趙思婷，植瑞東

(肇慶醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，廣東肇慶 526020)

·臨床研究·

標(biāo)本放置時間對胰島素測定的影響

趙思婷，植瑞東

(肇慶醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，廣東肇慶 526020)

目的探討血清標(biāo)本在4 ℃環(huán)境下放置不同時間對化學(xué)發(fā)光檢測血清胰島素水平的影響。方法用真空分離膠采血管抽取21份血液標(biāo)本，冷凍離心分離血清，采用全自動化學(xué)發(fā)光儀即時檢測胰島素濃度，將血清標(biāo)本于4 ℃分別放置1、3、24 h后重復(fù)檢測，并與即時檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果標(biāo)本采集后即時檢測與4 ℃下放置1、3、24 h后檢測胰島素濃度分別為(6.88±4.38)、(6.87±4.44)、(7.05±4.68)、(7.57±4.60)mIU/L，經(jīng)配對t檢驗，血清標(biāo)本在4 ℃放置1 h和3 h所測結(jié)果與即時測定結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.773、0.273)，而放置24 h后所測結(jié)果與即時測定結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.009)。結(jié)論標(biāo)本放置時間對胰島素測定有影響，血清胰島素在4 ℃條件下不能放置24 h以上。

血清標(biāo)本；放置時間；胰島素

隨著胰島素檢測手段的不斷發(fā)展與更新，以及對胰島素研究的逐漸深入，胰島素在糖尿病的治療和診斷中得到廣泛應(yīng)用，胰島素治療是控制高血糖的重要手段。1型糖尿病患者需長期依賴胰島素維持正常的生理活動，以及控制血糖，從而降低糖尿病并發(fā)癥發(fā)生的風(fēng)險。2型糖尿病患者雖然不需要長期胰島素維持治療，但當(dāng)患者口服降糖藥失效，或存在口服降糖藥的相關(guān)禁忌證時，仍需要使用胰島素對血糖進(jìn)行控制，以減少高血糖相關(guān)癥狀及相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生。當(dāng)糖尿病患者病程較長時，胰島素治療是最主要的，也是必需的控制血糖措施。對于需要用胰島素來進(jìn)行血糖控制的患者，對胰島素水平作準(zhǔn)確的檢測是臨床醫(yī)生確定患者治療劑型、劑量和用法的依據(jù)，這就需要檢驗科提供準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。然而，由于現(xiàn)實中醫(yī)院里患者數(shù)量多，標(biāo)本要經(jīng)過抽血、送檢，最后檢驗的過程，該過程有一定的時間間隔，而且胰島素的檢測不屬于急診檢測范圍，因此，血液標(biāo)本一般需要放置一段時間才能檢測。所以，在檢驗時就會引發(fā)一系列問題，如血液標(biāo)本應(yīng)該怎么保存,保存多久才不會影響胰島素檢測的準(zhǔn)確度。目前，胰島素標(biāo)本還未實現(xiàn)及時檢驗，會存放在4 ℃冰箱中，故本研究將觀察血液標(biāo)本在4 ℃冰箱中保存不同時間后其檢測結(jié)果的變化，以了解保存時間是否對檢驗結(jié)果有影響。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源21份血液標(biāo)本均來自肇慶醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬醫(yī)院，均為采用普通分離膠真空采血管抽取的靜脈血，排除溶血及黃疸標(biāo)本。

1.2儀器與試劑美國貝克曼化學(xué)發(fā)光儀ACCESS-2及其配套試劑。試劑批號為825013。質(zhì)控品為伯樂公司的免疫測定多項目控制品，批號為2211-06。

1.3檢測方法標(biāo)本采集0.5 h后用低溫離心機以3 000 r/min離心15 min，分離血清標(biāo)本，立即測定胰島素水平，作為即時檢測的水平；剩余血清在4 ℃環(huán)境下分別放置1、3、24 h后測定胰島素水平。每次檢測前均使用質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)控檢查，保證質(zhì)控結(jié)果在受控范圍內(nèi)。

2結(jié)果

在4 ℃存放1、3 h所測的血清胰島素水平與即時測定結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，存放24 h后所測結(jié)果與即時檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，血清在存放24 h后檢測胰島素水平，結(jié)果有升高趨勢。見表1。

表1　血清不同存放時間胰島素檢測結(jié)果的比較

注：-為無數(shù)據(jù)；*為與即時檢測的差值；#為與即時檢測比較的P值。

3討論

糖尿病是一組因為胰島素分泌缺陷，和/或胰島素作用障礙所引起的代謝性疾病，以高血糖為特征。其發(fā)病原因主要是由于胰島素活性重度缺乏，以及升糖激素不適當(dāng)升高，導(dǎo)致血糖過高，從而引起糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂，最終導(dǎo)致機體水、電解質(zhì)和酸堿平衡失調(diào)。持續(xù)高血糖與長期代謝紊亂可導(dǎo)致全身多個組織器官的損傷及衰竭，特別是眼、腎、心血管及神經(jīng)系統(tǒng)。嚴(yán)重者可引起急性并發(fā)癥酮癥酸中毒和高滲昏迷情況。因此，胰島素檢測被廣泛應(yīng)用于糖尿的急性并發(fā)癥的預(yù)防。

胰島素水平測定方法有4類[1]：生物檢定法、免疫學(xué)方法、同位素標(biāo)記示蹤法、色譜法。免疫學(xué)測定法主要包括放射免疫測定法(RIA)、免疫放射定量法(IRMA)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)和發(fā)光免疫分析法(LIA)等。本研究中血清胰島素水平的檢測采用雙位點一步酶免法檢測(“雙抗體夾心法”)?！半p抗”是指參與反應(yīng)的抗體有兩種，一種是標(biāo)記的大鼠抗胰島素單抗，即酶結(jié)合物，另一種抗體為大鼠抗胰島素另一位點單抗(包被在磁性顆粒上)，兩種抗體及待檢的患者血清在反應(yīng)管中同時發(fā)生反應(yīng)，血清中的胰島素一個抗原位點與固定在磁性顆粒表面的抗體結(jié)合，另外一個抗原位點與游離的酶結(jié)合物同時結(jié)合。反應(yīng)后，對反應(yīng)管進(jìn)行多次沖洗，未與胰島素結(jié)合的酶結(jié)合物會被沖洗除去，與胰島素結(jié)合的酶結(jié)合物會在磁性分離區(qū)里被分離出來，留在反應(yīng)管中，當(dāng)化學(xué)發(fā)光底物(Lumi-Phos*530)加入到反應(yīng)管中，留在反應(yīng)管中的酶(堿性磷酸酶)會使底物發(fā)出光子，光電比色計能檢測到光子。儀器根據(jù)多點定標(biāo)曲線(光子量與標(biāo)準(zhǔn)品胰島素的對應(yīng)關(guān)系)，把檢測到的光子量計算出胰島素水平。

有文獻(xiàn)報道，由于紅細(xì)胞中存在胰島素降解酶，所以胰島素測定的血清標(biāo)本應(yīng)在取血后5 h內(nèi)分離[2-5]，對用于檢測胰島素水平的標(biāo)本，一般做法是待標(biāo)本完全自然形成凝塊，血清析出后立即離心，使血清和紅細(xì)胞等有形成分分離，盡量減少胰島素降解酶對胰島素的降解，然而，在實際的臨床檢測工作中，醫(yī)院每天的檢測量較大，因此就會產(chǎn)生一個矛盾：血清被分離后放置時間的長短是否會對胰島素測定有影響。由于近年來胰島素檢測大多采用發(fā)光免疫分析法，試劑、儀器成本均較高，且胰島素為住院患者常規(guī)檢測項目，急診一般很少做，故大多數(shù)醫(yī)院不把胰島素檢測作為24 h開機檢測的內(nèi)容，深夜急診的標(biāo)本一般就可能需要在冰箱中保存一段時間再作檢測。因此，研究血清標(biāo)本在4 ℃放置時間是否影響胰島素水平的檢測對于臨床實際實際工作時如何對標(biāo)本進(jìn)行保存很有意義。

本研究將新鮮血液標(biāo)本完全自然形成凝塊，血清析出后立即離心，把血清標(biāo)本在4 ℃下放置不同時間(0、1、3、24 h)后測定胰島素水平,結(jié)果表明標(biāo)本的胰島素水平在4 ℃環(huán)境下放置1、3 h后與不放置即時(0 h)檢測得到的水平相比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.773，P=0.273)然而，將標(biāo)本4 ℃放置24 h后與即時測定的血清胰島素水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.009)，即標(biāo)本放置24 h后胰島素水平出現(xiàn)了明顯的差異，因此，通過上述檢測結(jié)果的比較，可以得出的結(jié)論是：血清標(biāo)本在4 ℃下存放1、3 h對血清胰島素水平的測定影響不大，所測得的結(jié)果能真實地反映人體血液中的胰島素水平，然而，如果把血清標(biāo)本在4 ℃下放置24 h，此時檢測所得的血清胰島素水平與人體血液中的胰島素水平有較大的差異。

通過上述分析，筆者認(rèn)為對臨床血清胰島素水平的檢測，如果不能立即檢測，可以把標(biāo)本存放于4 ℃冰箱里保存，但放置時間最長不得超過24 h,故檢驗的工作人員應(yīng)與臨床醫(yī)生保持良好的溝通，告知醫(yī)生血清胰島素的檢測受標(biāo)本放置時間的影響，如需檢測最好在正常上班時間檢測，不要作為急診項目檢測，以保證結(jié)果的真實準(zhǔn)確。另外，在實際工作中常碰到臨床醫(yī)生要求復(fù)查血清胰島素，此時應(yīng)做好解釋工作，如果需復(fù)查的標(biāo)本4 ℃下放置時間不超過24 h,可以進(jìn)行復(fù)檢，如果需復(fù)查的標(biāo)本4 ℃下放置時間超過24 h，不建議臨床醫(yī)生復(fù)查，因為此時的所測得結(jié)果與人體血液的胰島素水平有較大差異。另外，需復(fù)查的標(biāo)本應(yīng)如何放置是一個值得思考的問題，有文獻(xiàn)報道測定血清胰島素的標(biāo)本如果要保存24 h以上必須保存在-20 ℃環(huán)境下[6-9]。

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2016-03-29)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.045

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1673-4130(2016)12-1702-03

2016-01-22