吳衛(wèi)東

(天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，天津　300150)

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◇藥物分析◇

離子色譜法測定艾附暖宮丸中9種無機(jī)陰離子含量

吳衛(wèi)東

(天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，天津300150)

摘要：目的建立同時測定艾附暖宮丸中9種無機(jī)陰離子(氟離子、甲酸根離子、氯離子、亞硝酸根離子、溴離子、硝酸根離子、硫酸根離子、草酸根離子和磷酸根離子)含量的分析方法。方法采用加速溶劑萃取法萃取，離子色譜法測定。Ion Pac AS11-HC陰離子交換分析柱為色譜柱(250 mm×4 mm)，氫氧化鉀溶液為淋洗液，梯度洗脫(6～46 mmol·L-1)，流速為1.0 mL·min-1，洗脫24 min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為25 μL。結(jié)果9種無機(jī)陰離子達(dá)到基線分離，0.1～20 mg·L-1線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 0～0.999 9范圍內(nèi)，儀器精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性的RSD<3.0%，平均加樣回收率為86.3%～113.2%，RSD為0.68%～2.48 %。結(jié)論該方法簡便快速和自動化，可用于艾附暖宮丸中9種無機(jī)陰離子含量的測定。

關(guān)鍵詞：中藥化學(xué)成份；色譜法,離子交換；陰離子；艾附暖宮丸/分析

原發(fā)性痛經(jīng)是指經(jīng)行前后或行經(jīng)期間出現(xiàn)下腹疼痛、墜脹，伴有腰酸或其他不適的癥狀，但無器質(zhì)性病變，嚴(yán)重者可伴有惡心、嘔吐、冷汗淋漓、手足闕冷，甚至昏厥等，這嚴(yán)重影響女性的生活和工作質(zhì)量[1-2]。流行病學(xué)資料表明女性中的發(fā)病率在25%以上，而青少年時期發(fā)病率可高達(dá)90%，是我國最常見的婦科疾病之一[3]。目前治療原發(fā)性痛經(jīng)的方法主要有西醫(yī)治療、中醫(yī)中藥治療及其他療法，而中醫(yī)中藥治療是最主要的治療方法[4]。而艾附暖宮丸是婦科中常用的中成藥，此處方出自《仁齋直指附遺》(宋)卷二十六，是由艾葉(炭)、香附(醋炙)、吳茱萸(制)、肉桂、當(dāng)歸、川芎、白芍(酒炒)、地黃、黃芪(蜜炙)和續(xù)斷10味中藥組成，具有理氣養(yǎng)血，暖宮調(diào)經(jīng)的功效，主要用于治療血虛氣滯、下焦虛寒或寒凝沖任所致的月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)來腹痛等病癥的經(jīng)典方劑，可以改善廣大女性的生活和工作質(zhì)量[5]。為了保證廣大女性用藥安全和療效，需要控制該藥的質(zhì)量。根據(jù)現(xiàn)代中醫(yī)理論的研究表明，有效成分包括有機(jī)成分和多種無機(jī)成分[6]。目前對于艾附暖宮丸的質(zhì)量控制主要集中在用高效液相測定該藥中的吳茱萸次堿、芍藥苷、阿魏酸和川續(xù)斷皂苷Ⅵ等的含量方面，以控制其有機(jī)成分，也有少量文章控制該藥中金屬元素含量等無機(jī)成分[7-9]，但是目前對該藥的無機(jī)離子的測定尚未有報道。由于在生產(chǎn)或貯存過程中藥物容易引入或水解產(chǎn)生各種陰陽離子。這些離子不僅能夠直接或間接的影響藥物的質(zhì)量和療效，而且能夠間接的反映藥物中某些主成分或雜質(zhì)的含量，因此有必要測定該藥中的無機(jī)陰離子[10]。離子色譜(ion chromatography，IC)在陰離子分析檢測方面極具優(yōu)勢，具有簡單、快速、選擇性強(qiáng)等特點，在環(huán)境、食品、化妝品、醫(yī)藥、生命科學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用[10-13]。中成藥基體較復(fù)雜，各種離子含量差異比較大，本文采用梯度洗脫-離子色譜法對9種無機(jī)陰離子進(jìn)行測定。

1儀器和試劑

1.1儀器ICS-2100型離子色譜儀，ASRS 300(4 mm)抑制器(美國Dionex公司)，配有IonPacAS11-HC(250 mm×4 mm，5 μm)分析柱和Ion Pac AG11-HC(50 mm×4mm)保護(hù)柱；ASE350加速溶劑萃取儀(美國Dionex公司)；Milli-Q超純水處理系統(tǒng)(美國Millipore公司)，AB204-S電子天平(感量：0.0001g，瑞士Mettler-Toledo公司)；高速臺式冷凍離心機(jī)(美國Beckman-Coulter公司)；KQ-500DE超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；尼龍66濾膜(0.22 μm，天津津騰實驗設(shè)備有限公司)。

2方法

2.2樣品前處理準(zhǔn)確稱取100 mg艾附暖宮丸樣品或100 mg去離子水于ASE350萃取池中，設(shè)定萃取溫度為50 ℃；萃取壓力為1 500 psi；萃取溶劑為40 mL去離子水，靜態(tài)循環(huán)5 min；循環(huán)2次；以50%的沖洗體積，沖掃60 s，萃取液轉(zhuǎn)移至離心管中，最終定容至100 mL，充分搖勻后離心(8 000 r·min-1)5 min，采用0.22 μm微孔濾膜過濾即得樣品溶液和空白樣品。

2.3色譜條件 Ion Pac AS11-HC (250 mm×4 mm，5 μm) 陰離子交換分析柱和Ion Pac AG11-HC(50 mm×4 mm)保護(hù)柱；淋洗液：氫氧化鉀溶液梯度洗脫(0～24 min，6～46 mmol·L-1)；柱溫：30 ℃；抑制器：ASRS 3004 mm陰離子抑制器，抑制電流為75 mA，自循環(huán)抑制模式；檢測器電導(dǎo)檢測器，檢測池30 ℃；流速1.0 mL·min-1；洗脫時間24 min；進(jìn)樣體積25 μL；空白樣品圖，混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品離子色譜圖如圖1所示。

3結(jié)果

3.1線性關(guān)系、檢測限和定量限在優(yōu)化的色譜條件下，按照“2.3”項，將混合標(biāo)準(zhǔn)工作液依次進(jìn)樣分析，以各離子的質(zhì)量濃度X(mg·L-1)為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度逐級稀釋到響應(yīng)值為3倍的噪音，此時溶液濃度為檢出限(信噪比3∶1)。將樣品溶液逐級稀釋至響應(yīng)值的10倍的噪音，此時溶液濃度為定量限(信噪比為10∶1)。此時的結(jié)果顯示各離子的線性關(guān)系良好(r2≥0.999)，檢出限為0.003～0.026 mg·L-1，定量限為0.018～0.078 mg·L-1，結(jié)果符合檢測的要求，具體結(jié)果見表1。

空白溶液對照品溶液樣品溶液

注：1．氟離子；2．甲酸根離子；3．氯離子；4．亞硝酸根離子；5．溴離子；6．硝酸根離子；7．硫酸根離子；8．草酸根離子； 9．磷酸根離子。

圖1離子色譜圖

3.6樣品含量測定取6個批次艾附暖宮丸的樣品，按照“2.2”項的方法制備樣品溶液，并按照“2.3”項的色譜條件測定，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。結(jié)果顯示，艾附暖宮丸樣品中9種離子的質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.13～3.63 mg·g-1，結(jié)果見表3。

表1　無機(jī)離子的回歸方程、檢測限和定量限

表2　加標(biāo)回收率與精密度試驗

表3　艾附暖宮丸樣品測定結(jié)果/mg·g-1

4討論

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Determination of 9 inorganic anions in Aifunuangong pills using accelerated solvent extraction and ion chromatography

WU Wei-dong

(DepartmentofPharmacy，TheSecondAffiliatedHospitalofTianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin300150，China)

Abstract:ObjectiveTo establish the method for simultaneous determination of nine inorganic anions (fluoride,formate,chloride,nitrite,bromide,nitrate,sulfate,oxalate and phosphate ) in Aifunuangong pills by ion chromatography．MethodsThe samples were extracted using accelerated solvent extraction (ASE) and determined by ion chromatography.Nine inorganic anions were determined by anion exchange column Ion Pac AS11-HC (250 mm×4 mm),and eluted for 24 min by gradient hydroxide potassium (6～46 mmol·L-1) at the rate of 1.0 mL·min-1and the temperature of 30 ℃,and the sampling volume was 25 μL.ResultsGood resolution can be achieved among the above mentioned nine inorganic anions．The nine inorganic anions showed a good linear relationship in the ranges of 0.1～20 mg·L-1and their linear correlations over the investigated concentration were in the range of 0.999 0～0.999 9,while RSDs of degree of precision,repeatability and stability were lower than 2.0%.The average recoveries were 86.3%～113.2% with relative standard deviation of 0.68%～2.48%,respectively.ConclusionsThe ion chromatography method is simple,fast and automated for the assay and quality control of nine inorganic anions in Aifunuangong pills.

Key words:Chemical principles (tcd);Chromatography,ion exchange;Anions;Aifunuangong pills/analysis

通信作者：吳衛(wèi)東，男，副主任藥師，研究方向：中成藥益氣養(yǎng)血機(jī)制研究及其安全性評價，E-mail：tidy_li@163.com

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.06.011

(收稿日期：2016-02-14，修回日期：2016-03-30)