鄧仁生，朱小琴，于　靜

(湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院，湖北 恩施 445000)

恩施土家族人群血管內(nèi)皮生長因子基因多態(tài)性和吸煙在2型糖尿病中交互作用研究

鄧仁生，朱小琴，于靜

(湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院，湖北 恩施 445000)

[摘要]目的探討恩施土家族人群血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-460C/T多態(tài)性與2型糖尿病關(guān)聯(lián)性及其與吸煙的交互作用。方法采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法分析120例土家族2型糖尿病患者和180例土家族正常人VEGF-460C/T基因型分布情況。非條件Logistic分析各基因型與2型糖尿病發(fā)病的易感性關(guān)系以及與吸煙的交互作用。結(jié)果C基因攜帶者(CC型+CT型)患病風(fēng)險(xiǎn)是非C基因攜帶者(TT型)的1.65倍[OR=1.65,95%CI( 1.45,4.32),P=0.005;校正OR=1.79,95%CI(1.51,5.11),P=0.000];非條件Logistic分析表明CC型+CT型吸煙個(gè)體2型糖尿病罹患風(fēng)險(xiǎn)是TT型非吸煙個(gè)體的3.73倍[OR=3.73,95%CI(2.92,6.54)；RERI=2.38,95%CI(1.24,3.59);API=0.69,95%CI(0.34,0.98);S=1.44,95%CI(1.09,3.18)]。結(jié)論VEGF-460C/T多態(tài)性增加恩施土家族個(gè)體2型糖尿病罹患風(fēng)險(xiǎn),且在2型糖尿病發(fā)病中與吸煙存在協(xié)同效應(yīng)。

[關(guān)鍵詞]血管內(nèi)皮生長因子;多態(tài)性;2型糖尿病;易感性;交互作用

2型糖尿病(T2DM)是一種以機(jī)體胰島素抵抗敏感性降低為主要特征的代謝性疾病，是個(gè)體遺傳因素與外界環(huán)境因素共同作用的結(jié)果,患者本身可以合并多種疾病,同時(shí)也可以增加高血壓、冠心病等心血管疾病的罹患風(fēng)險(xiǎn)[1-2]?，F(xiàn)已明確T2DM發(fā)病主要與能量代謝紊亂、胰島素抵抗以及炎癥反應(yīng)緊密相關(guān)[1-2]。近年來研究發(fā)現(xiàn)基因多態(tài)性在T2DM發(fā)病中起著至關(guān)重要的作用[3]。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種可以促血管內(nèi)皮細(xì)胞分化、移行、增生和最終促進(jìn)新生血管形成的細(xì)胞因子，其同時(shí)還可調(diào)節(jié)能量代謝、胰島素抵抗以及炎癥[4]。為此,本研究通過采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法探討了土家族人群VEGF-460C/T多態(tài)性與T2DM易感性關(guān)系以及與吸煙的交互作用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1臨床資料

1.1一般資料選取2014年2月—2015年8月于恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院內(nèi)分泌科住院土家族T2DM患者120例作為T2DM組，T2DM診斷符合1999年WHO頒布的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)。選取同期在本院體檢中心體檢健康土家族個(gè)體180例作為對照組，均無血糖調(diào)節(jié)受損。 受試者年齡均為38～76歲。

1.2研究方法

1.2.1一般資料的收集通過詢問及形態(tài)學(xué)測量，收集受試者的年齡、性別、吸煙史以及體質(zhì)量、身高、腰圍。

1.2.2生化指標(biāo)檢測抽取所有受試者的空腹靜脈血,采用日本東芝全自動生化分析儀測定血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、空腹血糖(FBG) 以及空腹胰島素(FINS)水平，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR),HOMA-IR=FBG×FINS/22.5。

1.2.3VEGF -460C/T多態(tài)性檢測采取酚-氯仿經(jīng)典方法提取外周血基因組DNA。根據(jù)VEGF基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)各個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增引物，使用PCR擴(kuò)增目的基因片段。PCR擴(kuò)增引物序列:VEGF-460C/T引物，上游:5’-CTCTTTAGCCAGAGCCGGGG-3’，下游:5’-TGGCCTTCTCCCCGCTCCGAC-3’;PCR反應(yīng)體系(25 μL)包含100 ng提取DNA,1.0 IU Taq酶,2 μL上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反應(yīng)條件:95 ℃變性6 min;94 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 45 s 30個(gè)循環(huán);最后72 ℃延伸10 min。限制性內(nèi)切酶BsaHI,NlaⅢ酶切。酶切產(chǎn)物進(jìn)行3%瓊脂糖電泳;EB染色成像以此判定酶切基因型。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究中的資料均采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析?；蛐秃偷任换蝾l率比較采用非條件Logistic回歸分析，基因型Hardy-Weinberg平衡法2檢驗(yàn)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布則采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用t檢驗(yàn)，運(yùn)用Logistic分析VEGF-460C/T多態(tài)性在T2DM中作用。通過非條件Logistic以及Bootstrap方法評估VEGF-460C/T多態(tài)性與吸煙間的相加交互作用[5]，計(jì)算相對超額危險(xiǎn)度比(RERI)、歸因比(API)和交互作用指數(shù)(S)及其95%CI。如RERI和API值95%CI包括0、S值95%CI包括1，表明不存在相加交互作用。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1一般情況2組性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、TC、TG、LDL-C比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，而2組吸煙史、腰圍、HDL-C、 FBG、HOM-IR比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

2.2VEGF-460C/T多態(tài)性與T2DM易感性關(guān)系T2DM組VEGF-460C/T基因型中TT型60例，CT型31例，CC型29例；對照組VEGF-460C/T基因型中TT型98例，CT型43例，CC型39例。2組VEGF-460C/T基因型頻分布均符合Hardy-Weinberg平衡法(2=0.12,P=0.23；2=0.37,P=0.56); CT型的患病風(fēng)險(xiǎn)是TT型的1.31倍[OR=1.31,95%CI(1.11,1.68),P=0.034]；CC型的患病風(fēng)險(xiǎn)是TT型的1.34倍[OR=1.34,95%CI( 1.23,3.18),P=0.021];C基因攜帶者(CC型+CT型)患病風(fēng)險(xiǎn)是非C基因攜帶者(TT型)的1.65倍[OR=1.65,95%CI(1.45,4.32),P=0.005]。利用非條件Logistic回歸分析校正腰圍、體質(zhì)量指數(shù)、HDL-C以及吸煙等因素，CT型的患病風(fēng)險(xiǎn)是TT型的1.42倍[OR=1.42,95%CI(1.17,2.11),P=0.025]；CC型的患病風(fēng)險(xiǎn)是TT型的1.57倍[OR=1.57,95%CI(1.31,4.01),P=0.009];C基因攜帶者(CC型+CT型)患病風(fēng)險(xiǎn)是非C基因攜帶者(TT型)的1.79倍[OR=1.79,95%CI(1.51,5.11),P=0.000]。

表1　2組一般資料比較

2.3VEGF-460C/T多態(tài)性與吸煙交互作用T2DM組非吸煙者57例，其中TT型37例，CC型+CT型20例；吸煙者63例，其中TT型24例，CC型+CT型39例。對照組非吸煙者104例，其中TT型70例，CC型+CT型34例；吸煙者76例，其中TT型46例，CC型+CT型30例。采用非條件Logistic分析VEGF -460C/T多態(tài)性與吸煙交互作用,與攜帶TT基因不吸煙者相比, CC型+CT型不吸煙個(gè)體罹患T2DM風(fēng)險(xiǎn)增加1.12倍[OR=1.12,95%CI(1.09,2.72),P=0.029],TT型吸煙個(gè)體罹患T2DM風(fēng)險(xiǎn)增加1.23倍[OR=1.23,95%CI(1.19,2.98),P=0.012]，CC型+CT型吸煙個(gè)體罹患T2DM風(fēng)險(xiǎn)增加3.73倍[OR=3.73,95%CI(2.92,6.54),P=0.000；RERI=2.38,95%CI(1.24,3.59);API=0.69,95%CI(0.34,0.98);S=1.44,95%CI(1.09,3.18)；RERI和AP值95%CI不包括0，S值95%CI不包括1]。相加交互作用分析結(jié)果表明OR=1.67,95%CI(1.21,2.87)。

3討論

人類VEGF基因位于染色體6p21.3，其蛋白表達(dá)水平在不同個(gè)體間呈現(xiàn)一定的差異，這可能與VEGF多態(tài)性有關(guān)[6]。VEGF基因多態(tài)性的位點(diǎn)主要位于5’非翻譯區(qū)和3’非翻譯區(qū)。相關(guān)研究提示VEGF多態(tài)性與肥胖、多囊卵巢綜合征易感性相關(guān)[7-8]，而肥胖及多囊卵巢綜合征與T2DM的易感基因相類似[9-10]。目前認(rèn)為T2DM發(fā)病主要與氧化應(yīng)激以及炎癥反應(yīng)相關(guān)[1-2]，而遺傳因素在T2DM發(fā)病中也有著重要作用[3]。從遺傳易感性角度確定T2DM高危人群，并進(jìn)行針對性的預(yù)防是目前降低T2DM發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的有效措施。Tiwari等[11]發(fā)現(xiàn)印度人群T2DM發(fā)病與VEGF-460C/T多態(tài)性相關(guān)，而我國學(xué)者發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)人群T2DM發(fā)病與VEGF多態(tài)性無關(guān)[12]。上述結(jié)果提示不同地區(qū)VEGF基因多態(tài)性與T2DM的關(guān)聯(lián)性表現(xiàn)出一定的差異。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，恩施土家族人群中，VEGF-460C/T多態(tài)性增加T2DM罹患風(fēng)險(xiǎn)。

吸煙作為T2DM的一個(gè)危險(xiǎn)因素近年來得到重視,有報(bào)道顯示吸煙個(gè)體罹患T2DM的風(fēng)險(xiǎn)增加[13]。此外,吸煙可以導(dǎo)致中心性脂肪堆積[14],而中心性脂肪堆積是T2DM發(fā)病重要的危險(xiǎn)因素。VEGF-460C/T多態(tài)性和吸煙在T2DM及其他疾病中交互作用鮮見報(bào)道,其機(jī)制目前尚無法闡明。參照吸煙與肥胖易感性基因交互作用報(bào)道[15],分析吸煙可通過改變VEGF-460C/T多態(tài)性對T2DM易感性發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)。為了進(jìn)一步探討VEGF -460C/T多態(tài)性與吸煙對T2DM患病是否有交互作用，本研究采用非條件Logistic回歸分析進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果提示VEGF-460C/T多態(tài)性和吸煙存在相加交互作用而無相乘交互作用。但本研究存在一定不足,診斷只考慮了是否吸煙,而沒有充分考慮吸煙的頻率以及吸煙草的質(zhì)量,更沒有充分考慮是否存在被動吸煙等情況；且本研究僅考慮吸煙,而沒有考慮其他環(huán)境因素。

綜上所述,VEGF-460C/T多態(tài)性可以增加恩施土家族個(gè)體T2DM罹患風(fēng)險(xiǎn),且和吸煙在T2DM發(fā)病中發(fā)揮著協(xié)同作用，但尚需要開展更大樣本量、設(shè)計(jì)更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯俊?/p>

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Interaction between smoking and VEGF polymorphisms in type 2 diabetes in tujia population

DENG Rensheng, ZHU Xiaoqin, YU Jing

(The Central Hospital of Enshi Tujia and Miao Autonomous Prefecture, Enshi 445000,Hubei,China)

Abstract:Objective It is to study the relationship between polymorphism in vascular endothelial growth factor (VEGF)-460C/T and susceptibility to type 2 diabetes (T2DM) and their interaction with smoking. Methods VEGF-460C/T genotypes of 120 case patients with T2DM and 180 control subjects were examined by polymerase chain reaction-based restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The unconditional logistic regression (ULR) was performed to assess the T2DM risk and interaction with smoking. Results A case-control analysis indicated that there was increased risk of developing T2DM for CC/CT genotype carriers compared with TT[OR=1.65,95%CI(1.45,4.32),P=0.008;Adjust OR=1.79,95%CI(1.51,5.11),P=0.000]. By using the ULR method, smoking-positive subjects with genotype CT/CC had an T2DM risk 3.73 times more than that of smoking-negative subjects with genotype TT[OR=3.73, 95%CI(2.92,6.54；RERI=2.38,95%CI(1.24,3.59);API=0.69,95%CI(0.34,0.98);S=1.44,95%CI(1.09,3.18)]. Conclusion VEGF-460C/T polymorphism is associated with T2DM risk, and its interaction with smoking have synergistic effects on risk of T2DM.

Key words:VEGF; polymorphism; T2DM; susceptibility; interaction

[作者簡介]鄧仁生，男，主治醫(yī)師，主要從事2型糖尿病的研究工作。 [通信作者]于靜，E-mail:1002844988@qq.com

[基金項(xiàng)目]湖北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2013DC347)

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.10.004

[中圖分類號]R587.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)10-1037-03

[收稿日期]2015-10-20