楊良權(quán), 周東光, 婁歡歡, 毛大華

(1.秦皇島市婦幼保健院 乳腺科, 河北 秦皇島　066000； 2.秦皇島市開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)院 外科, 河北 秦皇島　066004； 3.貴州醫(yī)科大學(xué)附院， 貴州 貴陽(yáng)　550004)

DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα在乳腺癌中的表達(dá)*

楊良權(quán)1, 周東光1, 婁歡歡2, 毛大華3

(1.秦皇島市婦幼保健院 乳腺科, 河北 秦皇島066000； 2.秦皇島市開(kāi)發(fā)區(qū)醫(yī)院 外科, 河北 秦皇島066004； 3.貴州醫(yī)科大學(xué)附院， 貴州 貴陽(yáng)550004)

[摘要]目的： 分析DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα(TOPⅡα)在乳腺癌中的表達(dá)。方法： 收集141例病理確診的乳腺癌組織，采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)癌組織中TOPⅡα的表達(dá)，分析TOPⅡα表達(dá)與乳腺癌患者年齡、家族史、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分級(jí)的關(guān)系，觀(guān)察TOPⅡα在不同分子分型(Luminal A型、B樣型、B-like型，HER2表達(dá)型及三陰性)乳腺癌中的表達(dá)。結(jié)果： TopⅡα表達(dá)水平與乳腺癌患者的年齡、家族史、月經(jīng)狀況、腫瘤大小及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)，與乳腺癌病理分級(jí)有關(guān)(P<0.05)，隨腫瘤組織學(xué)分級(jí)越高，TopⅡα表達(dá)水平越高；TopⅡα在Luminal B-like型、HER2表達(dá)型和三陰性乳腺癌患者中明顯高表達(dá)，在Luminal A型和B樣型中低表達(dá)。結(jié)論： TopⅡα表達(dá)水平與乳腺癌病理分級(jí)及分子分型有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]乳腺腫瘤； DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα； 基因表達(dá)； 免疫組織化學(xué)

近年來(lái)，乳腺癌在我國(guó)的發(fā)病率迅速升高，在部分發(fā)達(dá)城市已成為女性惡性腫瘤的第一大疾病。乳腺癌治療以手術(shù)、化療、放療、內(nèi)分泌治療及基因靶向治療為主,其中化療是控制復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的主要手段，多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)是影響乳腺癌輔助化療療效的重要原因，MDR產(chǎn)生的機(jī)制是多基因及多步驟綜合作用的結(jié)果[1-3]。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα( topoisomerase Ⅱα, Top Ⅱα)基因是一個(gè)耐藥基因，TopoⅡα能對(duì)特殊的DNA 序列進(jìn)行識(shí)別，并通過(guò)Tyr 與DNA 5′斷端的磷酸基以共價(jià)鍵結(jié)合，改變DNA 的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，催化斷裂鏈的重新連接DNA分子鏈的過(guò)程[4]。TopoⅡα在喉鱗狀細(xì)胞癌、霍奇金淋巴瘤、彌漫性大B細(xì)胞性淋巴瘤等腫瘤細(xì)胞中高度表達(dá), 并且與細(xì)胞增殖高度相關(guān)[5]。本研究通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)乳腺癌組織中TOPⅡα表達(dá)，探討TOPⅡα表達(dá)與乳腺癌臨床病理的關(guān)系及其在不同分子分型乳腺癌中的表達(dá)特點(diǎn)。

1資料與方法

1.1一般資料

2012年1月～2014年10月收治的乳腺癌女性患者141例，31～61歲，中位年齡42歲，病理分期Ⅰ期18例，Ⅱ期89例，Ⅲ期34例，所選標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。排除術(shù)前均行化療、放療或內(nèi)分泌治療患者。

1.2方法

所有乳腺癌標(biāo)本組織經(jīng)甲醛液固定，石蠟包埋，采用免疫組織化學(xué)Envision二步法檢測(cè)雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER-2)、增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原(Ki-67)及TOPⅡα表達(dá)(試劑盒均購(gòu)自丹麥DAKO公司)，步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，以已知陽(yáng)性組織作陽(yáng)性對(duì)照，用DAB顯色，蘇木素復(fù)染，根據(jù)文獻(xiàn)[6]判斷結(jié)果。在細(xì)胞核內(nèi)有黃色或棕黃色著色顆粒為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞<5%為(-)，5%～10%為可疑(±)，10%～50%為(+)，50%～75%為(++)，>75%為(+++)；(+)-(+++)判斷為陽(yáng)性患者，(-)及(±)判斷為陰性患者。

1.3觀(guān)察指標(biāo)

分析TOPⅡα表達(dá)與乳腺癌患者年齡、家族史、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分級(jí)的關(guān)系，觀(guān)察TOPⅡα在不同分子分型(Luminal A型、B樣型、B-like型，HER2表達(dá)型及三陰性)乳腺癌中的表達(dá)。分子分型按文獻(xiàn)[6]分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)， Luminal A型(ER/PR陽(yáng)性，且PR高表達(dá)，HER2陰性，Ki-67低表達(dá))，Luminal B樣型(ER/PR陽(yáng)性，HER2陰性，Ki-67高表達(dá)或PR低表達(dá))，Luminal B-like型(ER/PR陽(yáng)性，HER2陽(yáng)性，任何狀態(tài)的Ki-67)，HER2表達(dá)型(HER2陽(yáng)性，ER/PR陰性)，三陰性(HER2陰性，ER/PR陰性)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS 17.0系統(tǒng)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用百分比或率(%)表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，以P<0.05為有差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

TopⅡα表達(dá)水平與乳腺癌患者的年齡、家族史、月經(jīng)狀況、腫瘤大小及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)，與乳腺癌病理分級(jí)有關(guān)(P<0.05)，隨腫瘤的組織學(xué)分級(jí)越高，TopⅡα表達(dá)水平越高，見(jiàn)表1。TopⅡα在Luminal B-like型、HER2表達(dá)型和三陰性乳腺癌患者中明顯高表達(dá)，在Luminal A型和B樣型中低表達(dá)。見(jiàn)表2。

表1　TopⅡα表達(dá)與乳腺癌臨床病理指標(biāo)

表2　TOPⅡα表達(dá)與不同分子分型乳腺癌(n，%)

3討論

乳腺癌的發(fā)生是一個(gè)多基因、多步驟參與的復(fù)雜過(guò)程，無(wú)論在分子生物學(xué)特征、組織形態(tài)、免疫表型、基因特點(diǎn)，還是對(duì)治療的反應(yīng)上都存在著極大的差異，而這種異質(zhì)性的存在提示其在分子水平上可能具有不同的分子亞型。TopⅡα基因產(chǎn)物為同型二聚體蛋白質(zhì)，其與DNA能形成穩(wěn)定的共價(jià)復(fù)合物；同時(shí)TopⅡα也可通過(guò)染色體上兩個(gè)解離位點(diǎn)作用于DNA，即DNase 超敏感區(qū)和斯加弗得相關(guān)區(qū)(scaf-fold association region, SAR)，是客觀(guān)反映細(xì)胞惡性程度的指標(biāo)之一[1]。TopⅡα可作為增殖指數(shù)，表達(dá)與S-G2/M期，其高表達(dá)使腫瘤細(xì)胞復(fù)制加快，提高腫瘤的惡性程度[2]。有研究表明，TopⅡα在乳腺癌臨床后期病人如伴有TopⅡα高表達(dá)，其預(yù)后較低表達(dá)者差[3]。本研究結(jié)果顯示，TopⅡα表達(dá)水平與乳腺癌患者的年齡、家族史、月經(jīng)狀況及腫瘤大小和是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P>0.05)，與乳腺癌病理分級(jí)有關(guān)(P<0.05)，且隨組織學(xué)分級(jí)越高，TopⅡα表達(dá)水平越高，說(shuō)明TopⅡα的表達(dá)與乳腺癌的惡性程度有關(guān)，TopⅡα能夠較為客觀(guān)地反映乳腺癌的增殖活性，對(duì)預(yù)后有一定的預(yù)測(cè)作用。

TopⅡα陽(yáng)性率在有HER2擴(kuò)增的Luminal B-like和HER2表達(dá)型中占71.55%(47/66)，明顯高于其他3種類(lèi)型，與Konecny等[7]的檢出率(62.6%)相近。有文獻(xiàn)報(bào)道，在HER2基因擴(kuò)增的原發(fā)性乳腺癌中，TopⅡα基因出現(xiàn)擴(kuò)增的概率為24.3%～ 55%， TopⅡα和HER2之間存在一定的相關(guān)性[8]。因HER2與TopⅡα都位于17q12-22，故兩者在基因表達(dá)和變化上存在某種聯(lián)系，HER2的過(guò)表達(dá)，能夠引起TopⅡα基因和蛋白質(zhì)的改變[9-10]。王云翔等[11]認(rèn)為T(mén)opⅡα蛋白表達(dá)可以作為HER2過(guò)表達(dá)型乳腺癌的獨(dú)立預(yù)后因子。三陰性乳腺癌TopⅡα表達(dá)率71.4%(20/28)，Tan等[12]采用免疫組化法研究了三陰性乳腺癌的TopⅡα表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)三陰性中存在較廣泛的TopⅡα表達(dá)水平(79.4%)，認(rèn)為T(mén)opⅡα可作為判斷三陰性乳腺癌患者預(yù)后及指導(dǎo)化療的有效指標(biāo)[13-15]。本研究結(jié)果顯示，TopⅡα表達(dá)水平達(dá)(71.4%)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，也支持上述觀(guān)點(diǎn)。

綜上，在乳腺癌患者癌組織中，病理分級(jí)越高，TopⅡα表達(dá)越高。TopⅡα在有HER2擴(kuò)增的Luminal B-like型、HER2表達(dá)型乳腺癌中有較高表達(dá)，說(shuō)明opⅡα、HER2共表達(dá)提示腫瘤惡性程度更高。TopⅡα表達(dá)水平與乳腺癌病理分級(jí)及分子分型有關(guān)。

4參考文獻(xiàn)

[1] Park K,Kim J,Lim S,et al. Topoisomerase II-alpha (topoII) and HER2 amplification in breast cancers and response to preoperative doxorubicin chemotherapy[J].European Journal of Cancer, 2003(5):631-634.

[2] 施為建，王渝芝，蔣鳳蓮，等. 乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中多藥耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)情況[J].中國(guó)健康月刊， 2011(8):15-16.

[3] Andrea JE, Adachi K, Morgan AR.Fluorometric assays for DNA topoisomerases and topoisomerase-targeted drugs: quantitation of catalytic activity and DNA cleavage[J] .Molecular Pharmacology, 1991(4):495-501.

[4] 錢(qián)晨彭,再利,巢暉. 靶向抑制DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶的抗腫瘤藥物研究[J]. 大學(xué)化學(xué), 2014(1):1-10.

[5] 潘亞奇,袁公,楊艷維. DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα與腫瘤[J]. 醫(yī)學(xué)信息, 2011(2):415.

[6] 中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌專(zhuān)業(yè)委員會(huì). 中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2013版) [J]. 中國(guó)癌癥雜志, 2013(8):637-693.

[7] Konecny GE, Untch M. HER2 gene amplification and response to dose dense sequential epirubicin and paclitaxel as neoadjuvant therapy of primary breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat， 2006 (1): 48.

[8] Siddiqa A,Long LM,Li L,et al.Expression of HER-2 in MCF-7 breast cancer cells modulates anti-apoptotic proteins Survivin and Bcl-2 via the extracellular signal-related kinase (ERK) and phosphoinositide-3 kinase (PI3K) signalling pathways[J]. BMC Cancer， 2008(8)：129．

[9] Di Leo A, Larsimont D, Gabcberg D,et al. HER-2 and topo-isomerase IIα as predictive markers in a population of node-positive breast cancer patients randomly treated with adjuvant CMF or epirubicin plus cyclophosphamide[J].Ann Oncol, 2001(8):1081-1089.

[10]MacGrogan G, Rudolph P, De Mascarel I. DNA topoisomerase II alpha expression and the response to primary chemotherapy in breast cancer[J]. British Journal of Cancer, 2003(5):666-671.

[11]王云翔，范宇，張勤，等. TopⅡα蛋白在不同分子亞型乳腺癌中的表達(dá)及其預(yù)后價(jià)值[J].中國(guó)腫瘤臨床， 2012(7):129-130.

[12]Tan DS,Marchio C,Jones RL. Triple negative breast cancer: molecular profiling and prognostic impact in adjuvant anthracycline-treated patients[J]. Breast Cancer Research and Treatment, 2008(1):27-44.

[13]王曉文，楊亮，朱麗萍，等. Ki-67及TopⅡα在三陰乳腺癌中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)普通外科雜志， 2014(5):692-694.

[14]況麗平，王媛媛，管慧紅，等. TopⅡα和Ki-67在不同分子分型乳腺癌組織中的表達(dá)及意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志， 2014(5):778-780.

[15]陳秋蘭，周紹榮，焦蘭農(nóng)，等.乳腺癌組織中HER-2、VEGF和Ki67的表達(dá)及臨床意義.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志， 2015(15)：38-40.

(2016-03-13收稿，2016-05-16修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 劉華

The Expression and Clinical Significances of TOPⅡα in Different Molecular Type of Breast Cancer

YANG Liangquan1, ZHOU Dongguang1, LOU Huanhuan2, MAO Dahua3

(1.DepartmentofGalactophore,Maternal&ChildCareCenterofQinhuangdao,Qinhuangdao066000,Hebei,China;2.DepartmentofSurgery,QinhuangdaoDevelopmentDistrictHospital,Qinhuangdao066004,Hebei,China;3.theAffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To analyze expression and clinical significance of TOP II α in breast cancer. Methods： The breast cancer tissues were collected from 141 patients with pathologically diagnosed breast cancer. The expression of Top II α in cancer tissue was detected by immunohistochemistry. The correlation between the expression of Top II α and age of patients, family history, menstrual status, tumor size, lymph node metastasis and pathological grades were analyzed. The expression of Top II α in different molecular type of breast cancer (luminal A type, B type, B-like type, HER2 expression type and triple negative breast cancer) were observed. Results： There was no correlation between the expression level of Top II α and age of patients, family history, menstrual status, tumor size and lymph node metastasis(P>0.05). There existed a positive correlation between Top II α expression level and pathological grades of breast cancer (P<0.05). The higher pathological grade, the more Top II α expression. There was a significantly high expression of Top II α in the luminal B-like type, HER2 expression type and triple negative breast cancer while there was a significantly low expression in luminal A type and B type breast cancer. Conclusion： Top II α expression level is related to pathological grades and molecular type of breast cancer.

[Key words]breast cancer; topoisomerase II α; gene expression; immunohistochemistry

*[基金項(xiàng)目]河北省科技廳項(xiàng)目(152777118)

[中圖分類(lèi)號(hào)]R737.9

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1000-2707(2016)06-0729-03

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.025

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-06-16網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1743.060.html