王萬良，周建設(shè)，王建銀，張　弛，潘瑛子，陳美群，扎西拉姆，李寶海

(1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院 水產(chǎn)科學(xué)研究所，拉薩　850032；2.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院，拉薩　850032)

4種水產(chǎn)藥物對褐鱒(Salmo trutta)魚苗的急性毒性試驗

王萬良1，周建設(shè)1，王建銀2，張弛1，潘瑛子1，陳美群1，扎西拉姆1，李寶海2

(1.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院 水產(chǎn)科學(xué)研究所，拉薩850032；2.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院，拉薩850032)

為研究實際生產(chǎn)過程中褐鱒魚苗階段水產(chǎn)藥物的安全使用劑量，選擇在靜水條件下，水溫控制在(9±0.5) ℃，用高錳酸鉀、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑、甲醛和敵百蟲對褐鱒魚苗進(jìn)行急性毒性試驗。結(jié)果表明，24、48 h褐鱒對4種藥物的敏感性依次為高錳酸鉀>硫酸亞鐵和硫酸銅合劑>敵百蟲>甲醛，安全質(zhì)量濃度分別為0.18、0.35、0.45和25.88 mg/L。因此，在褐鱒魚苗培育過程中，做到嚴(yán)格診斷，疾病預(yù)防及治療中對癥下藥，細(xì)菌性疾病嚴(yán)格控制高錳酸鉀安全使用劑量；病毒性疾病建議使用甲醛；寄生蟲病建議使用敵百蟲，硫酸銅與硫酸亞鐵合劑慎用。

褐鱒；急性毒性；半致死質(zhì)量濃度；安全質(zhì)量濃度；敏感性

褐鱒(Salmotrutta)又稱棕鱒，與亞東鮭同物異名，隸屬于鮭形目(Salmoniformes)鮭科(Salmonidae)鮭亞科(Salmoninae)，主要分布在亞洲、非洲和歐洲，中國僅分布在西藏日喀則市，是英國人于1866年自歐洲引種到亞東縣，已成為一個地方性自然種群，1992年被列為自治區(qū)二級重點水生野生保護(hù)動物[1-8]。褐鱒肉質(zhì)細(xì)嫩鮮美、營養(yǎng)豐富，深受廣大群眾的喜愛。目前在當(dāng)?shù)厥袌雒壳Э?00～300元，具有很高的經(jīng)濟(jì)價值。

褐鱒養(yǎng)殖是亞東縣的四大特色優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)之一，人工繁殖技術(shù)已基本成熟，初步形成一定養(yǎng)殖規(guī)模[9]。近幾年，西藏完善的交通運輸業(yè)推動褐鱒養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，消費市場不斷擴(kuò)展，褐鱒市場需求空間增大，同時褐鱒發(fā)病率也日趨增多，尤其在魚苗階段死亡率較高，給廣大養(yǎng)殖戶造成不必要的財產(chǎn)損失。

褐鱒魚苗在其整個養(yǎng)殖過程中是一個很關(guān)鍵的階段，做好消毒工作對預(yù)防疾病發(fā)生具有重要的作用。因此，在褐鱒魚苗培育階段，選擇漁藥及控制其劑量對褐鱒魚苗疾病預(yù)防及健康培育具有深遠(yuǎn)的意義。目前，有關(guān)魚類急性毒性試驗方面的研究主要在四大家魚、部分觀賞魚、大口鯰、云斑鮰、斑點叉尾鮰及牙鲆等[10-16]，而對褐鱒急性毒性試驗的相關(guān)研究還未見報道。本文通過對褐鱒魚苗的急性毒性試驗，旨在為當(dāng)?shù)厝斯ゐB(yǎng)殖提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗材料由黑龍江水產(chǎn)研究所提供發(fā)眼卵，在西藏農(nóng)牧科學(xué)院國家級現(xiàn)代農(nóng)業(yè)園區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖基地孵化及培育，選擇身體健壯、規(guī)格整齊、游泳活潑、攝食良好的褐鱒魚苗3 500尾作為試驗樣本，體長28.1～34.4 mm，平均體長31.3 mm，體質(zhì)量0.146～0.198 g，平均體質(zhì)量0.189 g。試驗前將魚放在水族箱中暫養(yǎng)72 h以降低應(yīng)激反應(yīng)，同時停止投喂餌料，保持溶氧5.5 mg/L以上。

1.2試驗藥物

在魚類魚苗培育過程中，常用水產(chǎn)藥物主要有高錳酸鉀、硫酸銅和硫酸亞鐵合劑、甲醛和敵百蟲。

參試藥物詳情見表1。

表1　試驗藥物規(guī)格及生產(chǎn)廠家

1.3試驗條件

試驗在西藏拉薩國家級現(xiàn)代農(nóng)業(yè)園區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖基地進(jìn)行。試驗用水為經(jīng)過曝氣的地下水，水溫控制在(9±0.5) ℃，pH為7.8，采用曝氣增氧，溶氧保持在5.5 mg/L以上，在容積為50 cm×40 cm×40 cm的透明玻璃鋼內(nèi)進(jìn)行試驗。為減少外界干擾，整個試驗在弱光、恒溫的實驗室進(jìn)行。

1.4試驗方法

首先進(jìn)行預(yù)備試驗，測出死亡率為0的最高藥物質(zhì)量濃度(一般為96 h)和死亡率為100%的最低藥物質(zhì)量濃度(一般為24 h)；其次,按等對數(shù)間距設(shè)計5個質(zhì)量濃度，每個質(zhì)量濃度設(shè)3個平行組，另設(shè)1個空白對照組，同時對易降解或具有揮發(fā)性的藥品(高錳酸鉀和甲醛)每隔24 h換藥液1次，以保證試驗藥物的質(zhì)量濃度；再次,在每個玻璃鋼放魚苗30尾，進(jìn)行12 h連續(xù)觀察其中毒癥狀表現(xiàn)，判斷死亡的標(biāo)準(zhǔn)是用鑷子夾魚的尾部，放入清水中沒有任何反應(yīng)，可認(rèn)為已經(jīng)死亡，同時清理出水中的排泄物；最后在靜水中進(jìn)行試驗，統(tǒng)計24、48、72和96 h各質(zhì)量濃度的死亡率。各藥物質(zhì)量濃度見表2。

表2　藥物質(zhì)量濃度

統(tǒng)計各質(zhì)量濃度梯度在不同時間段魚苗的死亡率，用直線內(nèi)插法求出24、48、72和96 h的半致死質(zhì)量濃度(LC50)[10]，計算公式：LC50=C1+(50%-P1)×(C2-C1)/(P2-P1)，C1、C2為存活率接近50%的兩端質(zhì)量濃度，P1、P2為相應(yīng)存活率。安全質(zhì)量濃度(SC)計算公式[10]：SC=LC50(48 h)×0.3/[LC50(24 h)/LC50(48 h)]2。

2結(jié)果與分析

2.1高錳酸鉀急性毒性試驗

由表3可知，高錳酸鉀質(zhì)量濃度為1.32 mg/L 時，幼魚進(jìn)入試液后先快速游泳，呼吸頻率加快，17 min后慢慢恢復(fù)平靜，7.42 h開始中毒死魚，死魚體表粘液增多，嘴和鰓蓋均張開，24 h死亡率為100%；質(zhì)量濃度為1.05 mg/L 時，10.33 h開始中毒死魚，瀕臨死亡的魚呼吸緩慢，游泳異常，死后身體僵硬，24 h死亡率為43.3%，48 h死亡率為100%；質(zhì)量濃度為0.83 mg/L 時，24、48、72、96 h的死亡率分別為26.7%、30.0%、56.7%和73.3%；質(zhì)量濃度為0.66 mg/L 時，24、48、72、96 h的死亡率分別為0、18.0%、20.0%和23.3%；質(zhì)量濃度為0.56 mg/L 時， 24、48、72、96 h的死亡率全部為0；對照組質(zhì)量濃度為0 mg/L 時， 24、48、72、96 h的死亡率全部為0。

表3　高錳酸鉀急性毒性試驗死亡率

2.2硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)急性毒性試驗

由表4可知，硫酸銅與硫酸亞鐵合劑質(zhì)量濃度為8.42 mg/L 時，幼魚進(jìn)入試液后先快速游泳，呼吸頻率加快，20 min后慢慢恢復(fù)平靜，5.42 h開始中毒死魚，死亡魚體僵硬，嘴和鰓蓋均張開，24 h死亡率為100%；質(zhì)量濃度為4.07 mg/L 時，幼魚進(jìn)入試液后先快速游泳，呼吸頻率加快，15 min后慢慢恢復(fù)平靜，7.75 h開始中毒死魚，死亡魚體發(fā)黑，體表粘液增多，并有白色絮狀附著物，24、48 h死亡率為分別為80%和95%，72、96 h死亡率均為0；質(zhì)量濃度為2.29 mg/L 時，24、48、72、96 h的死亡率分別為50.0%、73.3%、83.3%和86.7%；質(zhì)量濃度為1.23 mg/L 時，24、48、72、96 h的死亡率分別為13. 3%、20.0%、23.3%和26.7%；質(zhì)量濃度為0.66 mg/L 時，24、48、72、96 h的死亡率均為0；對照組質(zhì)量濃度為0 mg/L 時， 24、48、72、96 h的死亡率全部為0。

表4　硫酸銅與硫酸亞鐵合劑急性毒性試驗死亡率

2.3甲醛急性毒性試驗

由表5可知，甲醛質(zhì)量濃度為154.0 mg/L 時，幼魚進(jìn)入試液后先快速游泳，呼吸頻率加快，35 min后慢慢恢復(fù)平靜，1.42 h開始中毒死魚，死亡前呼吸緩慢，游泳異常，最后沉于水底死亡，體表粘液增多。24 h死亡率為100%；質(zhì)量濃度為109.6 mg/L時，2.75 h開始中毒死魚，死后魚體僵硬，鰓蓋和嘴均張開，24、48、72、96 h死亡率分別為26.7%、53.3%、83.3%和100%；質(zhì)量濃度為75.9 mg/L 時，24、48、72、96 h的死亡率分別為6.7%、20.0%、30.0%和36.7%；質(zhì)量濃度為52.5 mg/L 時，24、48、72、96 h的死亡率分別為0、13.3%、16.7%和16.7%；質(zhì)量濃度為36.0 mg/L 時，24、48、72 h的死亡率均為0，96 h的死亡率為3.3 ﹪；對照組質(zhì)量濃度為0 mg/L 時，24、48、72、96 h的死亡率全部為0。

2.4敵百蟲急性毒性試驗

由表6可知，晶體敵百蟲質(zhì)量濃度為4.98 mg/L時，幼魚進(jìn)入試液后先快速游泳，呼吸頻率加快，0.23 h后慢慢恢復(fù)平靜，4.83 h開始中毒死魚，臨死前呼吸緩慢，失去知覺，體色發(fā)白，粘液增多，24 h死亡率為100%；質(zhì)量濃度為3.16 mg/L時，24、48、72 h的死亡率為分別為56.7%、83.3%和95.0%，96 h死亡率為100%；質(zhì)量濃度為2.00 mg/L時，24、48、72、96 h的死亡率分別為40.0%、50.0%、73.3%和73.3%；質(zhì)量濃度為1.26 mg/L時，24、48、72、96 h的死亡率分別為16.7%、30.0 %、40.0%和43.3%；質(zhì)量濃度為0.78 mg/L時，24、48、72 h的死亡率均為0，96 h的死亡率為6.7%；對照組質(zhì)量濃度為0 mg/L時， 24、48、72、96 h的死亡率全部為0。

表5　甲醛急性毒性試驗死亡率

表6　敵百蟲急性毒性試驗死亡率

2.5各藥物質(zhì)量濃度下半致死質(zhì)量濃度及安全質(zhì)量濃度

從表7可以看出，在靜水條件下，24和48 h 4種藥物對褐鱒魚苗的半致死質(zhì)量濃度毒性順序為甲醛>敵百蟲>硫酸亞鐵和硫酸銅合劑>高錳酸鉀；72和96 h半致死質(zhì)量濃度毒性順序為甲醛>硫酸亞鐵和硫酸銅合劑>敵百蟲>高錳酸鉀；根據(jù)有毒物質(zhì)對魚類毒性標(biāo)準(zhǔn)，劇毒<1 mg/L，中等毒性1～10 mg/L，低毒>10 mg/L，以48 h半致死質(zhì)量濃度為例，高錳酸鉀屬于劇毒，硫酸銅和硫酸亞鐵合劑、敵百蟲為中等毒性，甲醛為低毒漁藥。從安全質(zhì)量濃度來看，褐鱒對漁藥的敏感度順序為高錳酸鉀>硫酸銅與硫酸亞鐵合劑>敵百蟲>甲醛。

表7　試驗藥物對褐鱒魚苗的安全質(zhì)量濃度

3討 論

3.1高錳酸鉀對褐鱒的急性毒性作用

鮭鱒魚類內(nèi)臟真菌病國外有多次報道，國外學(xué)者分別于20世紀(jì)40年代和70年代報道發(fā)生于美國及日本歧阜縣的2種水霉屬真菌引起的內(nèi)臟真菌病，隨著中國鮭鱒魚養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，該病也在部分地區(qū)發(fā)生[17]。高錳酸鉀作為一種常用水產(chǎn)藥物，因其具有強(qiáng)氧化性，可促使細(xì)菌或其他有機(jī)物立即放出新生態(tài)氧，通過氧化細(xì)菌體內(nèi)的活性基因而發(fā)揮殺滅細(xì)菌的作用，對殺滅原蟲類、單殖吸蟲類和錨頭蚤等魚類寄生蟲有顯著效果，是毒性小、副作用小、用量小的傳統(tǒng)消毒劑。在漁業(yè)生產(chǎn)中，高錳酸鉀用于魚類及其附屬設(shè)施設(shè)備消毒，但西藏地下水為天然弱堿性水，高錳酸鉀溶液產(chǎn)生二氧化錳沉淀，對魚鰓具有破壞作用，容易導(dǎo)致魚類缺氧而死；一般使用劑量為 2～5 mg/L，高錳酸鉀對褐鱒魚苗的安全質(zhì)量濃度為0.18 mg/L，遠(yuǎn)低于常用消毒質(zhì)量濃度，與虹鱒魚類(0.217 mg/L)和長薄鰍魚苗(0.38 mg/L)接近，低于金魚(0.80 mg/L)和黃顙魚(1.11 mg/L)[18-19]。因此，用高錳酸鉀對褐鱒魚苗消毒和進(jìn)行真菌感染治療時要注意使用劑量。

3.2硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對褐鱒的急性毒性作用

車輪蟲和小瓜蟲是典型的鮭鱒魚類寄生蟲性疾病，常引起患病魚急躁不安，呼吸困難，食欲減退，大批死亡。硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)為魚病防治中經(jīng)常使用藥物之一，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.5～0.7 mg/L時，可防治鰓隱鞭蟲、口絲蟲、車輪蟲、斜管蟲、毛管蟲和中華鳋等病，也可用于殺滅魚池中青泥苔、水網(wǎng)藻、藍(lán)綠藻，以及池中的椎實螺。在食場掛袋，可用于防治寄素性鰓病和皮膚病。本試驗結(jié)果表明，硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對褐鱒魚苗為0.35 mg/L，低于生產(chǎn)常用質(zhì)量濃度，遠(yuǎn)高于長吻鮠安全質(zhì)量濃度而低于斑點叉尾鮰安全質(zhì)量濃度(0.85 mg/L)，與梭鱸魚的安全質(zhì)量濃度(0.48 mg/L)較為接近[19-20]。所以，在培育褐鱒魚苗寄生蟲性疾病預(yù)防與治療中，考慮到硫酸銅與硫酸亞鐵合劑屬于重金屬離子，不僅可以在魚體內(nèi)蓄積，而且對環(huán)境污染危害比較嚴(yán)重，所以不建議長期使用或使用時嚴(yán)格控制劑量。

3.3甲醛對褐鱒的急性毒性作用

傳染性胰腺壞死病毒病(IPNV)是威脅鮭鱒魚類最主要的病毒性疾病之一，主要危害14～70日齡的魚苗、魚種，在水溫10～12 ℃，死亡率可高達(dá)80%～100%，魚越小死亡率越高。甲醛是一種無色的有強(qiáng)烈剌激性氣味的氣體，已被世界衛(wèi)生組織確定為致癌和致畸形物質(zhì)，φ(甲醛)為35%～40%的水溶液被稱為福爾馬林。甲醛被廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，在水產(chǎn)上應(yīng)用，主要因為其具有防腐，殺菌和殺蟲作用，甲醛可以和生物體(包括細(xì)菌)本身的蛋白質(zhì)上的氨基發(fā)生反應(yīng)。甲醛對褐鱒魚苗安全質(zhì)量濃度為25.89 mg/L，在日常生產(chǎn)范圍之內(nèi)(10～30 mg/L)，遠(yuǎn)高于厚頜魴魚苗(7.50 mg/L)、丁鱥(7.50 mg/L)、長吻鮠(6.6 mg/L)和斑點叉尾鮰(6.0 mg/L)的安全質(zhì)量濃度[20-21]。因此，甲醛相對耐受度比厚頜魴魚苗、丁鱥、長吻鮠和斑點叉尾鮰要強(qiáng)，在褐鱒魚苗病毒性疾病防治及治療中，建議使用甲醛。

3.4敵百蟲對褐鱒的急性毒性作用

單殖吸蟲對中國淡水養(yǎng)殖魚類的危害，主要有三代蟲和指環(huán)蟲二屬種類所引起的鰓病和皮膚病。敵百蟲為白色結(jié)晶體，稍有臭味，易溶于水，是一種高效低毒的有機(jī)磷殺蟲劑。在魚類生產(chǎn)中，只能用于防治寄生蟲性魚病，對細(xì)菌性病毒性魚病無效，所以在使用藥物之前應(yīng)對疾病進(jìn)行嚴(yán)格診斷，然后對癥下藥。當(dāng)使用劑量為0.3～0.5 mg/L，可防治指環(huán)蟲、松藻蟲、中華騷、錨頭鳋等。在魚類生產(chǎn)中，敵百蟲對鱖、鱸、淺水鯧和蝦類較為敏感，使用安全劑量也可導(dǎo)致魚類死亡[22]。本試驗中，敵百蟲對褐鱒使用安全質(zhì)量濃度為0.45 mg/L，高于黑尾近紅鲌魚苗安全質(zhì)量濃度(0.25 mg/L)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于金魚安全質(zhì)量濃度(2.76 mg/L)。因此，褐鱒在防止單殖吸蟲等寄生蟲病時，可選擇使用安全劑量的敵百蟲。

4結(jié) 論

藥物使用過程中半致死質(zhì)量濃度(LC50)可以衡量毒性大小，本研究結(jié)果表明，褐鱒對4種藥物的敏感性依次為：24和48 h，高錳酸鉀>硫酸亞鐵和硫酸銅合劑>敵百蟲>甲醛；72和96 h，高錳酸鉀>敵百蟲>硫酸亞鐵和硫酸銅合劑>甲醛；根據(jù)中華人民共和國環(huán)境保護(hù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《新化學(xué)物質(zhì)危害評估導(dǎo)則》規(guī)定，對褐鱒魚苗高錳酸鉀屬于劇毒，硫酸銅和硫酸亞鐵合劑、敵百蟲屬于中等毒性，甲醛屬于低毒。因此，在褐鱒魚苗培育過程中，做到嚴(yán)格診斷，疾病預(yù)防及治療中對癥下藥，細(xì)菌性疾病嚴(yán)格控制高錳酸鉀安全使用劑量；病毒性疾病建議使用甲醛；寄生蟲病建議使用敵百蟲，硫酸銅與硫酸亞鐵合劑慎用。

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Acute Toxicity of Four Aquacultural Drugs toSalmotrutta

WANG Wanliang1, ZHOU Jianshe1,WANG Jianyin2, ZHANG Chi1, PAN Yingzi1,CHEN Meiqun1, ZHAXILAMU1and LI Baohai2

(1.Institute of Aquaculture of Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences, Lasa850032,China;2.Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences, Lasa850032,China)

In order to study the safe use of aquatic medicines forSalmotruttaat stage of fry during the actual production process. Under condition of still water, water temperature was controlled bewteen (9±0.5) ℃, acute toxicity of four aquacultural drugs toSalmotruttawas conducted with potassium permanganate, copper sulfate and ferrous sulfate, formaldehyde and trichlorphon for.The results showed after 24 h and 48 h, order of sensitivities of four drugs toSalmotruttawas, potassium permanganate>copper sulfate and ferrous sulfate>formaldehyde>trichlorphon, safety mass concentrations were 0.18 mg/L,0.35 mg/L,0.45 mg/L,25.88 mg/L,respectively.Therefore, in process of seedlings cultivation ofSalmotrutta,we must diagnose strictly, apply medicine according to indications to prevent and treat .In bacterial disease, we must control potassium permanganate dosage strictly and safely;we suggest using formaldehyde in viral disease;recommend to use trichlorfon, copper sulfate and ferrous sulfate mixture cautiously in parasitic diseases .

Salmotrutta; Acute toxicity; Lethal mass concentration;Safety mass concentration;Sensitivity

2016-03-01

2016-04-05

Ministry of Agriculture, the Projects of Introduction of International Advanced Agricultural Science and Technology(No.2014-Z57).

WANG Wanliang,male,master student.Research area:protection and utilization of indigenous fishes in Tibet.E-mail:qlxlsylzfyzx@163.com

LI Baohai, male, research fellow，doctoral supervisor.Research area:protection and utilization of indigenous fishes in Tibet.E-mail:lbh0891@163.com

(責(zé)任編輯：顧玉蘭Responsible editor:GU Yulan)

2016-03-01修回日期：2016-04-05

農(nóng)業(yè)部引進(jìn)國際先進(jìn)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)項目(2014-Z57)。

王萬良，男，碩士，研究方向為西藏魚類資源開發(fā)與保護(hù)利用。E-mail：qlxlsylzfyzx@163.com

李寶海，男,研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向為西藏土著魚類開發(fā)與保護(hù)利用。E-mail：lbh0891@163.com

S948

A

1004-1389(2016)07-0966-07

網(wǎng)絡(luò)出版日期：2016-06-30

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1220.S.20160630.1624.006.html