黃穎花，冶冬陽，李日飛，王培祥,李引乾*

(1.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院，陜西楊凌 712100；2.靖邊縣百草堂中醫(yī)診所，陜西靖邊 718500)

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“烏芷跌打膏”的藥效學研究

黃穎花1，冶冬陽1，李日飛1，王培祥2,李引乾1*

(1.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院，陜西楊凌 712100；2.靖邊縣百草堂中醫(yī)診所，陜西靖邊 718500)

摘要：本研究通過建立二甲苯致小鼠耳殼腫脹模型、醋酸腹腔注射致小鼠疼痛模型、家兔骨折模型，觀察“烏芷跌打膏”的抗炎、鎮(zhèn)痛、促進骨折愈合作用效果。結(jié)果顯示，“烏芷跌打膏”對二甲苯所致的小鼠耳殼腫脹有顯著抑制作用,對腹腔注射醋酸引起的小鼠疼痛有顯著抑制作用,對手術(shù)所致家兔骨折的愈合有促進作用。

關(guān)鍵詞：中藥；烏芷跌打膏；耳殼腫脹模型；骨折模型；藥效學

近年來，中藥越來越受到人們的青睞和關(guān)注[1]。中藥在抗炎、鎮(zhèn)痛和治療骨折方面有著獨特療效[2]。論文擬對中藥“烏芷跌打膏”進行藥效學研究，觀察其抗炎、鎮(zhèn)痛和對促進骨折愈合作用[3-4]，為臨床合理用藥提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物昆明系小鼠，體重18 g～20 g，購自西安交通大學實驗動物中心；家兔，體重2.5 kg±0.15 kg，由西北農(nóng)林科技大學實驗動物中心提供。

1.1.2主要藥品及試劑烏芷跌打膏(百病無憂膏)為靖邊縣百草堂中醫(yī)診所研制(批號：20131002)；巴米爾阿司匹林泡騰片為阿斯利康制藥有限公司產(chǎn)品(批號：H32026200)；二甲苯為天津博迪化工股份有限公司產(chǎn)品(批號：20130320)；脫毛劑(8 g/L硫化鈉溶液)為天津科密歐化工股份有限公司產(chǎn)品(批號：20130820)；6 mL/L醋酸溶液為天津科密歐化工股份有限公司產(chǎn)品(批號：20130220);速眠新注射液為吉林省華牧動物保健品有限公司提供(批號：20120210);甲醛為天津博迪化工股份有限公司產(chǎn)品(批號：20131126);硝酸為天津博迪化工股份有限公司產(chǎn)品(批號：20130115)。

1.1.3試驗器材游標卡尺，1 mL注射器，小鼠灌胃器，剪刀，線鋸，X光機，光學顯微鏡等。

1.2方法

1.2.1抗炎作用觀察取小鼠24只，隨機分為A、B、C 3組，每組8只，雌雄各半。A組為空白對照組，每只小鼠灌服生理鹽水0.2 mL；B組以100 mg/kg的劑量灌服阿司匹林約0.2 mL；C組以80 g/L的硫化鈉溶液脫去小鼠腹部被毛，涂抹溫熱軟融化的“烏芷跌打膏”適量于脫毛處。以上給藥40 min后，涂抹二甲苯于小鼠一側(cè)耳殼的正反兩面，每只0.05 mL～0.1 mL，1 h后以游標卡尺測量小鼠耳殼中部厚度，記錄數(shù)據(jù)，并對阿司匹林組和“烏芷跌打膏”組與空白對照組分別進行多重比較，檢驗數(shù)據(jù)均運用SPSS軟件進行統(tǒng)計學處理。

1.2.2鎮(zhèn)痛作用觀察取小鼠24只，隨機分為A、B、C 3組，每組8只，雌雄各半。A組為空白對照組，每只小鼠灌服生理鹽水0.2 mL；B組以100 mg/kg的劑量灌服阿司匹林約0.2 mL；C組以80 g/L的硫化鈉溶液脫去小鼠腹部被毛，涂抹溫熱軟化的“烏芷跌打膏”適量于脫毛處。以上給藥40 min后，各組小鼠均腹腔注射6 mL/L醋酸0.2 mL/只，觀察10 min內(nèi)各組出現(xiàn)扭體反應(腹部內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高)的小鼠只數(shù)，按照下面的公式計算各藥的鎮(zhèn)痛百分率。

1.2.3促進骨折愈合作用觀察

1.2.3.1骨折模型建立將60只家兔隨機分為“烏芷跌打膏”外敷治療組和空白對照組兩組，每組30只，公母各半。以脫毛劑脫去家兔前肢手術(shù)部位被毛，用速眠新注射液以0.2 mL/kg的劑量肌肉注射將動物麻醉。手術(shù)暴露前肢一側(cè)橈骨，輕微剝離橈骨中段骨膜，用兩條線鋸并攏將橈骨中段鋸斷，造成2 mm骨缺損，尺骨不做骨折，縫合切口。給藥組將“烏芷跌打膏”溫熱軟化后外敷于骨折處周圍，無菌敷料包扎，以小夾板固定，3 d～4 d換藥1次；空白組不給藥，其他處理同給藥組。

1.2.3.2術(shù)后觀察兩組家兔分別于手術(shù)后2周～4周在相同條件下進行骨折端X線拍片，觀察骨痂出現(xiàn)的時間、數(shù)量和鈣化情況。制訂骨折愈合標準：“-”表示無骨痂形成；“+”表示骨折邊緣趨向模糊，有少量骨痂出現(xiàn)；“++”表示骨折邊緣明顯模糊，有中等量骨痂出現(xiàn)；“+++”表示骨折邊緣接近消失，有較多量骨痂出現(xiàn)；“++++”表示骨折邊緣基本消失，已完全連接，有大量密度高的骨痂出現(xiàn)，密度接近常骨。記錄治療結(jié)果并進行統(tǒng)計學分析。

1.2.3.3組織學觀察兩組家兔分別于手術(shù)后2周～4周，每組隨機抽樣10只剖檢觀察。組織學檢查：切取帶骨痂標本，100 mL/L甲醛固定，100 g/L硝酸脫鈣，石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察。根據(jù)骨折斷端間肉芽組織、纖維組織、軟骨骨痂和新骨增生規(guī)律，按主要成分所占比例予以病理分級。0級：未愈合，斷端間只有肉芽組織或纖維組織；Ⅰ級：初步愈合，以軟骨為主，有少量新骨；Ⅱ級：愈合良好，軟骨、新骨各半；Ⅲ級：骨性愈合，新骨多，有少量軟骨。記錄結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。

2結(jié)果

2.1抗炎作用觀察結(jié)果

給藥40 min后，小鼠耳殼兩面涂抹二甲苯后，立即出現(xiàn)發(fā)紅現(xiàn)象，1 h后測量空白組小鼠耳殼中部厚度，平均值為0.595 mm±0.053 mm，“烏芷跌打膏”處理組為0.524 mm±0.060 mm。該藥組方中的的白芷、大黃、連翹等具有袪風止痛，消腫排膿的作用。統(tǒng)計學分析表明，阿司匹林組和“烏芷跌打膏”組均與空白組差異顯著(P<0.05)，而阿司匹林與“烏芷跌打膏”之間差異不顯著(P>0.05)，說明“烏芷跌打膏”具有明顯的抗炎作用(表1)。

2.2鎮(zhèn)痛作用觀察結(jié)果

空白對照組小鼠腹腔注射6 mL/L醋酸后，約3 min～5 min后出現(xiàn)強烈的扭體反應，鎮(zhèn)痛率為0(0/8)?！盀踯频蚋唷苯M在腹腔注射6 mL/L醋酸后，15 min內(nèi)小鼠未出現(xiàn)明顯異常，鎮(zhèn)痛率為100%(8/8)；阿司匹林組小鼠在腹腔注射6 mL/L醋酸后，10 min內(nèi)有兩只小鼠出現(xiàn)輕微的扭體反應，其他小鼠活動正常，鎮(zhèn)痛率為75%(6/8)。經(jīng)過對小鼠鎮(zhèn)痛作用的觀察表明，3個處理組當中以“烏芷跌打膏”的鎮(zhèn)痛作用最好(表2)。

2.3促進骨折愈合作用觀察

給藥組愈合情況好于空白組，但兩組間愈合情況經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異不顯著(P>0.05)。第4周給藥組骨折愈合良好，兩組間愈合情況經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異極顯著(P<0.01)(表3)。從表4組織學愈合等級觀察，第2周給藥組愈合情況好于空白組，但兩組間愈合情況經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異不顯著(P>0.05)。第3和4周給藥組骨折愈合良好，且兩組間愈合情況經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異顯著(P<0.05)。

表1　各處理組小鼠耳殼腫脹厚度

注：“*”表示差異顯著(P<0.05)。

Note: "*" Shows significant difference(P<0.05).

表2　“烏芷跌打膏”對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(扭體法)

表3　“烏芷跌打膏”外敷治療組和空白對照組X線愈合等級結(jié)果

表4　“烏芷跌打膏”外敷治療組和空白對照組組織學愈合等級結(jié)果

3討論

3.1“烏芷跌打膏”的抗炎效果

研究通過對3組小鼠分別進行灌服等量生理鹽水、阿司匹林和涂抹溫熱軟融化的“烏芷跌打膏”，40 min后，涂抹等量二甲苯于小鼠一側(cè)耳殼的正反兩面，測量發(fā)現(xiàn)1 h后測量空白組小鼠耳殼中部厚度，平均值為0.595 mm±0.053 mm，阿司匹林組為0.502 mm±0.078 mm，“烏芷跌打膏”處理組為0.524 mm±0.060 mm。統(tǒng)計學分析表明，阿司匹林組和“烏芷跌打膏”組均與空白組差異顯著(P<0.05)，而阿司匹林與“烏芷跌打膏”之間差異不顯著(P>0.05)，說明“烏芷跌打膏”具有明顯的抗炎作用。

3.2“烏芷跌打膏”的鎮(zhèn)痛效果

對小鼠腹腔注射6 mL/L醋酸，引起腹腔深部大面積且較持久的疼痛刺激，致使小鼠出現(xiàn)“扭體”反應，該方法是篩選非甾體抗炎藥鎮(zhèn)痛作用的一種敏感耳簡便的方法[5-8]?！盀踯频蚋唷苯M鎮(zhèn)痛率為100%，阿司匹林組鎮(zhèn)痛率為75%，空白對照組鎮(zhèn)痛率0，3個處理組當中以“烏芷跌打膏”的鎮(zhèn)痛作用最好。“烏芷跌打膏”組方中烏藥、川烏、草烏、白芷、血竭等具有行氣活血、消腫止痛、散結(jié)化瘀的功效。從川烏以及草烏中可以提取得到毒性十分強的烏頭堿等，它們可用于治療心腹冷痛、頭風頭痛、寒濕痹痛、跌打傷痛[9]，具有很好的鎮(zhèn)痛效果。

血竭是活血化瘀類中藥，對損傷性疼痛、炎性疼痛及術(shù)后疼痛均有明顯的消腫止痛作用，尤其治療瘀血性疼痛效果更加顯著，適用于各種扭傷、損傷、骨折、痛經(jīng)等?！盀踯频蚋唷敝械囊恍┧幬锍煞郑軌驕p少P 物質(zhì)在中樞的放出，從而達到鎮(zhèn)痛作用[10-11]。

3.3“烏芷跌打膏”對骨折愈合的影響

骨折愈合是一個遵循特定再生模式和涉及幾千個基因表達的復雜生物學過程[12]。中醫(yī)理論認為骨折初期，瘀血留滯，瘀血不去，新血不生。惡血留內(nèi)，經(jīng)絡受阻，治療應活血化瘀?！盀踯频蚋唷敝械某嗌?、血竭、鷹爪、當歸等均有活血、化瘀、通絡之功效。在活血化瘀基礎上，配以白芷、白及等有助于理氣、消腫生肌的藥物，使損傷得以恢復。瘀去而新生，氣促血運，軟骨痂減少而骨性骨痂大量增生，骨折愈合加速。故而“烏芷跌打膏”能加速骨折斷端血液循環(huán)，促進骨折愈合。目前的研究結(jié)果一致認為，中藥促進骨折愈合的機理通過改善血液循環(huán)、糾正血液流動狀態(tài)及抗凝過程來實現(xiàn)的[13-14]。

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Study on Pharmacodynamics of "uzhi Dieda Ointmeat"

HUANG Ying-hua1, YE Dong-yang1, WANG Pei-xiang2, LI Ri-fei1, LI Yin-qian1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine，NorthwestA&FUniversity，Yangling，Shaanxi，712100，China;2.TheChineseMedicineClinicofThatchedCottageinJingbianCounty，Jingbian，Shaanxi，718500，China)

Abstract:Three models were established in this research,including mouse auricular swelling model induced by xylene,mouse pain model induced by intraperitoneal injection of acetic acid and rabbit fracture model. The effects of "Wuzhi dieda ointmeat" on anti-inflammation, analgesia, promoting fracture healing were observed. The results showed that "Wuzhi dieda ointmeat" significantly inhibited the auricular swelling induced by xylene and intraperitoneal injection of acetic acid-induced pain in mice.Meanwhile, the ointment promoted the healing of fracture in rabbits.

Key words:Chinese herbal medicine; "Wuzhi dieda ointmeat"; auricular swelling model; fracture model; pharmacodynamics

收稿日期：2015-12-03

作者簡介：黃穎花(1985-)，女，陜西西安人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)藥理學研究。 *通訊作者

中圖分類號:S853.7

文獻標識碼:A

文章編號:1007-5038(2016)06-0080-04