陳國平，趙 杰

（1上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心泥城站，上海201306；2上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，上海201201）

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梨炭疽病菌生物學(xué)特性及防治藥劑的室內(nèi)篩選

陳國平1，趙 杰2*

（1上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心泥城站，上海201306；2上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，上海201201）

摘 要：研究了梨炭疽病菌的生物學(xué)特性，并對防治藥劑進(jìn)行了室內(nèi)初步篩選。結(jié)果表明：植物煎汁培養(yǎng)基中以梨果和梨枝培養(yǎng)基較有利于菌絲生長，梨果培養(yǎng)基有利于產(chǎn)孢；PDA培養(yǎng)基最適宜菌落生長，葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最多。菌絲生長的適宜溫度為5—30℃，最適溫度25℃；菌落產(chǎn)孢能適應(yīng)較廣的pH范圍，以pH =3產(chǎn)孢量最多；菌絲的致死溫度為56℃，黑暗條件下產(chǎn)孢量最大。在測試的碳源中，麥芽糖、乳糖和葡萄糖最適宜菌絲生長，蔗糖最適宜產(chǎn)孢；氮源中以酵母膏、蛋白胨和牛肉膏最適宜菌絲生長，蛋白胨和牛肉膏最適宜產(chǎn)孢。采用生長速率法測定了14種殺菌劑對病菌的抑制作用，其中多菌靈、咪鮮胺錳鹽、氟啶胺、苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯的毒力較高。

關(guān)鍵詞：梨炭疽??；梨炭疽病菌；生物學(xué)特性；殺菌劑

鮮梨是我國主要果品之一，也是上海浦東新區(qū)的優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)，其中‘翠冠’梨因果形大、外觀好、風(fēng)味佳，深受廣大消費(fèi)者喜愛，市場銷售情況常供不應(yīng)求，666.7 m2產(chǎn)值達(dá)8 900元（人民幣，下同）（大眾水果中僅次于葡萄）。梨炭疽病是由膠孢狀炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）引起的真菌性病害，能侵染桃、梨、葡萄和柑橘等多種果樹［1］，隨著果樹老齡化的發(fā)展，該病發(fā)生日益嚴(yán)重，已成為影響果品產(chǎn)量和品質(zhì)的重要病害之一［2］。近幾年，國內(nèi)對梨炭疽病的病菌診斷、發(fā)生規(guī)律和藥劑防治方面開展了大量研究，并取得了一定成績［2-5］，然而目前生產(chǎn)上仍將化學(xué)防治作為控制該病害的主要措施。本試驗(yàn)通過對當(dāng)?shù)乩嫣烤也【纳飳W(xué)特性和室內(nèi)殺菌劑的篩選研究，以期探索改善果園環(huán)境控制病害的方法。

1　材料與方法

1.1供試病原菌

梨炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.），采自浦東新區(qū)梨園，經(jīng)室內(nèi)組織分離、純化［6］，病原菌于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d用于試驗(yàn)。

1.2供試藥劑

50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司），12.5%腈菌唑乳油（深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司），0.3%丁子香酚可溶液劑（南通神雨綠色藥業(yè)有限公司），70%代森聯(lián)水分散粒劑［允發(fā)化工（上海）有限公司］，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑（江蘇豐登農(nóng)藥有限公司），50%克菌丹可濕性粉劑（江蘇龍燈化學(xué)有限公司），80%代森錳鋅可濕性粉劑（江蘇省農(nóng)墾生物化學(xué)有限公司），70%丙森鋅可濕性粉劑［拜耳作物科學(xué)（中國）有限公司］，22.7%二氰蒽醌懸浮劑（江西禾益化工有限公司），250 g/L醚菌酯懸浮劑［先正達(dá)（蘇州）作物保護(hù)有限公司］，45%咪鮮胺乳油（以色列馬克西姆化學(xué)公司），50%多菌靈懸浮劑（江蘇龍燈化學(xué)有限公司），500 g/L氟啶胺懸浮劑（浙江石原金牛農(nóng)藥有限公司），30%吡唑醚菌酯懸浮劑（深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司）。

1.3生物學(xué)特性觀察

1.3.1植物煎汁對梨炭疽病菌菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

將梨炭疽病菌于20%梨樹葉片、枝條和未成熟梨果的煎汁液培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)7 d，觀察菌落生長情況，并測產(chǎn)孢量［7-8］。

1.3.2不同培養(yǎng)基對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

選用PDA、PSA、察貝克氏、葡萄糖蛋白胨瓊脂、淀粉瓊脂和麥芽糖瓊脂等6種培養(yǎng)基［7］，于直徑為9 cm的平板中央接種直徑為1 cm的病原菌菌絲塊，25℃培養(yǎng)5 d后測量菌落直徑，第7天測產(chǎn)孢量［7］。

1.3.3溫度和pH對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響［7］

將直徑為1 cm的病原菌菌絲塊接種到PDA平板中央，分別于5—40℃下培養(yǎng)5 d后測量菌落直徑。

用乳酸和NaOH配制pH 3—10的PDA培養(yǎng)基，于平板中央接種直徑為1 cm的病原菌菌絲塊，25℃培養(yǎng)5 d后測量菌落直徑，第7天測產(chǎn)孢量。

1.3.4菌落致死溫度的測定

取直徑為1 cm的菌絲塊于不同溫度的試管中處理10 min，然后接種到PDA平板中央，于25℃培養(yǎng)5 d，觀察菌絲生長情況［9］。

1.3.5光照對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

將直徑1 cm的菌絲塊接種到PDA平板中央，分別于連續(xù)光照、連續(xù)黑暗、12 h光照12 h黑暗交替下，25℃培養(yǎng)5 d后測量菌落直徑，第7天測產(chǎn)孢量。

1.3.6不同碳、氮源對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

采用真菌生理培養(yǎng)基［9］，以KNO3為氮源，測定葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖和淀粉等碳源對菌落生長的影響，25℃培養(yǎng)5 d測量菌落直徑，第7天測產(chǎn)孢量。以蔗糖為碳源，測定硝酸鉀、硫酸銨、氯化銨、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨和尿素等氮源對菌落生長的影響，25℃培養(yǎng)5 d后測量菌落直徑，第7天測產(chǎn)孢量。

1.4殺菌劑的毒力測定

采用生長速率法［9-10］進(jìn)行測定：根據(jù)試驗(yàn)情況，配置5個(gè)濃度的含藥PDA培養(yǎng)基，將直徑為1 cm的菌絲塊放在含藥培養(yǎng)基中央，25℃培養(yǎng)5 d，測量菌落直徑、計(jì)算抑制率、以藥劑有效成分的濃度為測試濃度計(jì)算回歸方程和抑制中濃度EC50。

2　結(jié)果與分析

2.1菌落培養(yǎng)性狀觀察

梨炭疽病菌在梨果和梨枝培養(yǎng)基上生長較好，5 d后直徑分別為6.58 cm和6.37 cm，在梨葉培養(yǎng)基上生長較慢；培養(yǎng)7 d時(shí)的產(chǎn)孢量以梨果培養(yǎng)基最多，梨葉和梨枝培養(yǎng)基較少（表1）。

表1　梨炭疽病菌在植物煎汁培養(yǎng)基上菌落生長和產(chǎn)孢情況Table 1 Colony growth and spore production of C.gloeosporioides in plant juice media

2.2不同培養(yǎng)基對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

梨炭疽病菌在PDA培養(yǎng)基上生長最好，培養(yǎng)5 d后的直徑為8.48 cm，其次為麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基和PSA培養(yǎng)基；7 d后的產(chǎn)孢量以葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基最多，為2.900×107個(gè)/皿，其余依次為PDA、PSA、麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基、淀粉瓊脂培養(yǎng)基和察貝克氏培養(yǎng)基（表2）。

表2　6種培養(yǎng)基對梨炭疽病菌菌落生長和產(chǎn)孢量的影響Table 2 Effects of 6 media on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.3溫度和pH對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

梨炭疽病菌在溫度為5—30℃均能生長，其中以25℃最為適宜，直徑為8.48 cm。菌落在pH =3—10均能正常生長，且都有孢子產(chǎn)生，其中菌落生長以pH =5—8最為適宜，菌落直徑在7 cm以上；產(chǎn)孢量以pH =3強(qiáng)酸環(huán)境最大，達(dá)到6.167×106個(gè)/皿，但菌絲稀疏，緊貼培養(yǎng)基，其次為pH =7—8的中性至弱堿性（表3）。

表3　溫度和pH對梨炭疽病菌菌落生長和產(chǎn)孢量的影響Table 3 Effects of temperature and pH on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.4菌落致死溫度

將菌絲塊在40—54℃的水浴中處理10 min，于PDA平板上培養(yǎng)7 d后均能形成菌落，而56℃以上不能生長，因此菌落的致死溫度為56℃處理10 min。

2.5光照對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

病原菌不同光照條件下菌落生長差異不大；產(chǎn)孢量以全暗條件下最大，為1.4833×107個(gè)/皿，其次為光暗交替和全光條件（表4）。

表4　光照條件對梨炭疽病菌菌落生長和產(chǎn)孢量的影響Table 4 Effects of light on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.6不同碳、氮源對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響

菌落生長最適宜的碳源為麥芽糖、乳糖和葡萄糖，菌落直徑分別為6.15 cm、5.68 cm和5.60 cm，最不適宜的為果糖；產(chǎn)孢量最適宜的碳源為蔗糖，產(chǎn)孢量為5.833×106個(gè)/皿（表5）。

表5　碳源對梨炭疽病菌菌落生長和產(chǎn)孢量的影響Table 5 Effects of carbon sources on colony growth and spore production of C.gloeosporioides

菌落生長最適宜的氮源為酵母膏、蛋白胨和牛肉膏等有機(jī)氮源，菌落直徑大于6 cm，最不適宜的是硫酸銨和氯化銨；較適宜產(chǎn)孢的氮源為蛋白胨和牛肉膏，產(chǎn)孢量分別為8.767×107個(gè)/皿和5.150×107個(gè)/皿（表6）。

表6　氮源對菌落生長和產(chǎn)孢量的影響Table 6 Effects of nitrogen sources oncolony growth and spore production of C.gloeosporioides

2.7殺菌劑對梨炭疽病菌的毒力測定

14種殺菌劑對梨炭疽病菌的毒力存在明顯差異，其中以多菌靈、咪鮮胺錳鹽、氟啶胺、苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯的毒力較高，EC50小于1 mg/L；咪鮮胺、丁子香酚、醚菌酯和腈菌唑，EC50小于10 mg/L；二氰蒽醌的EC50為35.1509 mg/L；克菌丹、代森聯(lián)、代森錳鋅和丙森鋅的毒力較低（表7）。

表7　14種殺菌劑對梨炭疽病菌的毒力Table 7 Toxicities of 14 fungicides to C.gloeosporioides

3　結(jié)論與討論

梨炭疽病菌在梨葉、梨枝和梨果煎汁培養(yǎng)基上能正常生長，其中以梨果和梨枝培養(yǎng)基生長較好，以梨果培養(yǎng)基分生孢子產(chǎn)量較高，可能梨果中含有的糖類有利于菌絲生長和產(chǎn)孢。不同培養(yǎng)基中，以PDA最適宜菌落生長，但以葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基產(chǎn)孢量最多。

病原菌無論單糖或多糖都可以利用，但菌落生長最適宜的碳源為麥芽糖、乳糖和葡萄糖，產(chǎn)孢最適宜的碳源為蔗糖。病原菌能利用有機(jī)和無機(jī)氮，但菌落生長最適宜有機(jī)氮，產(chǎn)孢較適宜的氮源為蛋白胨。病原菌在5—30℃下均能生長，最適25℃，pH =3—10的條件下能產(chǎn)生孢子，最適宜pH為3；菌絲塊的致死溫度為56℃；菌落生長對光照的要求不嚴(yán)格，但產(chǎn)孢量以全暗條件下最大。

劉郵洲等［11］研究了梨炭疽病菌部分特性，在菌絲生長溫度和pH方面與本研究結(jié)果相似；而適宜的碳源和氮源與本研究結(jié)果有一定差異，這可能與病菌長期生存的環(huán)境有關(guān)。

有機(jī)肥（有機(jī)氮）用量過大、過剩，速效肥偏少，會(huì)削弱梨樹生長勢，有利于炭疽病的發(fā)生。選擇高地建園，溝系暢通，科學(xué)施肥，合理修剪，改善梨園土壤環(huán)境，能有效控制發(fā)病，說明改變環(huán)境和科學(xué)種植是控制病害的重要途徑之一。

目前，蜜梨等果品產(chǎn)業(yè)正在向規(guī)?；?、省工化、保護(hù)地的方向發(fā)展，為梨炭疽病的標(biāo)準(zhǔn)化防控提供了條件。本試驗(yàn)表明，多菌靈、咪鮮胺錳鹽、氟啶胺、苯醚甲環(huán)唑和吡唑醚菌酯的毒力較高，其中苯醚甲環(huán)唑用于防治果樹多種病害，取得了良好效果。傳統(tǒng)農(nóng)藥多菌靈不僅對梨炭疽病菌具有較高的毒力，研究發(fā)現(xiàn)，其對甜瓜枯萎病菌［9］、黃瓜菌核病菌［10］、葡萄灰霉病菌［12］、桃褐腐病菌［13］和水稻惡苗病病菌［14］等多種病菌也有很高的毒力，在當(dāng)前普遍追求新農(nóng)藥的形勢下，傳統(tǒng)農(nóng)藥仍值得繼續(xù)合理利用。

參 考 文 獻(xiàn)

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（責(zé)任編輯：程智強(qiáng)）

Biological characteristics of Colletotrichum gloeosporioides Penz.and indoor screening of fungicides

CHEN Guo-ping1，ZHAO Jie2*
（1Nicheng Station of Pudong New District Agricultural Service Center，Shanghai 201306，China；2Pudong New District Agro-Technology Extension Center，Shanghai 201201，China）

Abstract：The biological characteristics of Colletotrichum gloeosporioides Penz.were studied and the fungicides of controlling pear anthracnose were preliminarily selected in a laboratory.The results showed that pear fruit medium and pear branch medium were both plant juice media suitable for the mycelial growth，and pear fruit medium was also suitable for the spore production；Potato dextrose agar（PDA）medium and dextrose peptone agar medium were the most suitable for the colony growth and spore production respectively.The temperature suitable for the mycelial growth was 5—30℃and the best was 25℃；The pH limits suitable for the colony to produce spores was quite wide and at pH 3 the spore production was the greatest；The thermal death point of the mycelia was 56℃；The spore production was the greatest in darkness.Among the tested carbon sources，maltose，lactose and dextrose were favorable for the mycelial growth，and sucrose was the most favorable for the spore production；Among the tested nitrogen sources，yeast extract，peptone and beef extract were favorable for the mycelial growth，and peptone and beef extract were favorable for the spore production.Testing the inhibiting effects of 14 fungicides on C.gloeosporioides by growth rate method indicated that carbendazim，prochloraz-manganese chloride complex，fluazinam，difenoconazole and pyraclostrobin had high toxicity.

Key words：Pear anthracnose；Colletotrichum gloeosporioides Penz.；Biological characteristics；Fungicides

中圖分類號：S436.612

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1000-3924（2016）03-105-05

DOI：10.15955/j.issn1000-3924.2016.03.21

收稿日期：2015-09-29

基金項(xiàng)目：上海市科技興農(nóng)推廣項(xiàng)目［滬農(nóng)推字（2015）第1-4號］

作者簡介：陳國平（1958—），男，大專，農(nóng)藝師，研究方向：植物保護(hù)。Tel：021-58077713，E-mail：2746448530@qq.com

*通信作者：趙杰（1979—），男，碩士，高級農(nóng)藝師，研究方向：園藝作物栽培與植物保護(hù)。Tel：021-58588032，E-mail：zhaocaoyou@163.com