汪宇嬰，馮春顏

(廣東省深圳市龍華新區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科　518109)

·臨床研究·

幽門(mén)螺桿菌感染對(duì)特發(fā)性血小板減少性紫癜患者外周血CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的影響*

汪宇嬰，馮春顏

(廣東省深圳市龍華新區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科518109)

目的探討幽門(mén)螺桿菌(HP)感染對(duì)特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)患者CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的影響，進(jìn)一步揭示ITP的發(fā)病機(jī)制，為臨床診斷、治療與預(yù)防提供重要的理論依據(jù)。方法2013年1月至2014年12月門(mén)診及住院收治的ITP患者33例納入ITP組，HP陰性13例，HP陽(yáng)性30例。另選取健康體檢者40例作為對(duì)照組，其中HP陰性23例，HP陽(yáng)性17例；均測(cè)定血清CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度。結(jié)果ITP組HP陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組HP陰性者與對(duì)照組HP陽(yáng)性者CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組HP陰性者、陽(yáng)性者分別與ITP 組HP陰性者、陽(yáng)性者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。ITP組HP陰性者與HP陽(yáng)性者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論HP感染與ITP的發(fā)病有一定關(guān)系，健康人群HP感染可增加CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度；與健康人相比，ITP患者CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度降低；而HP感染ITP對(duì)CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞沒(méi)有影響。

幽門(mén)螺桿菌；特發(fā)性血小板減少性紫癜；CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞

特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)是一種獲得性特異性自身免疫性疾病，以骨髓巨核細(xì)胞發(fā)育成熟障礙，血小板生存時(shí)間縮短，數(shù)量減少，產(chǎn)生血小板膜糖蛋白特異性自身抗體，并伴有廣泛皮膚黏膜及內(nèi)臟出血為特征。是臨床最常見(jiàn)的一種血小板減少性疾病。近年來(lái)有學(xué)者從基因方面對(duì)ITP病例和健康人群進(jìn)行研究，例如Rs17101655位點(diǎn)T→G多態(tài)性的基因型和等位基因頻率分布[1],CD86基因啟動(dòng)子-3479 A/C位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與ITP遺傳易感性[2]，但都暫時(shí)未發(fā)現(xiàn)兩者有差異。ITP的發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明，但已有研究表明自身免疫性疾病的易感性與CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞及幽門(mén)螺桿菌(HP)感染有關(guān)。有研究表明ITP患者行HP根除治療后，患者血小板計(jì)數(shù)升高，提示HP感染可能與ITP的發(fā)生有一定的關(guān)系[3]。另外，ITP患者外周血CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的數(shù)量明顯降低[4-5]。HP的感染可以干擾免疫系統(tǒng)，使CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)量增加。HP感染的ITP患者CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的情況如何尚不清楚。能不能用CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度變化來(lái)判斷ITP患者病情的變化和轉(zhuǎn)歸，讓患者免受取骨髓的痛苦？本研究旨在討論HP感染對(duì)ITP患者CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的影響，進(jìn)一步揭示ITP的發(fā)病機(jī)制，為臨床預(yù)防、診斷和治療提供重要的理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料深圳市龍華新區(qū)人民醫(yī)院血液科2013年1月至2014年12月門(mén)診及住院收治的ITP患者33例納入ITP組，診斷均符合《血液病診斷及治療標(biāo)準(zhǔn)》[6]，其中男14例，女19例；年齡19～69歲，平均(39.0±6.5)歲；所有患者均為初次入院患者，既往未使用激素類(lèi)藥物，排除其他自身免疫性疾病。另選取健康體檢者40例作為對(duì)照組，其中男17例，女23例；年齡20～65歲，平均(41.1±5.9)歲；無(wú)糖尿病、腫瘤及其他免疫性疾病病史，近2個(gè)月內(nèi)未服用過(guò)激素及免疫抑制劑，2周內(nèi)未患感染性疾病。

1.2儀器與試劑異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的鼠抗人CD4單克隆抗體(CD4-FITC),藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的鼠抗人CD25單克隆抗體(CD-25PE)；相應(yīng)同型對(duì)照抗體為FITC標(biāo)記的小鼠IgG1、PE標(biāo)記的小鼠IgG1,試劑為美國(guó)Beckman coulter公司產(chǎn)品，美國(guó)BD公司FACSC calibur流式細(xì)胞儀。

1.3檢測(cè)方法(1)HP陽(yáng)性的確定：采用14C-尿素呼氣試驗(yàn)(UBT)確定，14C-UBT≥100 dpm/mmol即診斷為陽(yáng)性。CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度的測(cè)定。(2)CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度測(cè)定：抽取2 mL靜脈血，采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝。取流式專(zhuān)用試管2支分別標(biāo)記對(duì)照管和測(cè)定管。對(duì)照管中加入CD4+-FITC和IgG-PE各20 μL。測(cè)定管中加入CD4+-FITC和CD25+-PE各20 μL。再分別加入標(biāo)本100 μL，混勻，室溫避光20 min。兩管分別加溶血素50 μL，混勻，室溫避光10 min，加蒸餾水500 μL，混勻，室溫避光10 min。加磷酸緩沖鹽溶液(PBS)3 mL。1 500 r/min離心5 min,棄上清，留沉淀，混懸。采用Cellquest軟件進(jìn)行上樣，并用該軟件自動(dòng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

2結(jié)果

2.1兩組HP陽(yáng)性率比較ITP組HP陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1　兩組HP陽(yáng)性率比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05。

2.2兩組CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度比較對(duì)照組HP陰性者與對(duì)照組HP陽(yáng)性者CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組HP陰性者、陽(yáng)性者分別與ITP組HP陰性者、陽(yáng)性者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。ITP組HP陰性者與HP陽(yáng)性者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2　兩組CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度比較

注：與ITP組HP陽(yáng)性者比較,*P<0.05；與ITP組HP陽(yáng)性者比較,#P<0.05；與ITP組陰性者比較，△P<0.05。

3討論

ITP發(fā)病較隱匿，國(guó)內(nèi)外一直缺乏較為準(zhǔn)確的臨床流行病學(xué)資料。隨著對(duì)ITP發(fā)病機(jī)制不斷深入研究，目前一般認(rèn)為免疫因素介導(dǎo)占主要原因。自1998年Gsabarrini等首先提出了HP感染與ITP的發(fā)病有關(guān)，目前國(guó)內(nèi)外已有許多研究，提示HP感染與ITP的發(fā)生有一定的關(guān)系[7]。CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞是維持機(jī)體免疫耐受的重要調(diào)控者，在自身免疫性疾病中起重要作用。CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞是一種表達(dá)白細(xì)胞介素-2(IL-2)受體α鏈(CD25)的CD4+T細(xì)胞。CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞具有低反應(yīng)性和免疫抑制的特點(diǎn)。低反應(yīng)性是指體外很難繁殖和擴(kuò)增；免疫抑制主要指其具有抑制CD4+和CD8+細(xì)胞活化與增殖的能力。Zahran等[8]與Aboul等[9]研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是急性還是慢性ITP患者外周血CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)量都是減少的。CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞活化后分泌大量的IL-10、腫瘤壞死因子(TGF)-β等抑制性細(xì)胞因子，其功能通過(guò)這些抑制性細(xì)胞因子來(lái)實(shí)現(xiàn)。因此，推測(cè)可能由于ITP患者外周血中CD4+CD25+T輔助細(xì)胞數(shù)量減少，有效的免疫抑制作用降低，導(dǎo)致自身反應(yīng)性T細(xì)胞激活增多、凋亡減少，促進(jìn)了血小板的破壞。

CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞在HP逃避宿主免疫清除中也起一定作用，Lundgren等[10]發(fā)現(xiàn)HP感染者胃和十二指腸黏膜CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞高于未感染者，并且它抑制胃黏膜對(duì)HP的免疫反應(yīng)，使HP的感染持續(xù)存在。而國(guó)內(nèi)王雪梅等[11]的研究表明HP感染可增加CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度。ITP患者外周血CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度是下降的；HP感染者CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度是升高的；HP感染與ITP的發(fā)生有一定的關(guān)系。但本研究分析顯示HP感染對(duì)ITP患者CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度無(wú)影響，這有可能是統(tǒng)計(jì)例數(shù)太少所致。希望有更多的學(xué)者進(jìn)一步研究HP感染對(duì)ITP患者CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的影響。未來(lái)將加大研究例數(shù)，觀察能否用CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細(xì)胞的濃度變化來(lái)判斷ITP患者病情的變化和轉(zhuǎn)歸。為ITP的發(fā)病機(jī)制、臨床診斷、治療與預(yù)防提供重要的理論依據(jù)。

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2016-01-12修回日期：2016-03-22)

深圳市龍華新區(qū)科技局資助項(xiàng)目(2013027)。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.032

A

1673-4130(2016)12-1678-03