譚美英　張楊

【摘要】 目的：探討Smac和Livin在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法：采用免疫組化法檢測宮頸鱗狀細(xì)胞癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變、正常對照者的組織標(biāo)本中的Smac和Livin的表達(dá)，并將宮頸鱗狀細(xì)胞癌中Smac和Livin表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行分析。將收集的石蠟包埋組織標(biāo)本制成組織芯片，應(yīng)用免疫組化染色SP法檢測Smac和Livin蛋白的表達(dá)。結(jié)果：宮頸癌組、內(nèi)瘤變組、正常組Smac的陽性表達(dá)率分別為91.67%、62.50%、0，宮頸癌組、內(nèi)瘤變組、正常組Livin的陽性表達(dá)率分別為91.67%、90.63%、22.22%。Smac和Livin測定結(jié)果的陽性率最高值均出現(xiàn)在宮頸癌組，明顯高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。且宮頸鱗狀細(xì)胞癌中Smac和Livin的表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論：Smac和Livin的表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，可能協(xié)同參與調(diào)控細(xì)胞的凋亡。

【關(guān)鍵詞】 宮頸鱗狀細(xì)胞癌； Smac； Livin

中圖分類號 R714.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號 1674-6805（2016）9-0093-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.9.052

宮頸鱗狀細(xì)胞癌是嚴(yán)重威脅女性健康的疾病之一，近年來發(fā)病趨勢有所上升。目前對于宮頸鱗狀細(xì)胞癌，手術(shù)切除是其主要的治療方式，放療和化療是重要的輔助手段[1]。為了尋找更為有效的治療方法，需對宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制有進(jìn)一步的研究。本研究檢測宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中存活蛋白（Livin）和線粒體促凋亡蛋白（Smac）的表達(dá)，旨在為研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年12月-2014年12月在筆者所在醫(yī)院接受手術(shù)切除并被臨床病理學(xué)明確診斷為原發(fā)性宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本（宮頸癌組）24份作為研究對象，標(biāo)本所屬患者年齡27～65歲，平均46歲。腫瘤的直徑為2.1～4.7 cm，平均3.4 cm。同時(shí)另選取64份宮頸上皮內(nèi)瘤變組織標(biāo)本（內(nèi)瘤變組）和18份正常宮頸組織標(biāo)本（正常組）作為對照，選取的所有患者術(shù)前均未進(jìn)行化療、放療和免疫治療，且所有患者均無其他嚴(yán)重內(nèi)科疾病或者是其他惡性腫瘤。宮頸癌組和內(nèi)瘤變組患者性別、年齡、病情、手術(shù)方式等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有標(biāo)本均經(jīng)過甲醛液固定以及石蠟包埋后，制作成組織芯片[2]。免疫組化染色多克隆抗體Smac購自于Santa Cruz Biotechnology（美國），二抗試劑盒由福建邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供，免疫組化染色多克隆抗體Livin購自于武漢博士德公司。采用EnVisionTM法進(jìn)行免疫組化染色，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。陽性對照切片購自于試劑公司，PBS替代一抗作為陰性對照[3]。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

背景染色清晰，Livin和Smac陽性細(xì)胞均為胞質(zhì)著色，呈棕黃色或棕黃色顆粒[4]。參照Bachtiary的方法在高倍鏡下隨機(jī)選取視野5個(gè)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，結(jié)合染色情況，弱（1分），清晰（2分），強(qiáng)（3分）；陽性細(xì)胞數(shù)小于1.0%（0分），1.0%～10.0%（1分），11.0%～50.0%（2分），51.0%～80.0%（3分），大于80%（4分），綜合兩項(xiàng)評分，總分≥3則判斷為陽性表達(dá)，總分<3則判斷為陰性表達(dá)。由兩位病理科醫(yī)師獨(dú)立閱片確定免疫組化結(jié)果，如存在不一致協(xié)商后統(tǒng)一意見，同時(shí)分析Livin和Smac相關(guān)性[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件對文中所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用字2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組Smac測定結(jié)果比較

正常組Smac陽性率為0，內(nèi)瘤變組Smac的陽性率為62.50%，宮頸癌組中Smac陽性率為91.67%；Smac測定結(jié)果陽性率最高值在宮頸癌組中，明顯高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1和圖1。

2.2 各組Livin測定結(jié)果比較

正常組Livin陽性率為22.22%，內(nèi)瘤變組Smac的陽性率為90.63%，宮頸癌組Smac陽性率為91.67%。Livin測定結(jié)果陽性率最高值在宮頸癌組中，明顯高于其他兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2和圖2。

2.3 相關(guān)性分析

宮頸鱗狀細(xì)胞癌中Smac和Livin的表達(dá)呈正相關(guān)（P<0.05）。

3 討論

宮頸鱗狀細(xì)胞癌屬于女性常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率呈逐年升高趨勢。其發(fā)病機(jī)制目前尚未闡明，宮頸鱗狀細(xì)胞癌的治療已成為臨床工作者研究的重點(diǎn)[6]。研究顯示，腫瘤生長與細(xì)胞增殖和凋亡密切相關(guān)。因此，腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡基因[7]。作為一種可與多種凋亡蛋白抑制劑（IAPs）分子結(jié)合的凋亡因子，Smac在調(diào)控細(xì)胞凋亡過程中具有重要作用。各種凋亡刺激Smac可使其與細(xì)胞色素C同時(shí)從線粒體釋放，在結(jié)合IAPs情況下解除IAPs抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶，加速細(xì)胞凋亡。研究指出，不同組織中Smac表達(dá)存在差異，非小細(xì)胞肺癌、肝癌及宮頸癌中高表達(dá)，胃癌中則低表達(dá)。Livin基因是一種新發(fā)現(xiàn)的IAP成員，可在胚盤、胚胎組織、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌及黑色素瘤等中表達(dá)。Livin蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，通過半胱氨酸蛋白水解酶（如Caspases3/7和Caspases-9等）和LivinBIR區(qū)抑制Caspases蛋白活性，阻斷凋亡受體而發(fā)揮作用。其在多數(shù)正常成人組織中不表達(dá)或低表達(dá)，在大部分惡性腫瘤中表達(dá)較高。因此，Livin和Smac表達(dá)對宮頸鱗狀細(xì)胞癌的進(jìn)展具有重要意義[8]。本文通過免疫組化染色法檢測宮頸癌組、內(nèi)瘤變組和正常組Smac和Livin，研究結(jié)果顯示，宮頸癌組患者的Smac和Livin的表達(dá)均明顯高于內(nèi)瘤組和正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），證實(shí)了Smac和Livin的表達(dá)在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的價(jià)值。此外，宮頸癌組、內(nèi)瘤變組和正常組中Livin和Smac表達(dá)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明這兩種蛋白的表達(dá)具有相關(guān)性，可能協(xié)同參與了細(xì)胞凋亡通路的調(diào)節(jié)，從而促進(jìn)宮頸鱗狀上皮病變的發(fā)生和發(fā)展[9]。這為今后宮頸鱗狀細(xì)胞癌的治療提供了新的研究靶點(diǎn)和方向[10]。

綜上所述，Smac和Livin表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的進(jìn)展存在相關(guān)性，對其進(jìn)行研究可為宮頸鱗狀細(xì)胞癌的臨床治療提供參考。

參考文獻(xiàn)

[1]朱彤宇，支園園，武愛芳，等.宮頸脫落細(xì)胞人乳頭狀瘤病毒基因分型檢測在宮頸癌篩查及宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變宮頸環(huán)形電切術(shù)后隨訪中的意義[J].解放軍醫(yī)藥雜志，2012，24（3）：14-17.

[2]李永昊，肖玉周，汪萬英.COX-2、Ki-67在骨肉瘤中的表達(dá)及臨床意義[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2010，8（3）：274-276.

[3]王靜波，肖穎麗，張瑩，等.血管內(nèi)皮生長因子在宮頸癌新輔助化療前后的表達(dá)及意義[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2010，26（12）：1280-1281.

[4]包仕廷，桂水清，林木生，等.Smac 和Survivin 基因在肝癌中的表達(dá)及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2005，22（9）：1062-1063.

[5]張遠(yuǎn)起，陳小東，李建文，等.乳腺癌組織中血管內(nèi)皮生長因子和抑癌基因Maspin的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，12（3）：493-496.

[6]成少華，白玉賢，陶莉，等.Maspin與EGFR在胃癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國腫瘤，2012，21（1）：71-74.

[7]齊淑軼，蔡勇，鄧蒞霏，等.Maspin 在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥，2012，52（3）：9-11.

[8]鄭麗娟，盧啟明.Ets-1和E-cadherin在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中華消化內(nèi)鏡雜志，2010，27（4）：204-205.

[9]吳齊斌，宋一一，孫蓬明.Maspin基因在婦科惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2012，18（1）：25-27.

[10]劉秀芳，王炳勝，熊正文，等.微血管密度及增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)與宮頸癌放射敏感性的關(guān)系初探[J].中國腫瘤臨床與康復(fù)，2005，12（2）：100-102.

（收稿日期：2015-11-06）