[15]黃文勝, 韓建勛, 董潔,等. FINS方法鑒定魚翅和鯊魚軟骨的鯊魚種類[J]. 食品科技, 2011,36(11):265-271.

[16]辛翠娜, 彭建軍, 王瑩,等.cytb分子標(biāo)記技術(shù)在物種鑒定中的應(yīng)用[J]. 野生動(dòng)物學(xué)報(bào), 2009, 30(4):217-221.

[17]MILINKOVITCH M C, ORTG, MEYER A, et al. Revised phylogeny of whales suggested by mitochondrial ribosomal DNA sequences[J]. Nature, 1993, 361(6 410):346-348.

[18]于旭蓉, 仇雪梅, 柳曉瑜,等. 線粒體DNA多態(tài)性在海洋動(dòng)物群體遺傳結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用[J]. 生物技術(shù)通報(bào), 2011, 10 (10):49-54.

[19]童鈴. 不同貯藏溫度下扁舵鰹組胺及產(chǎn)組胺菌的研究[D].杭州：浙江工商大學(xué), 2015.

Development of a method for the identification of tuna species in canned tuna by FINS

AN Li-yan1,2，MENG Zhen1,2，QIU Kai1,2*，ZHONG Qi-ding1,2，YANG Tong-hui1,2， GUO Xin-guang1,2

1(China National Research Institute of Food and Fermentation Industries, Beijing 100015, China)2(National Standardization Center of Food and Fermentation, Beijing 100015, China)

ABSTRACTThis study aims to investigate the degree of DNA degradation and the species of tuna in the canned tuna products based on the analysis of fish mitochondrial genome including cytochrome b and 12S rDNA gene. A set of universal primers was used to amplify the targeted fragements with the length of 358 bp(cyt b)，224 bp(12S rDNA)，123 bp(cyt b)respectively. PCR-FINS technology was used to identify the tuna species in the canned tuna products by sequencing cytb gene of 123 bp, and 17 canned tuna products sourced from market were tested. Results showed that a very high degree of degradation in the canned tuna products for the DNA fragment sizes ranging from 100bp to 200bp. This study eastablished a accurate and reliable PCR-FINS technology with the ability to identify tuna species. Out of the 17 canned tuna samples, there were a variety of less valued species used; most popularly 58.8% of them were made from Katsuwonus, the remaining from Thunnus alalunga, Thunnus tonggol, Auxis thazard and Euthynnus.

Key wordsPCR-FINS;canned tuna;species identification

DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201606028

收稿日期：2015-10-16，改回日期：2015-12-07

第一作者：碩士研究生(仇凱為通訊作者)。