蓋春蕾，葉海斌，許 拉，王曉璐，于曉清

(山東省海洋生物研究院，山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266002)

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中國(guó)對(duì)蝦與日本對(duì)蝦對(duì)白斑綜合征病毒耐受力的比較

蓋春蕾，葉海斌，許 拉，王曉璐，于曉清

(山東省海洋生物研究院，山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266002)

摘要[目的]比較中國(guó)對(duì)蝦與日本對(duì)蝦對(duì)白斑綜合征病毒的耐受力，為WSSV的病害防治提供參考。[方法]在鹽度30‰和(24±2)℃下，將體長(zhǎng)約8～9 cm的中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensi)與日本對(duì)蝦(Marsupenaeus japonicus)停食48 h后，投喂感染白斑綜合征病毒(WSSV)的死亡對(duì)蝦，觀察其攝食及感染情況，比較這2種蝦的對(duì)WSSV耐受力。[結(jié)果]中國(guó)對(duì)蝦的平均死亡率為63.33%，發(fā)病高峰期為4～5 d，而日本對(duì)蝦的平均死亡率為54.44%，發(fā)病高峰期為5～7 d，中國(guó)對(duì)蝦的發(fā)病率于日本對(duì)蝦，發(fā)病時(shí)間也較日本對(duì)蝦早。[結(jié)論]中國(guó)對(duì)蝦對(duì)WSSV的耐受能力要強(qiáng)于日本對(duì)蝦。

關(guān)鍵詞中國(guó)對(duì)蝦；日本對(duì)蝦；WSSV；耐受能力

白斑綜合征(WSD)是危害對(duì)蝦健康養(yǎng)殖的主要病癥[1-2]。近幾年，山東省內(nèi)對(duì)蝦白斑綜合征病毒(Whitespotsyndromevirus，WSSV)監(jiān)測(cè)表明WSD總體樣品陽(yáng)性率超過(guò)20%，對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖具有重大風(fēng)險(xiǎn)。中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)和日本對(duì)蝦(Marsupenaeus japonicus)為主要養(yǎng)殖種類，但日本對(duì)蝦WSSV的檢出率低于中國(guó)對(duì)蝦，成功養(yǎng)殖率也高于中國(guó)對(duì)蝦。研究表明，對(duì)蝦的死亡時(shí)間因不同種類、感染方式和感染劑量而異[3-4]。孫成波等[5]研究發(fā)現(xiàn)凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)和斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodonFabricius)在人工感染條件下其病毒復(fù)制時(shí)間及抵抗力存在差異。筆者比較了中國(guó)對(duì)蝦和日本對(duì)蝦對(duì)WSSV的耐受力，探討日本對(duì)蝦較中國(guó)對(duì)蝦低WSSV攜帶率及發(fā)病率的原因，以期為WSSV的病害防治提供參考。

1材料與方法

1.1材料健康中國(guó)對(duì)蝦和日本對(duì)蝦取自昌邑示范基地未發(fā)病蝦池，體長(zhǎng)約8～9cm。試驗(yàn)前隨機(jī)抽取2種對(duì)蝦各10尾，采用二步PCR法檢測(cè)WSSV，檢測(cè)結(jié)果均為陰性，在水族箱暫養(yǎng)7d，2種對(duì)蝦保持養(yǎng)殖環(huán)境一致，每天投喂2次配合飼料或鮮活餌料，每天換水1次。

1.2方法 試驗(yàn)用海水為經(jīng)厚沙層過(guò)濾的天然海水，鹽度為30‰，溫度(24±2)℃。試驗(yàn)用水泥池長(zhǎng)1.0m、寬0.5m、高0.5m，試驗(yàn)前用20g/m3的漂白精消毒處理。養(yǎng)殖期間每天吸污2次，換水1次，換水量30%左右。

1.2.1感染死亡對(duì)蝦的制備。取實(shí)驗(yàn)室自制感染W(wǎng)SSV的死亡對(duì)蝦，投喂前采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀分析對(duì)蝦肌肉中的WSSV，選出2尾對(duì)蝦WSSV含量為109拷貝/g的對(duì)蝦，以備投喂。

1.2.2中國(guó)對(duì)蝦對(duì)WSSV的耐受力測(cè)定。每個(gè)水泥池飼養(yǎng)120尾健康中國(guó)對(duì)蝦，停食48h后，每個(gè)水泥投入1尾感染W(wǎng)SSV死亡的中國(guó)對(duì)蝦，觀察中國(guó)對(duì)蝦的攝食情況，及時(shí)撈出頭胸甲出現(xiàn)白斑WSSV發(fā)病癥狀的中國(guó)對(duì)蝦，記錄撈出的每尾蝦的發(fā)病時(shí)間，直至感染W(wǎng)SSV的中國(guó)對(duì)蝦被吃完。同時(shí)，設(shè)置1個(gè)空白對(duì)照，飼養(yǎng)120尾健康的中國(guó)對(duì)蝦，不投喂感染的對(duì)蝦。

1.2.3日本對(duì)蝦對(duì)WSSV的耐受力測(cè)定。每個(gè)水泥池飼養(yǎng)120尾健康日本對(duì)蝦，停食48h后，每個(gè)水泥池投入1尾感染W(wǎng)SSV死亡的日本對(duì)蝦，觀察日本對(duì)蝦的攝食情況，及時(shí)撈出頭胸甲出現(xiàn)白斑WSSV發(fā)病癥狀的日本對(duì)蝦，記錄撈出的每尾蝦的發(fā)病時(shí)間，直至感染W(wǎng)SSV的日本對(duì)蝦被吃完。同時(shí)，設(shè)置1個(gè)空白對(duì)照，飼養(yǎng)120尾健康日本對(duì)蝦，不投喂感染的對(duì)蝦。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)比較中國(guó)對(duì)蝦與日本對(duì)蝦對(duì)投喂病蝦后感染發(fā)病數(shù)量和發(fā)病時(shí)間，分析二者對(duì)WSSV耐受力的差異。

2結(jié)果與分析

2.1投喂病蝦后中國(guó)對(duì)蝦感染死亡數(shù)量及死亡率由表1可知，投喂1尾死蝦后，試驗(yàn)組76尾中國(guó)對(duì)蝦出現(xiàn)感染癥狀，經(jīng)檢測(cè)均攜帶WSSV，感染率為63.33%。中國(guó)對(duì)蝦感染發(fā)病高峰期集中于第4～5天，日發(fā)病數(shù)量約35尾/d。對(duì)照組死亡4尾對(duì)蝦，通過(guò)分子生物學(xué)檢測(cè)未檢測(cè)到WSSV，可排除因?yàn)椴《靖腥局滤赖目赡堋?/p>

表1　中國(guó)對(duì)蝦組投喂死蝦每天的死蝦數(shù)量

2.2投喂病蝦后日本對(duì)蝦死亡數(shù)量及死亡率由表2可知，投喂1尾死蝦后，試驗(yàn)組65尾日本對(duì)蝦均出現(xiàn)白斑感染癥狀，經(jīng)檢測(cè)均帶有WSSV，感染率為54.44%。日本對(duì)蝦感染發(fā)病高峰期集中于5～7d，日發(fā)病數(shù)量約20～30尾/d，其感染時(shí)間較中國(guó)對(duì)蝦要晚，感染數(shù)量要低于中國(guó)對(duì)蝦。對(duì)照組日本對(duì)蝦未出現(xiàn)死亡狀況。

表2　日本對(duì)蝦組投喂死蝦每天的死蝦數(shù)量

3結(jié)論與討論

該試驗(yàn)投喂1尾死亡對(duì)蝦后，中國(guó)對(duì)蝦的平均死亡率為63.33%，發(fā)病高峰期在4～5d，而日本對(duì)蝦的平均死亡率為54.44%，發(fā)病高峰期在5～7d，中國(guó)對(duì)蝦的發(fā)病率高于日本對(duì)蝦，發(fā)病時(shí)間也比日本對(duì)蝦早，其原因可能有以下方面：①攝食時(shí)間差異。中國(guó)對(duì)蝦具有連續(xù)攝食的特點(diǎn)，日本對(duì)蝦白天潛伏在池底很少活動(dòng)，日落后攝食[6]，因此同時(shí)投喂死蝦后其攝食死蝦的時(shí)間不同，被感染時(shí)間也不同。②種間形態(tài)差異。中國(guó)對(duì)蝦甲殼較薄，死蝦容易被攝食，而日本對(duì)蝦甲殼厚，死蝦不易被攝食，病毒傳播較慢。不同種類的對(duì)蝦感染病毒后的存活時(shí)間存在差異[7]。李素紅等[8]研究也表明即使同一種屬不同家系之間的中國(guó)對(duì)蝦，對(duì)WSSV的敏感性也存在較大差異。中國(guó)對(duì)蝦和日本對(duì)蝦屬于不同種，對(duì)WSSV抗性不一，因而耐受時(shí)間不一。③餌料差異。對(duì)蝦體內(nèi)存在眾多的抗病因子(如各種水解酶、溶解酶、抗菌肽等)，具有相當(dāng)?shù)目共∧芰?，餌料不同會(huì)造成抗病因子也存在差異[9]。中國(guó)對(duì)蝦對(duì)蛋白需求(40%)較日本對(duì)蝦(60%)要低。Pascual等[10]報(bào)道當(dāng)對(duì)蝦攝食蛋白含量40%的飼料時(shí)，一些免疫指標(biāo)(血淋巴細(xì)胞總數(shù)、基礎(chǔ)和激活的呼吸爆發(fā))顯著高于攝食蛋白含量為5%和15%的飼料。劉棟輝等[11]報(bào)道當(dāng)飼料蛋白含量為20%時(shí)，凡納濱對(duì)蝦的血淋巴指標(biāo)(如細(xì)胞總數(shù)、酚氧化敏活性、血藍(lán)蛋白和血淋巴蛋白)均顯著較低。這些非特異免疫指標(biāo)的高低可反映蝦的免疫狀況，影響對(duì)蝦對(duì)病毒的抵抗力。飼養(yǎng)日本對(duì)蝦以投喂藍(lán)蛤等動(dòng)物性餌料為主，蛋白質(zhì)含量高，而飼養(yǎng)中國(guó)對(duì)蝦多投喂配合飼料，蛋白質(zhì)含量較低，因此餌料的差異可能是導(dǎo)致中國(guó)對(duì)蝦和日本對(duì)蝦對(duì)WSSV耐受力不同的重要因素。

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基金項(xiàng)目國(guó)家蝦產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS-47)。

作者簡(jiǎn)介蓋春蕾(1982- )，男，山東青島人，助理研究員，碩士，從事病害防控方面的研究。

收稿日期2016-04-08

中圖分類號(hào)S 945.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)13-171-02

ComparisonofToleranceAbilityofFenneropenaeus chinensisandMarsupenaeus japonicasagainstWhiteSpotSyndromeVirus(WSSV)

GAIChun-lei,YEHai-bin,XULaetal

(KeyLaboratoryofMarineAquacultureDiseasePreventionandControlinShandongProvince,ShandongInstituteofMarineBiology,Qingdao,Shandong266002)

Abstract[Objective] The aim was to compare tolerance ability of Fenneropenaeus chinensis and Marsupenaeus japonicas against WSSV, and provide reference for prevention and control of WSSV. [Method] Under salinity 30‰ and (24±2)℃, body length about 8-9 cm Fenneropenaeus chinensis and Marsupenaeus japonicas were used as study object, after indigestion for 48 h, feeding dead prawn infected WSSV, the tolerance ability against WSSV was compared. [Result] The average mortality of Fenneropenaeus chinensis was 63.33%, peak incidence was 4-5 d, the average mortality of Marsupenaeus japonicas was 54.44%, peak incidence was 5-7 d. The mortality of Fenneropenaeus chinensis was higher than that of Marsupenaeus japonicas, the disease appearance time was also earlier than Marsupenaeus japonicas. [Conclusion] The tolerance ability of Fenneropenaeus chinensis against WSSV is stronger than that of Marsupenaeus japonicas.

Key wordsFenneropenaeus chinensis; Marsupenaeus japonicas; WSSV; Tolerance ability