吳云飛 ，高寒松，鄺從明，胡雪梅，謝良可，劉孟良，鄒吉波，鄧　芳，黃邦偉,*

(1.廣漢市農(nóng)業(yè)局，四川 廣漢 618300；2. 資陽(yáng)市雁江區(qū)畜牧食品局)

豬瘟、藍(lán)耳病及豬O型口蹄疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律

吳云飛1，高寒松1，鄺從明1，胡雪梅1，謝良可1，劉孟良2，鄒吉波1，鄧芳1，黃邦偉1,*

(1.廣漢市農(nóng)業(yè)局，四川 廣漢 618300；2. 資陽(yáng)市雁江區(qū)畜牧食品局)

摘要：為了研究豬瘟、豬高致病性藍(lán)耳病和豬O型口蹄疫母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，制定科學(xué)合理的免疫程序。本試驗(yàn)利用ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，對(duì)仔豬0、7、14、21、28、35、42、49、56日齡的豬瘟、豬高致病性藍(lán)耳和豬O型口蹄疫母源抗體分別進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明仔豬豬瘟、豬高致病性藍(lán)耳病和豬O型口蹄疫哺乳前抗體水平均與陰性對(duì)照相當(dāng)， 抗體為0，7日齡時(shí)各疾病抗體均達(dá)到最高水平；豬瘟抗體水平在28日齡時(shí)明顯下降；豬高致病性藍(lán)耳病35日齡時(shí)抗體水平明顯下降；仔豬O型口蹄疫14日齡抗體明顯下降。豬瘟、豬高致病性藍(lán)耳和豬O型口蹄疫的母源抗體具有不同消長(zhǎng)規(guī)律，為臨床制定合理的首免日齡提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：豬瘟；豬高致病性藍(lán)耳?。回iO型口蹄疫；母源抗體；消長(zhǎng)規(guī)律；ELISA

豬瘟( Classical swine fever，CSF)、豬高致病性藍(lán)耳病(豬繁殖與呼吸障礙綜合征，Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)和口蹄疫( Foot and mouth disease，F(xiàn)MD)分別由豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV )、豬繁殖和呼吸障礙綜合癥病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus，PRRSV)和口蹄疫病毒( Foot and mouth disease virus，F(xiàn)MD)引起的急性、高度接觸傳染病，是我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)危害最大三種傳染病，該三種疫病均被我國(guó)列為一類動(dòng)物疫病。目前，世界范圍內(nèi)對(duì)該三種病主要采用強(qiáng)制免疫、禁運(yùn)、撲殺、消毒、封鎖等措施進(jìn)行防制，英國(guó)、新西蘭和澳大利亞等經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的島國(guó)采用撲殺措施來(lái)徹底消滅疫病，我國(guó)則主要依靠疫苗強(qiáng)制免疫措施來(lái)防制。但由于基層養(yǎng)殖飼養(yǎng)環(huán)境和從業(yè)人員的業(yè)務(wù)知識(shí)參差不齊，導(dǎo)致免疫程序混亂，免疫效果不一，實(shí)際生產(chǎn)中三種疫病時(shí)有發(fā)生。很多學(xué)者認(rèn)為仔豬發(fā)生疫病主要是由于該疫病的首免時(shí)間不當(dāng)，母源抗體對(duì)接種疫苗的干擾作用造成免疫失敗而引起的。因而本試驗(yàn)將利用ELISA法對(duì)不同日齡仔豬CSF、PRRS和O型口蹄疫(FMD-O)進(jìn)行系統(tǒng)檢測(cè)，進(jìn)一步弄清母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律，了解幼畜免疫動(dòng)態(tài)，以期選擇合適的首免時(shí)間，為臨床制定CSF、PRRS和FMD-O疫苗的合理免疫程序提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1材 料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物四川某規(guī)模化豬場(chǎng)年齡、胎次、飼養(yǎng)狀況、環(huán)境條件相近、同一天分娩的4頭健康母豬(DLY三元雜交配套系種豬)及所產(chǎn)仔豬。

1.1.2試驗(yàn)疫苗豬瘟耐熱保護(hù)劑活疫苗(兔源)，山西隆克爾生物制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)：2113029)；豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗(JXA1-R株)，吉林和元生物工程有限公司生產(chǎn)(批號(hào)：20131202)；豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/GX/09-7株+ O/XJ/10-11株)，內(nèi)蒙古金宇寶靈生物藥品有限公司生產(chǎn)(批號(hào)：3136082)。

1.1.3檢測(cè)試劑豬瘟病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：2014102310)和豬口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：2012021001)購(gòu)自蘭州獸醫(yī)研究所；豬藍(lán)耳病病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：20131203)購(gòu)自洛陽(yáng)萊普生信息科技公司。

1.2方 法

1.2.1試驗(yàn)動(dòng)物處理4頭母豬分娩前按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行CSF、PRRS和FMD-O免疫；分娩后分泵從每窩中隨機(jī)抽取體況相近仔豬2頭，分別編號(hào)1～8，共8頭。仔豬21日齡斷奶，試驗(yàn)期間弱仔、死豬及時(shí)淘汰。

1.2.2采血及血清制備仔豬分別于出生后0(哺乳前)、7、14、21、28、35、42、49、56日齡耳緣靜脈采血，靜置析出血清，將血清注入EP管內(nèi)，-20℃保存待檢。

1.2.3母源抗體檢測(cè)按照CSF、PRRS和FMD-O抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明操作，分別測(cè)定CSF、PRRS和FMD-O抗體OD值。

1.2.4結(jié)果判斷根據(jù)陰、陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)值，確定CSF檢測(cè)OD450值大于0.255為陽(yáng)性，小于0.255為陰性，等于0.255需復(fù)檢；PRRS檢測(cè)OD450值大于等于Cut Off 值即0.193為陽(yáng)性，小于0.193為陰性；FMD檢測(cè)OD492臨界值為1.512，小于或等于1.512為陽(yáng)性孔，大于1.512為陰性，其中抗體效價(jià)大于或等于1∶64的血清為口蹄疫O型陽(yáng)性，99%以上保護(hù)，小于1∶64則血清樣品口蹄疫O型抗體為陰性。

2結(jié)果與分析

2.1不同日齡仔豬CSF母源抗體消長(zhǎng)情況

分別測(cè)定各日齡段仔豬血清CSF的OD450值，計(jì)算8頭仔豬各日齡抗體平均OD450值水平，CSF母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律見(jiàn)圖1。由圖可知，仔豬在哺乳前CSF抗體水平與陰性對(duì)照的OD值相當(dāng)，則說(shuō)明此時(shí)CSF抗體為0，吮乳后仔豬抗體迅速上升，7日齡時(shí)抗體水平達(dá)到最高，7至28日齡抗體緩慢下降， 28日齡時(shí)迅速下降，到49日齡時(shí)抗體水平與哺乳前相當(dāng)。根據(jù)試劑盒判斷標(biāo)準(zhǔn)，仔豬在7至28日齡期間抗體水平處于完全保護(hù)階段，28至49日齡則不完全保護(hù)，49日齡后不受保護(hù)。

圖1　CSF抗體平均水平消長(zhǎng)規(guī)律

2.2不同日齡仔豬PRRS母源抗體消長(zhǎng)情況

PRRS母源抗體平均水平消長(zhǎng)規(guī)律見(jiàn)圖2。由圖可知，仔豬在哺乳前PRRS抗體水平與陰性對(duì)照的OD值相當(dāng)，此時(shí)CSF抗體水平為0，吮乳后仔豬抗體迅速上升，7日齡時(shí)抗體水平達(dá)到最高，隨后迅速下降，14至35日齡緩慢下降，35日齡后抗體水平再次迅速下降，到49日齡時(shí)抗體水平與哺乳前相當(dāng)，抗體幾乎為0。根據(jù)試劑盒判斷標(biāo)準(zhǔn)，7至35日齡期間仔豬抗體水平處于完全保護(hù)階段，35至49日齡不受完全保護(hù)，49日齡后不受保護(hù)。

圖2　PRRS抗體平均水平消長(zhǎng)規(guī)律

2.2不同日齡仔豬FMD-O阻斷ELISA檢測(cè)母源抗體消長(zhǎng)情況

待檢血清1∶64稀釋的FMD-O母源抗體OD492平均值見(jiàn)圖3。由圖可知，仔豬在哺乳前FMD-O的抗體水平與陰性對(duì)照的OD值相當(dāng)，說(shuō)明此時(shí)FMD-O抗體為0，吮乳后仔豬抗體迅速上升(OD值越低抗體水平越高)，7日齡時(shí)抗體水平達(dá)到最高值，隨后迅速下降，14至28日齡期間緩慢下降，28日齡后下降明顯，到35日齡時(shí)抗體水平與哺乳前相當(dāng)，抗體幾乎為0。根據(jù)試劑盒判斷標(biāo)準(zhǔn)，7至14日齡期間仔豬抗體水平處于完全保護(hù)階段，14至28日齡不受完全保護(hù)，28日齡后不受保護(hù)。

圖3　FMD-O抗體平均水平消長(zhǎng)規(guī)律

3討論

母源抗體對(duì)于提高仔豬抵抗力、抗感染能力起著決定性作用，仔豬出生后依賴于母豬體內(nèi)的抗體獲得被動(dòng)免疫，然而仔豬獲得母源抗體不是經(jīng)過(guò)胎盤傳遞而是通過(guò)吮吸母乳獲得的。因?yàn)槟肛i胎盤與胎兒血液循環(huán)之間隔著數(shù)層組織，阻斷了抗體的運(yùn)輸；而仔豬通過(guò)吮吸母乳，母源抗體經(jīng)過(guò)胃腸上皮細(xì)胞吸收而進(jìn)入仔豬血液循環(huán)內(nèi)。本試驗(yàn)中CSF、PRRS和FMD-O三種抗體在仔豬哺乳前的檢測(cè)值與陰性對(duì)照相當(dāng)，可見(jiàn)三種疫病并沒(méi)有在母豬體內(nèi)獲得相應(yīng)抗體，哺乳后三種疫病抗體迅速上升，試驗(yàn)結(jié)果與之前研究相同。因此,科學(xué)地做好母豬免疫工作，并保證新生仔豬能夠及時(shí)足量吃好初乳對(duì)提高仔豬抵抗力尤為重要。

國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究表明，仔豬超前免疫能夠有效降低仔豬發(fā)病率，提高仔豬成活率，保證仔豬在吮乳前產(chǎn)生主動(dòng)免疫。 從本試驗(yàn)研究結(jié)果來(lái)看超前免疫可以避開(kāi)母源抗體的干擾，科學(xué)可行。然而在實(shí)際應(yīng)用中我國(guó)部分養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)用效果不理想，其原因可能是未能嚴(yán)格執(zhí)行超前免疫后 2 h 內(nèi)仔豬不能吃初乳，初乳中母源抗體干擾弱毒苗復(fù)制所致。

目前，許多規(guī)模場(chǎng)中時(shí)常有CSF、PRRS和FMD疾病發(fā)生，許多學(xué)者認(rèn)為這與疫苗首免日齡有關(guān)。由于母源抗體具有兩面性，若免疫時(shí)間過(guò)早，可能受到母源抗體的干擾導(dǎo)致免疫失敗；若免疫時(shí)間過(guò)遲，母源抗體水平過(guò)低，易引發(fā)疾病，因此首免日齡的選擇顯得尤為重要。本試驗(yàn)中CSF、PRRS和FMD-O抗體水平均在7日齡時(shí)最高，隨后下降，一些研究成果與本試驗(yàn)相似。林毅等應(yīng)用豬瘟 Dot - ELISA 試劑盒檢測(cè)仔豬母源抗體在第7天達(dá)到最高；李明義等采用 IHA 試驗(yàn)方法檢測(cè)仔豬母源抗體在 7 日齡時(shí)達(dá)到高峰，隨后仔豬的母源抗體水平迅速下降。母安雄等采用ELISA試劑盒檢測(cè)發(fā)現(xiàn)仔豬PRRS母源抗體在10日齡時(shí)達(dá)到最高。高世杰等研究的豬口蹄疫10日齡達(dá)到峰值相當(dāng)；吳在玉等研究也取得相似結(jié)果。從圖中可以看出,仔豬在7至14日齡雖然仍在吮吸母乳，但CSF、PRRS和FMD三種抗體水平都迅速下降，推測(cè)這可能與仔豬生長(zhǎng)速度過(guò)快有關(guān)。生產(chǎn)中，疫苗的抗體效價(jià)與保護(hù)關(guān)系一些學(xué)者以 3 個(gè)區(qū)帶來(lái)表述，即敏感帶 ( 易受感染滴度 ) 、 灰色帶 ( 部分保護(hù)滴度 ) 和保護(hù)帶 ( 完全保護(hù)帶 ) 。本試驗(yàn)可得知,CSF的的保護(hù)帶在7至28日齡，灰色帶在28至49日齡，敏感帶在49日齡以后，與張新成等研究相符；PRRS的的保護(hù)帶在7至35日齡，灰色帶在35至49日齡，敏感帶在49日齡以后，與母安雄等研究基本吻合；FMD-O的的保護(hù)帶在7至14日齡，灰色帶在14至28日齡，敏感帶在28日齡以后。

因此，考慮到仔豬免疫應(yīng)答能力的發(fā)育，以及減少母源抗體的干擾，推薦臨床上CSF的首免日齡在28日齡左右，PRRS首免日齡在35日齡左右， FMD-O首免日齡在21日齡左右；根據(jù)抗體半衰期長(zhǎng)短，免疫順序可以是先免FMD-O，然后是免PRRS，最后免CSF。本試驗(yàn)首次對(duì)母源抗體進(jìn)行全面系統(tǒng)的檢測(cè)，具有重要的生產(chǎn)指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn):

[1]殷震, 劉景華. 動(dòng)物病毒學(xué)(第二版)[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1997.

[2]鄧廣金.豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果試驗(yàn)[J].湖北畜牧獸醫(yī), 2009(7):28-29.

[3]楊先富, 王開(kāi)功, 李毅, 等. 仔豬口蹄疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律監(jiān)測(cè)[J]. 山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào), 2007, 26(1): 26-29.

[4]邱伯根, 張強(qiáng), 邱立新, 等. 母豬抗體對(duì)豬口蹄疫疫苗主動(dòng)免疫應(yīng)答的影響[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué), 2006,36(S1):1-4.

[5]嚴(yán)達(dá)偉, 肖嘯, 連林生, 等. 豬瘟超前免疫對(duì)仔豬生長(zhǎng)及抗體水平的影響[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)與動(dòng)物科學(xué), 2004 , 21(7 ): 34 -36 .

[6]Corthier G, Charley B. Influence of colostral antibodies on pig immunization against hog cholera virus [J]. Ann Res Vet, 1978 , 9 (2) : 245 -253 .

[7]王波, 陳靜，王敏, 等. 仔豬豬瘟母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2010, 30(4):453-455.

[8]吳在玉, 張杰. 豬O型口蹄疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律及疫苗免疫的干擾作用[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, 41(14) :6292-6293.

[9]林毅, 馮金傳, 張道永. 規(guī)?；i場(chǎng)4種豬瘟免疫程序的免疫效果比較[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科技, 2000, 30 (4):20 -22.

[10]李明義, 白志娟, 王莉娟, 等. 豬瘟滅活疫苗抗體消長(zhǎng)規(guī)律動(dòng)態(tài)研究[J]. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2005, 27 (5):385 -387 .

[11]母安雄, 楊宗照, 嚴(yán)惠群, 等. 仔豬 PRRS 母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律及疫苗免疫效果觀察。浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008(1)：110-112

[12]高世杰,竇永喜,程愛(ài)華,等.母源抗體對(duì)豬口蹄疫疫苗免疫應(yīng)答的影響[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2011, 31(1):45-48.

[13]張新成, 李官兵, 史子學(xué), 等. 豬瘟母源抗體在仔豬體內(nèi)持續(xù)時(shí)間的研究[J]. 養(yǎng)豬, 2008 (1) : 46-48.

The Maternal Antibodies Dynamics Changes of CSF, PRRS and FMD-O

WU Yun-fei1, GAO Han-song1, KUANG Cong-ming1, HU Xue-mei1, XIE Liang-ke1,LIU Meng-liang2, ZOU Ji-bo1, DENG Fang1, HUANG Bang-wei1,*

(1.AgriculturalBureauofGuanghanCity,GuanghanSichuan618300;2.AnimalHusbandryandFoodBureauofYanjiangDistrict)

Abstract:In order to study the maternal antibodies dynamics changes of classical swine fever(CSF), porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS), and O type foot and mouth disease(FMD-O), the scientific and reasonable immune procedure was established.The maternal antibodies of CSF, PRRS and FMD-O in age 0, 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 and 56 days were detected respectively by the ELISA in this experiment. The results showed that the antibodies levels of CSF, PRRS and FMD-O before sucking were commensurate with negative control, and it reached the top level at 0 and 7 days. The antibody levels of CSF, PRRS and FMD-O decreased obviously at 28 days, 35 days and 14 days, respectively. The maternal antibodies of CSF, PRRS and FMD-O have different dynamics changes, and it can supply a reference for establishing scientific and reasonable the date of initial immunity.

Key words:classical swine fever (CSF); porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS); O type foot and mouth disease (FMD-O); maternal antibody; dynamics ELISA

[收稿日期]2015-09-14

[作者簡(jiǎn)介]吳云飛(1986-)，男，重慶墊江人，碩士，在廣漢市農(nóng)業(yè)局主要從事動(dòng)物疫病預(yù)防與控制工作。E-mail：wyf198674@163.com。 *[通訊簡(jiǎn)介]黃邦偉(1966-)男，四川廣漢人，本科，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防控工作。E-mail：121699381@qq.com

[中圖分類號(hào)]S 852.43

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1004-6704(2016)01-0029-04