張 翔閆茂倉肖國強(qiáng)柴雪良謝起浪（1.浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所，溫州 325005； 2.浙江省近岸水域生物資源開發(fā)與保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，溫州 325005）

蝦-貝-紅樹林耦合循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中微生物群落分析

張 翔1，2閆茂倉1，2肖國強(qiáng)1，2柴雪良1，2謝起浪1，2
（1.浙江省海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖研究所，溫州 325005； 2.浙江省近岸水域生物資源開發(fā)與保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，溫州 325005）

摘要：海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)是重要的生態(tài)養(yǎng)殖模式發(fā)展趨勢之一，為了深入了解循環(huán)水養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng)，通過對系統(tǒng)各功能區(qū)水體中細(xì)菌16S rDNA基因V4—V5區(qū)進(jìn)行高通量測序和生物信息學(xué)分析，從微生物生態(tài)學(xué)角度分析了循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)不同功能區(qū)的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)動態(tài)。測序分析結(jié)果顯示，海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中優(yōu)勢細(xì)菌種群分別屬于變形菌門（Proteobacteria）、藍(lán)藻門（Cyanobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）、放線菌門（Actinobacteria）和浮霉菌門（Planctomycetes）。紅樹林濕地水體中變形菌門和厚壁菌門豐度較高，而對蝦養(yǎng)殖池的擬桿菌門和浮霉菌門豐度較高。在不同優(yōu)勢類群中，變形菌門多樣性指數(shù)平均值最高，其次是擬桿菌門，厚壁菌門最低。在各功能區(qū)中，紅樹林細(xì)菌多樣性最高，蝦池最低。MDS分析結(jié)果顯示蝦池、貝池和紅樹林濕地水體中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)有明顯差異，蝦池與其他功能區(qū)差異最大。研究表明，高密度對蝦養(yǎng)殖對蝦池水體中細(xì)菌群落有顯著影響，但其影響在循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)后續(xù)功能區(qū)中逐漸減弱。

關(guān)鍵詞：浮游細(xì)菌； 循環(huán)水系統(tǒng)； 紅樹林人工濕地； 高通量測序； 16S rDNA

海水對蝦養(yǎng)殖通常是在臨近海岸線的池塘中進(jìn)行，以方便換水，保持池塘水質(zhì)清新，然而，進(jìn)入池塘的海水也會含有病毒和細(xì)菌性病原體，這將給海水養(yǎng)殖帶來潛在風(fēng)險。此外，養(yǎng)殖尾水的直接排放將破壞周邊水體生態(tài)環(huán)境，同時導(dǎo)致近海海域水體富營養(yǎng)化程度進(jìn)一步加深，所以海水養(yǎng)殖池塘的尾水排放一直是海水養(yǎng)殖業(yè)與海洋環(huán)境和諧發(fā)展的關(guān)鍵問題［1，2］。循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)（Recirculating Aquaculture System，RAS）提供了解決以上兩個問題的方法，能通過最大化減少水需求，從而將病原輸入和污染輸出最小化［3］。海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)是利用生態(tài)學(xué)原理，將若干個功能區(qū)，例如人工濕地、排水溝、養(yǎng)殖池塘、生態(tài)凈化池等有機(jī)地結(jié)合在一起，從而構(gòu)建成尾水零排放的新型生態(tài)安全養(yǎng)殖系統(tǒng)。

在循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中，為了養(yǎng)殖對象的健康生長，除了日常監(jiān)測和管理溶解氧和氮磷水平外，對于定植于其中的微生物種群進(jìn)行管理同樣十分重要。微生物作為海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)的關(guān)鍵部分，在人工濕地和養(yǎng)殖池塘中執(zhí)行著重要功能，包括有機(jī)碎屑的分解和礦化、氮磷等營養(yǎng)元素的轉(zhuǎn)化、直接作為餌料提供給養(yǎng)殖對象等等［4，5］。同時，病原性微生物的數(shù)量和種類又與水產(chǎn)動物的疾病發(fā)生率和死亡率相關(guān)，直接影響著海水養(yǎng)殖的收益。特別是異養(yǎng)細(xì)菌在溶解氧消耗、代謝副產(chǎn)物釋放方面有著重要影響，并最終與自養(yǎng)細(xì)菌競爭溶解氧和生存空間［6，7］。因此，雖然我們知道循環(huán)水系統(tǒng)中水質(zhì)好壞依賴于微生物群落，但對于其中大部分微生物尚未有詳細(xì)研究［8］。先前的環(huán)境微生物多樣性研究多基于DNA指紋圖譜（例如DGGE）和16S rDNA基因克隆文庫技術(shù)［8，9］，但受技術(shù)本身所限，難以全面深入地解析細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)。隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展，基于16S rDNA基因片段的高通量測序逐漸成為微生物群落組成研究的主要手段，其最大的優(yōu)勢在于能夠全面的解析微生物群落中的細(xì)菌種類和豐度。

本文以紅樹林人工濕地-海水養(yǎng)殖耦合系統(tǒng)為研究對象，通過對養(yǎng)殖水體中細(xì)菌16S rDNA V4—V5區(qū)的高通量測序，分析了該系統(tǒng)中微生物群落組成，揭示了不同功能區(qū)微生物群落的差異，為循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)的運(yùn)行管理及改良提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 采樣站點(diǎn)

浙江溫州某養(yǎng)殖基地構(gòu)建了一套海水多生態(tài)位耦合設(shè)施化循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)。該循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)主要由高位精養(yǎng)池、循環(huán)水渠、貝類養(yǎng)殖池、紅樹林人工濕地、生態(tài)凈化池和砂濾池等組成，通過循環(huán)水渠、管道、水泵等設(shè)施實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖尾水的凈化和再利用。高位池為全封閉式，使用循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)砂濾水作為進(jìn)水，養(yǎng)殖對象為南美白對蝦，養(yǎng)殖期間全天進(jìn)行底增氧曝氣。貝類養(yǎng)殖池養(yǎng)殖對象為文蛤和泥蚶，露天開放式養(yǎng)殖，除接收蝦池尾水外，不再進(jìn)行肥水。紅樹林濕地種植秋茄，秋茄平均株高1.5 m左右。采樣站點(diǎn)設(shè)置于各個功能區(qū)，包括對蝦養(yǎng)殖池（S1）、貝類養(yǎng)殖池A（S2）和B（S3）、紅樹林濕地進(jìn)水口（S4）和出水口（S5）、生態(tài)凈化池（S6）。采集各個功能區(qū)中上層水樣，每個水樣100 mL用2片無菌濾膜（Millipore，0.22 μm）進(jìn)行抽濾，然后將濾膜封裝于自封袋中，凍存于-80℃超低溫冰箱，保存至DNA提取。

圖 1 循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)排水流程示意圖

1.2 DNA提取和MiSeq高通量測序

將濾膜用滅菌手術(shù)剪剪碎，放入50 mL無菌離心管中，利用水體環(huán)境基因組提取試劑盒Water DNA kit（Omega）提取濾膜中環(huán)境基因組DNA，1.5%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行質(zhì)量檢測。

PCR在ABI GeneAmp 9700 型熱循環(huán)儀中進(jìn)行，引物為515F（5′-GTGCCAGCMGCCGCGG-3′）和907R（5′-CCGTCAATTCMTTTRAGTTT-3′），每個樣品3個重復(fù)。PCR反應(yīng)采用TransGen 20 μL體系，其組分為:5×FastPfu buffer，4 μL； 2.5 mmol/L dNTPs，2 μL； 5 μmol/L 正反向引物各0.8 μL；FastPfu DNA聚合酶（10 U/μL），0.4 μL； 模板DNA 10 ng； 加滅菌ddH2O補(bǔ)足至20 μL。PCR反應(yīng)參數(shù)如下:95℃預(yù)變性3min，然后95℃變性30s； 55℃退火30s； 72℃延伸30s，共計28個循環(huán)，最后72℃延伸10min。將同一樣品的PCR 產(chǎn)物混合后用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。使用AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒（AXYGEN）切膠回收PCR產(chǎn)物，TE洗脫液洗脫，2%瓊脂糖電泳進(jìn)行檢測。PCR產(chǎn)物定量后利用Illumina Miseq PE250平臺進(jìn)行高通量測序。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

根據(jù)Barcode序列將下機(jī)數(shù)據(jù)拆分為不同樣品數(shù)據(jù)，并截去Barcode序列和PCR擴(kuò)增引物序列。使用FLASH Version 1.2.7對各樣品reads進(jìn)行拼接并進(jìn)行處理得到高質(zhì)量Tags數(shù)據(jù)，并利用Qiime Version 1.7.0檢測并去除嵌合體序列。之后將Tags序列與數(shù)據(jù)庫（Gold database）進(jìn)行比對（UCHIME algorithm）。利用Uparse Version 7.0.1001 對所有樣品重采樣的有效序列進(jìn)行聚類，默認(rèn)將具有97%一致性的序列聚類成為操作分類單元（Operational taxonomic unit，OTU）。將Uparse構(gòu)建OTU時選取的代表性序列與Silva 119庫比對，得到每個OTU的分類學(xué)信息，每個OTU在數(shù)據(jù)分析中被視為一種細(xì)菌。

使用R語言（R version 3.1.3）中的vegan程序包計算各個采樣站點(diǎn)間細(xì)菌群落OTU的布雷柯蒂斯（Bray-Curtis）距離矩陣，然后通過生物統(tǒng)計軟件XLSTAT 2014進(jìn)行多維尺度分析（MultiDimensional Scaling，MDS）并作圖。選取各個站點(diǎn)中OTU數(shù)量所占比例超過總數(shù)1%的細(xì)菌，利用R語言（R version 3.1.3）作熱圖。細(xì)菌類群多樣性采用Shannon-Wiener 指數(shù)（H′）表示，H′可反映細(xì)菌種群物種多樣性的差異。

2 結(jié)果

2.1 高通量測序質(zhì)量分析

對各樣品中Miseq高通量測序結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果表明所有樣品的測序覆蓋率全部達(dá)到99%以上，測序結(jié)果能較好地反映不同采樣站點(diǎn)浮游細(xì)菌的群落組成。海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)不同功能區(qū)的有效OTU 數(shù)量平均值為425.17，其中蝦貝養(yǎng)殖池（S1—S3）的OTU數(shù)量低于平均值，而經(jīng)過紅樹林人工濕地處理后的水樣（S4—S6）高于平均值（表 1）。

通過隨機(jī)抽取的序列數(shù)及其所含的OTU 數(shù)量構(gòu)建高通量測序的稀釋曲線（圖 2），結(jié)果顯示，所有樣品的稀釋曲線均隨有效序列數(shù)量的增加而趨于平緩，這表明測序獲得的有效OTU數(shù)量較好地反映浮游細(xì)菌的物種多樣性。

表 1 各樣品高通量測序結(jié)果分析Tab.1 The analysis of the high-through sequencing results

圖 2 各樣點(diǎn)高通量測序結(jié)果的稀釋曲線

2.2 各功能區(qū)微生物群落組成分析

細(xì)菌分類學(xué)信息顯示，海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中的優(yōu)勢細(xì)菌種群分別屬于變形菌門（Proteobacteria）、藍(lán)藻門（Cyanobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）、放線菌門（Actinobacteria）和浮霉菌門（Planctomycetes）（圖3）。如表 2所示，不同采樣站點(diǎn)中6個優(yōu)勢細(xì)菌類群共占細(xì)菌OTU總數(shù)的97%—99%，同時不同站點(diǎn)間細(xì)菌種群相對豐度變化明顯，結(jié)果顯示:對蝦養(yǎng)殖池（S1）擬桿菌和浮霉菌豐度明顯高于其他站點(diǎn)； 貝類養(yǎng)殖池（S2—S3）變形菌和厚壁菌平均豐度低于經(jīng)紅樹林濕地處理后的各個站點(diǎn)（S4—S6），而藍(lán)藻豐度則較高。對測序結(jié)果進(jìn)行相似性聚類（圖 3）和MDS分析（圖 4），結(jié)果顯示紅樹林進(jìn)水（S4）、出水（S5）和生態(tài)凈化池（S6）較為相似，其次是兩個貝類養(yǎng)殖池（S2、S3），而對蝦養(yǎng)殖池（S1）與其他站點(diǎn)相似性較低。

選取所有樣品中占1%以上的優(yōu)勢細(xì)菌種群構(gòu)建熱圖。結(jié)果顯示，占細(xì)菌總數(shù)比例超過1%的O T U共4 4種，在各站點(diǎn)所占總比例分別為84%（S1）、77%（S2）、78%（S3）、67%（S4）、73%（S5）和80%（S6）（圖 5）。蝦池中豐度較高的OTU分別屬于芽孢桿菌屬、藍(lán)藻、黃桿菌目、腐螺旋菌科、浮霉菌、鞘脂桿菌目、紅細(xì)菌科； 紅樹林濕地與蝦池差異明顯，豐度較高的OTU分別屬于芽孢桿菌屬、聚球藻屬、酸微菌科、乳球菌屬、微桿菌科和變形菌SAR11演化枝。

2.3 各功能區(qū)細(xì)菌類群分析

計算了各個采樣站點(diǎn)優(yōu)勢門類細(xì)菌的Shannon-Wiener多樣性指數(shù)（H'），結(jié)果顯示（圖 6）變形菌門多樣性指數(shù)平均值最高，其次是擬桿菌門，最低為厚壁菌門。同時，對蝦養(yǎng)殖池（S1）各個門類細(xì)菌多樣性均低于其他站點(diǎn)，厚壁菌門除外。而紅樹林進(jìn)水處（S4）各個門類細(xì)菌多樣性均高于其他站點(diǎn)，放線菌除外。

通過MDS分析了各個優(yōu)勢類群的采樣點(diǎn)間群落組成差異（圖 7），結(jié)果顯示不同優(yōu)勢菌群的空間變化規(guī)律并不一致，其中除厚壁菌門，其他優(yōu)勢細(xì)菌類群空間分布模式與總細(xì)菌類似，均顯示S1明顯與其他站點(diǎn)不同。而厚壁菌MDS分析僅將貝類養(yǎng)殖池（S2、S3）與其他站點(diǎn)區(qū)分開，S1與其他站點(diǎn)聚為一類。

圖 3 循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)浮游細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)組成

表 2 優(yōu)勢細(xì)菌類群在不同站點(diǎn)細(xì)菌OTU中所占比例Tab.2 OTU ratio of dominant bacterial subgroups in different stations（%）

圖 4 環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)浮游細(xì)菌群落多維尺度分析

3 討論

紅樹林人工濕地-蝦貝養(yǎng)殖耦合系統(tǒng)作為海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)，通過循環(huán)水渠、管道、水泵等設(shè)施將對蝦高位池、貝類養(yǎng)殖池、紅樹林人工濕地和生態(tài)凈化池串聯(lián)成一個有機(jī)整體，利用紅樹林人工濕地去除水體中的氮磷和顆粒懸浮物，不但能有效地增加海水利用率，減少尾水排放，而且能明顯改善水質(zhì)，提高水產(chǎn)品質(zhì)量。為了揭示整個循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中浮游細(xì)菌動態(tài)，為系統(tǒng)管理提供依據(jù)，本文通過高通量測序技術(shù)研究了各個站點(diǎn)的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)和空間差異。

南美白對蝦進(jìn)行高密度養(yǎng)殖時，由于飼料供給充足導(dǎo)致對蝦產(chǎn)生排泄物的過程十分迅速，有研究表明其腸道通過時間會縮短30%—60%［10，11］，這意味著高密度養(yǎng)殖模式下養(yǎng)殖水體與對蝦腸道的微生物交換更加頻繁，水體中細(xì)菌群落對南美白對蝦健康影響也更大。在本研究中，對蝦養(yǎng)殖池中擬桿菌和浮霉菌在總細(xì)菌中所占比例明顯高于循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)其他功能區(qū)，在蝦池排水進(jìn)入貝類養(yǎng)殖池塘后，擬桿菌和浮霉菌所占比例已明顯下降。之前的研究報道海水中擬桿菌大量存在于水中懸浮顆粒物上，而自由生活的擬桿菌相對較少［12］，這可能暗示了擬桿菌在蝦池水體有機(jī)懸浮顆粒（蝦糞和殘餌）上豐度較大，而在后續(xù)功能區(qū)有機(jī)顆粒物減少，從而引起擬桿菌豐度降低。同時有研究發(fā)現(xiàn)浮霉菌參與反硝化作用［13］，在高污染的膜上豐度相對較大［14］，這表明蝦池水體中較高的污染物含量可能導(dǎo)致浮霉菌豐度進(jìn)一步提高，而后續(xù)功能區(qū)中浮霉菌豐度隨污染物濃度降低。

Zhang等［15］研究了湖泊中不同細(xì)菌類群組成的空間動態(tài)，結(jié)果表明厚壁菌空間異質(zhì)性與其他細(xì)菌類群明顯不同，不同站點(diǎn)間群落結(jié)構(gòu)相似度高。在本研究中同樣發(fā)現(xiàn)由于厚壁菌群落多樣性較低（0.5

圖 6 采樣站點(diǎn)優(yōu)勢細(xì)菌類群Shannon-Wiener多樣性指數(shù)

人工濕地技術(shù)建設(shè)成本、運(yùn)行費(fèi)用低，并且管理方便，在污水處理技術(shù)中環(huán)境和生態(tài)效益兼而有之。人工濕地是通過植物根系-基質(zhì)-微生物的共同作用去除水體中的污染物［17，18］。由于海水養(yǎng)殖中海洋廢水的鹽度效應(yīng)，在人工濕地技術(shù)中針對海水養(yǎng)殖廢水處理的可選擇植物較少，而紅樹植物是海水人工濕地技術(shù)中重要組成部分。紅樹植物對于海水環(huán)境中污染物去除起著重要作用，李飛等［19］研究表明，種植紅樹的池塘中牡蠣石油烴含量顯著低于未種植紅樹的對照塘（P < 0.05）。在本研究中，人工濕地采用鹽生紅樹植物秋茄作為濕地植物，建設(shè)了表面流人工濕地，與蝦貝養(yǎng)殖池塘（S1-S3）相比，紅樹林水體環(huán)境（S4、S5）微生物OTU數(shù)量明顯增加（表1），紅樹林出水所帶的細(xì)菌有可能增強(qiáng)了生態(tài)凈化池的凈化作用。Lexonard等［20］研究發(fā)現(xiàn)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中生物濾膜表層細(xì)菌會脫離濾膜進(jìn)入水中，導(dǎo)致過濾后水中細(xì)菌總數(shù)較過濾前提高25%。本研究同樣發(fā)現(xiàn)紅樹林濕地使得后續(xù)生態(tài)凈化池中細(xì)菌OTU數(shù)量高于蝦貝養(yǎng)殖池。孫靜等［21］研究發(fā)現(xiàn)紅樹林土壤中變形菌和厚壁菌是優(yōu)勢菌群，分別占66%和19%。在本研究中紅樹林濕地水體中變形菌和厚壁菌所占比例高于貝類養(yǎng)殖池，這可能是由于紅樹林濕地土壤中的大量變形菌和厚壁菌在水流作用下，從土壤逸出進(jìn)入水體所致。

圖 7 各采樣站點(diǎn)在細(xì)菌門水平的多維尺度分析

綜上所述，海水循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中優(yōu)勢細(xì)菌種群分別屬于變形菌門、藍(lán)藻門、擬桿菌門、厚壁菌門、放線菌門和浮霉菌門。在各個功能區(qū)水體中，紅樹林濕地變形菌和厚壁菌豐度較高，貝類養(yǎng)殖池藍(lán)藻豐度較高，而對蝦養(yǎng)殖池的擬桿菌和浮霉菌豐度較高。在不同優(yōu)勢類群中，變形菌門多樣性指數(shù)平均值最高，其次是擬桿菌門，厚壁菌門最低。同時，對蝦養(yǎng)殖池細(xì)菌類群多樣性均低于其他站點(diǎn)，厚壁菌門除外。而紅樹林進(jìn)水處各個門類細(xì)菌多樣性均高于其他站點(diǎn)，放線菌除外。MDS分析結(jié)果顯示對蝦池、貝池和紅樹林濕地細(xì)菌群落有明顯差異，其中對蝦池與其他功能區(qū)的差異最大。

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ANALYSIS OF MICROBIAL COMMUNITY STRUCTURE IN MANGROVE CONSTRUCTED WETLAND-MARICULTURE COUPLING SYSTEM

ZHANG Xiang1，2，YAN Mao-Cang1，2，XIAO Guo-Qiang1，2，CHAI Xue-Liang1，2and XIE Qi-Lang1，2
（1.Zhejiang Mariculture Research Institute，Wenzhou 325005，China； 2.Zhejiang Key Laboratory of Exploitation and Preservation of Coastal Bioresource，Wenzhou 325005，China）

Abstract:Bacteria play a key role in the biological geochemical cycle and degradation of organic contamination in pond ecosystem.It is important to understand the dynamics of bacterial community structure in recirculating aquaculture system during shrimp and shellfish rearing.In this study，bacterioplankton community structure in mangrove constructed wetland-mariculture coupling system was investigated by using high-throughput sequencing with 16S rDNA.High-throughput sequencing analysis indicated that the dominant OTUs were Proteobacteria，Cyanobacteria，Bacteroidetes，F(xiàn)irmicutes，Actinobacteria and Planctomycetes.Proteobacteria and firmicutes were the most dominant phyla in mangrove wetland，while bacteroidetes and planctomycetes were the most abundant in shrimp pond.The analysis of Shannon-Wiener indices inferred that proteobacteria communities were the highest，whereas firmicutes were the lowest.The diversity of bacterial phyla in shrimp pond was lower than that of the other station（except firmicutes），whereas the diversity of bacterial phyla in mangrove wetland was higher than that of the other station（except actinobacteria）.Multidimensional scaling revealed the changes in the microbial community structure of different stations.The microbial community structure in shrimp pond was markedly different from other stations in recirculating mariculture system，suggesting that shrimp farming has a great influence on bacterioplankton community structure.

Key words:Bacterioplankton； Recirculating aquaculture system； Mangrove constructed wetland； High-throughput sequencing； 16S rDNA

中圖分類號：Q145+.2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1000-3207（2016）03-0557-08

doi:10.7541/2016.75

收稿日期：2015-07-10；

修訂日期：2015-12-14

基金項(xiàng)目：浙江省重大科技專項(xiàng)（2012C12017-3）； 國家貝類產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-48）； 國家蝦產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系溫州綜合試驗(yàn)站（CARS-47）； 浙江省科技計劃項(xiàng)目（2012F20029，2014F30025）； 溫州市科技計劃項(xiàng)目（2011N0006，S20130008）資助［Supported by the Major Science and Technology Projects of Zhejiang Province（2012C12017-3）； Zhejiang Mollusk Experiment Station，CARS（CARS-48）；Wenzhou Shrimp Experiment Station，CARS（CARS-47）； Zhejiang Science and Technology Project（2012F20029，2014F30025）；Wenzhou Science and Technology Project（2011N0006，S20130008）］

作者簡介：張翔（1982—），男，湖北黃石人； 博士； 主要研究方向?yàn)楹ＫB(yǎng)殖微生物分子生態(tài)學(xué)。E-mail:jhon618@sohu.com

通信作者：閆茂倉，副研究員； E-mail:yanmaocang@126.com