毛迎新，譚榮榮，龔自明*，王友平（.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所，湖北　武漢　430064；.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保土肥研究所，湖北 武漢 430064）

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Ecob N P V-H B對(duì)不同世代茶尺蠖的防治效果

毛迎新1，譚榮榮1，龔自明1*，王友平2
（1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所，湖北武漢430064；2.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保土肥研究所，湖北 武漢 430064）

摘 要：采用茶園小區(qū)藥效試驗(yàn)結(jié)合室內(nèi)生物測(cè)定的方法，測(cè)定茶尺蠖核型多角體病毒湖北株（Eo N P V- H B）的致病力及其與溫度的關(guān)系。結(jié)果表明，應(yīng)用濃度5×106PIB·m L- 1的病毒液對(duì)不同世代茶尺蠖的防治效果存在極顯著的差異，對(duì)茶尺蠖1～6代的防效依次為100%、79.5%、26.1%、11.4%、23.3%、72.4%；溫度能顯著影響Eo N P V- H B的致病力，溫度高于27℃時(shí)，Eo N P V- H B后致病力明顯下降。因此，田間應(yīng)用Eo N P VH B宜在茶尺蠖第1、2、6代發(fā)生期，且以防治第1代為好。

關(guān)鍵詞：茶尺蠖核型多角體病毒；湖北毒株；生物測(cè)定；田間防效

茶尺蠖Ectropis obliqua Prout屬鱗翅目（Lepidoptera）、尺蛾科（Geo metridae）、灰尺蛾亞科（Enno minae），是我國主要茶樹害蟲之一。分布遍及我國各主產(chǎn)茶區(qū)，尤以浙、蘇、皖、鄂地區(qū)危害嚴(yán)重。幼蟲食葉常致茶叢光禿，嚴(yán)重影響茶葉的產(chǎn)量［1］。我國茶尺蠖一般年發(fā)生5～6代，除第1代發(fā)生整齊以外，其余各世代重疊，防治難度很大。茶尺蠖核型多角體病毒（Ectropis obliqua nucleopolyhedrovirus簡稱Eo N P V）是茶尺蠖幼蟲的重要病原微生物，具有殺蟲效果好，對(duì)人畜和其他高等動(dòng)物安全，不污染環(huán)境，不傷害天敵，不易導(dǎo)致害蟲產(chǎn)生抗性，且容易在害蟲中引起流行病等優(yōu)點(diǎn)，是當(dāng)前我國茶尺蠖無公害防治的重要手段之一。

目前，已知茶尺蠖核型多角體病毒有2個(gè)不同的株系。一株為20世紀(jì)70年代在我國皖南茶園首次發(fā)現(xiàn)（簡稱Ecob N P V-A H），另一株是從我國湖北茶園采集分離（簡稱Ecob N P V-H B），二者不僅在遺傳信息上存在不同，而且在致病力方面也有差異［2，3］。王曉慶等［4］就8個(gè)省份茶尺蠖種群對(duì)Eo N P V兩個(gè)株系的敏感性進(jìn)行研究，結(jié)果表明Eo N P V-A H對(duì)浙江和貴州兩種群的致病效果較好，Eo N P V-H B對(duì)其他6個(gè)種群的致病力相對(duì)較強(qiáng)。此前，對(duì)于茶尺蠖病毒安徽分離株殺蟲劑的田間使用技術(shù)已有系統(tǒng)研究報(bào)道［5］，而關(guān)于茶尺蠖病毒湖北株大田防效的研究還僅局限于個(gè)別世代，其對(duì)茶尺蠖不同世代的防治效果尚不清楚。為此，筆者開展Ecob N P V-H B防治不同世代茶尺蠖大田試驗(yàn)，旨在為高效利用該病毒提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1供試?yán)ハx和病毒

從湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所金水試驗(yàn)基地采集健康茶尺蠖蛹，置于養(yǎng)蟲器皿中（直徑50 cm盆上面配有大小相同的罩子，并用紗布覆蓋），室溫下飼養(yǎng)，待其幼蟲長至2齡進(jìn)行染毒試驗(yàn)；供試病毒為前一年增殖的典型Ecob N P V-H B病蟲尸。

1.2Ecob N P V-H B的分離和提純

將感染Ecob N P V的茶尺蠖典型蟲尸置于研缽中加少量無菌水研磨，研磨均勻后用雙層紗布過濾，濾液經(jīng)離心機(jī)600 r·min- 1低速離心5 min，取上清液再經(jīng)3500 r·min- 1高速離心30 min，反復(fù)離心2～3次，棄去上清液，用無菌水懸浮沉淀即得多角體粗制品，4℃下保存于冰箱中備用，使用前用血球記數(shù)板記數(shù)多角體個(gè)數(shù)。

1.3Ecob N P V-H B的室內(nèi)毒力測(cè)定

分別于茶尺蠖第2代、第3代發(fā)生期進(jìn)行Ecob N P V-H B生物測(cè)定。設(shè)1×106、5×106、1× 107、1.5×107和2×107PIB·m L- 1共5個(gè)濃度處理（注：PIB是多角體（polyhedral inclusion body）的英文簡寫），病毒液均勻噴布在供茶尺蠖取食的茶樹枝葉上，以噴布周到無藥液滴下為度，待病毒液自然風(fēng)干后接蟲，每處理接茶尺蠖2齡幼蟲50頭，各處理均重復(fù)3次，并設(shè)清水對(duì)照。噴毒后每48 h更換1次新鮮枝葉，從第5天開始逐日觀察害蟲感染病毒的情況，收集感染Ecob N P VH B的典型蟲尸，并記錄感染病毒的死亡蟲數(shù)。根據(jù)A bbot［6］描述的方法計(jì)算死亡率，公式如下：

死亡率（%）=累計(jì)死亡蟲口數(shù)/總蟲口數(shù)×100

校正死亡率（%）=（處理組死亡率-對(duì)照組死亡率）/（100 -對(duì)照組死亡率）×100

1.4不同世代茶尺蠖田間防治試驗(yàn)

選擇在湖北省茶尺蠖發(fā)生比較嚴(yán)重的浠水縣散花鎮(zhèn)開展應(yīng)用Ecob N P V-H B的田間防治試驗(yàn)，具體的防治時(shí)間、防治地點(diǎn)、防治世代、病毒使用濃度（為此前通過田間試驗(yàn)確定的適宜濃度）以及蟲齡詳見表1。病毒采用蓬面噴霧方式施用，每處理5 m長茶行噴病毒液500 m L，每處理重復(fù)3次，處理與對(duì)照間設(shè)隔離行。傍晚（紫外線強(qiáng)度減弱）噴藥，噴藥前及幼蟲化蛹前調(diào)查活蟲數(shù)，然后計(jì)算其防治效果，公式［7］如下：

蟲口減退率（%）=（施藥前蟲口數(shù)-施藥后蟲口數(shù)）/施藥前蟲口數(shù)×100

防效（%）=（處理蟲口減退率-對(duì)照蟲口減退率）/（100 -對(duì)照蟲口減退率）×100

表1　茶尺蠖病毒田間試驗(yàn)Table 1 Field trials with EcobN P V-H B at tea plantations

1.5數(shù)據(jù)處理

采用D PS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)［8］進(jìn)行單因素方差分析、Duncan’s多重比較、計(jì)算L C50。

2　結(jié)果與分析

2.1Ecob N P V-H B對(duì)不同世代茶尺蠖的大田防治效果

在田間應(yīng)用同一濃度的Ecob N P V-H B防治1～6代茶尺蠖，各代的防治效果經(jīng)Duncan新復(fù)極差法分析，結(jié)果表明，Ecob N P V-H B對(duì)不同世代茶尺蠖的防治效果差異極顯著（F值：688.994；顯著水平：0.00000），其中對(duì)第1代2～3齡幼蟲的防效高達(dá)100%，第2代2～4齡幼蟲防效達(dá)79.5%，第3代2～3齡幼蟲防效為26.1%，第4、5代1～2齡幼蟲的防效分別為11.4%和23.3%，第6代2～4齡幼蟲的防效72.4%，除對(duì)第3代與第5代茶尺蠖之間的防治效果無顯著性差異以外，其它各代間防效差異均達(dá)顯著水平（表2）。

2.2氣溫對(duì)Ecob N P V-H B大田防效的影響

為摸清不同世代防治效果差異顯著性的原因，我們于翌年茶尺蠖第2、3代再次進(jìn)行毒力測(cè)定。將Ecob N P V對(duì)第2、3代茶尺蠖幼蟲的致死率結(jié)果轉(zhuǎn)化成濃度對(duì)數(shù)值——校正死亡率機(jī)率值回歸方程，其中以濃度對(duì)數(shù)值為x，校正死亡率機(jī)率值為y，求得Ecob N P V-H B對(duì)第2、3代茶尺蠖2齡幼蟲的毒力回歸方程和致死中濃度分別為：y = - 0.7294 + 0.9309x，L C50= 1.43×106PIB·m L- 1；y = - 64.93 + 9.95x，L C50= 1.07× 107PIB·m L- 1（表3）。由表3可知，當(dāng)平均溫度為（24±2）℃和（27±2）℃條件下，Ecob N P V對(duì)相同齡期茶尺蠖幼蟲的毒力相差7.5倍。室內(nèi)毒力測(cè)定，可以排除紫外線、雨水沖擊、p H值等對(duì)病毒致病力的影響因子，在此情況下，病毒毒力相差較大的原因，可能就是氣溫所致。

表2　Ecob N P V- H B對(duì)不同世代茶尺蠖的田間防治效果Table 2 Control effect of EcobN P V-H B against larva of different generation of Ectropisobliqua

為此，從湖北省氣象與生態(tài)自動(dòng)監(jiān)測(cè)網(wǎng)獲得茶尺蠖防治期間的日平均溫度，通過對(duì)各代茶尺蠖的防治效果與應(yīng)用病毒防治期間的日平均溫度關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)二者確實(shí)存在密切相關(guān)關(guān)系。第1代茶尺蠖防治期間日平均溫度低于27℃，防效高達(dá)100%；第2代噴毒后第4 d、第7 d、第8 d和第9 d的日平均溫度在27℃以上，防效有所降低；第3代防治期間5 d日平均氣溫在27℃以上，其中3 d在噴毒后前5 d，當(dāng)代的防效降為26.1%；第4代防治期間的日平均溫度全部在27℃以上，當(dāng)代的防效則僅為11.4%；第5代噴毒后前5 d的日平均溫度較高，此后日平均溫度降至27℃以下，當(dāng)代的防效較第4代有所上升；第6代防治期間僅1 d日平均溫度在27℃以上，防效升至70.4%。由此可見，Ecob N P V的田間防效隨防治期間日平均溫度27℃以上天數(shù)的增多而下降，且以防治初期（噴毒后前5 d）的日平均溫度對(duì)其防效影響最為顯著。

表3　Ecob N P V- H B對(duì)茶尺蠖2齡幼蟲的毒力測(cè)定Table 3 Toxicity of EcobN P V-H B on 2ndinstar larvae

3　討論

昆蟲病毒作為一種生物防治手段，容易受環(huán)境因子影響，通常認(rèn)為昆蟲齡期、紫外線強(qiáng)度［9］以及溫度等都能影響昆蟲病毒的致病力。本試驗(yàn)通過對(duì)Ecob N P V-H B感染2代茶尺蠖的生物測(cè)定結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)，溫度高于27℃［第3代茶尺蠖發(fā)生期溫度通常為（27±2）℃］Ecob N P V-H B的致病力受到明顯抑制，表現(xiàn)為幼蟲病死率低。此前葉恭銀等［10］研究茶尺蠖核型多角體病毒致病力時(shí)也發(fā)現(xiàn)存在一個(gè)臨界點(diǎn)溫度，低于該溫度，致病力頗強(qiáng)，高于這個(gè)溫度，致病力則明顯下降。

從Ecob N P V-H B在田間對(duì)不同世代茶尺蠖的防治效果可以看出，茶尺蠖病毒湖北株應(yīng)選擇在每年第1、2、6代使用，又以防治第1代效果最佳，第2代次之。這與殷坤山等［5］報(bào)道的茶尺蠖病毒安徽分離株殺蟲劑的田間使用建議基本一致。由于每年第1代茶尺蠖發(fā)生相對(duì)整齊且數(shù)量較少，此時(shí)防治不僅可以提高防治效果、減輕對(duì)春茶的危害，還可以控制以后各代的發(fā)生。因此，第1代是一年中使用茶尺蠖病毒防治的最佳時(shí)期，也是關(guān)鍵期。如果茶尺蠖第1、2代發(fā)生期未進(jìn)行及時(shí)防治，隨后受夏季的高溫和強(qiáng)紫外線等因素影響，病毒的存活力將會(huì)被弱化，因此，在第3～5代應(yīng)減少使用病毒防治，但可以在第6代防治，這樣有利于控制翌年的蟲口發(fā)生。

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Pest Control at Tea Plantations by Infecting Larvae of Generations of Ectropisobliqua Prout with E. obliqua Nucleopolyhedrovirus

M A O Ying-xin1，T A N Rong-rong1，G O N G Zi-ming1 *，W A N G You-ping2
（1.Instituteof Fruit and Tea，Hubei Academy of Agricultural Sciences，W uhan，Hubei 430064，China；2.Instituteof Plant Protection，Soiland Fertilizers，Hubei Academy of Agricultural Sciences，W uhan，Hubei 430064，China）

Abstract：As a potential alternative pest control agent on Ectropis obliqua Prout in the tea plantations，the E. obliqua nucleopolyhedrovirus H ubei strain（Ecob N P V- H B）was tested in the lab，as well as in the field，to evaluate its virulence to the larvae of different generations of the m oth. The bioassays showed that，at a tem perature above 27℃，the pathogenicity of Ecob N P V- H B toward the pest significantly declined. U nder field conditions，the control effect with a viral treatment of 5×106polyhedralinclusion bodies（PIB）·m L- 1on the 1stto the 6thgenerations of the larvae of the m oth were 100%，79.5%，26.1%，11.4%，23.3%，and 72.4%，respectively. Thus，the maxim u m effect could be achieved with an application on the 1stinstar larva，w hereas treatment on the 2ndand 6thgenerations would expect to receive so mew hat reduced efficacies.

Key words：Ectropisobliqua nucleopolyhedrovirus；H ubei strain；bioassay；control effect

中圖分類號(hào)：S435.711

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2096 - 0220（2016）01 - 0054 - 04

收稿日期：2015 - 11 - 26初稿；2016 - 12 - 20修改稿

基金項(xiàng)目：國家茶葉產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（C A R S - 23）；湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心資助項(xiàng)目（2011 - 620 - 005 - 003 - 04）。

作者簡介：毛迎新（1980 -），男，副研究員，主要從事茶樹害蟲綜合治理研究。

*通訊作者：龔自明（1966 -），男，研究員，主要從事茶葉加工和栽培管理。E - mail：ziminggong @ 163.co m