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泥鰍體表粘液中IgM的分離純化與抑菌活性研究

免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)可以殺死細菌和病毒，增強機體免疫功能[1]，魚類的體表粘液中存在大量Ig[2]。國內對魚類體表粘液IgM的研究較多[3,4]，但目前對泥鰍體表粘液中IgM的研究報道很少。本文對泥鰍體表粘液中IgM進行分離純化，然后對其抑菌性進行研究。

1　材料與方法

1.1材料與試劑。泥鰍，購自衡水市自強街水產市場；枯草芽孢桿菌、大腸桿菌，均由衡水學院微生物實驗室提供；硫酸銨，北方天醫(yī)化學試劑有限公司生產。

1.2試驗方法

1.2.1粘液的澄清與干燥。將采集的泥鰍粘液在冰箱內(0℃~ 4℃)靜置2 h，讓其內部泥沙等雜質沉淀，取上清粘液，用紗布過濾。然后對過濾后的粘液用冷凍干燥機進行干燥處理，得泥鰍粘液粉末。

1.2.2IgM的分離純化。采用硫酸銨沉淀的方法進行分離純化，工藝流程如下：泥鰍粘液粉末→采用磷酸鹽緩沖液溶解→磁力攪拌條件下，加入一定濃度的pH 7.0的飽和硫酸銨，4℃靜置過夜→離心得到沉淀→冷凍干燥→得到泥鰍粘液IgM。

采用4因素3水平L9(34)試驗設計，硫酸銨濃度、離心轉速、離心時間見表1。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒測定分離純化后的泥鰍粘液IgM純度，以確定最佳的提取條件。

表1　L9(34)正交試驗因素水平表

1.2.3IgM的抑菌性研究。分別選取枯草芽孢桿菌(革蘭氏陽性菌)和大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)，采用濾紙片法進行抑菌試驗，檢測硫酸銨分離純化后的IgM抑菌效果。

2　結果與分析

2.1正交實驗對IgM分離純化效果影響的研究。正交實驗對IgM分離純化效果的影響見表2、表3。

由表2、表3可知，硫酸銨濃度對IgM提取純度有顯著影響。各影響因素大小順序為：硫酸銨濃度＞離心時間＞離心轉速。確定試驗組合為A2B3C2，即硫酸銨濃度30%，離心轉速8 000 r/min，離心時間10 min。采用此組合進行試驗，得IgM純度為54%。

表2　L9 (34)正交實驗對IgM分離純化效果的影響的分析

表3　L9(34)正交試驗對IgM分離純化效果的影響的顯著性分析

2.2IgM的抑菌性測定。經過抑菌性測定得知，提取的泥鰍體表粘液IgM對大腸桿菌的抑菌效果較好，對枯草芽孢桿菌幾乎沒有抑菌效果。

3　小結

通過正交試驗得知，提取泥鰍體表粘液IgM的最佳條件為：硫酸銨濃度30%，離心轉速8 000 r/min，離心時間10 min，在此條件下，得IgM純度為54%。提取的IgM對革蘭氏陰性的大腸桿菌抑菌效果很好，但對革蘭氏陽性菌的抑菌效果不理想，其原因還有待于進一步的研究。

參考文獻

[1]金涌.免疫球蛋白在營養(yǎng)保健食品中的應用[J] .延邊大學農學學報，2001，23 (4)：266~269.

[2]林娟娟.歐洲鰻鱺粘膜免疫球蛋白的純化及其結構分析[D] .福州：福建農林大學，2006.

[3]楊桂文，安利國，溫武軍，等.鯉腸粘液與血清中免疫球蛋白的比較研究[J] .中國水產科學，1999，6 (4)：109～110.

[4]陳篧，王石泉，韓曉冬，等.鯽魚血清和皮膚粘液IgM的分離純化及部分性質的鑒定[J] .動物學研究，2003，24 (2)：111～115.

053000衡水學院生命科學學院柴琪琪李志濤次少濤張達

基金項目：衡水學院大學生科技創(chuàng)新(20160107008)。