高靜

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽(yáng)　110101)

血管生成素-2及其受體在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及臨床意義

高靜

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽(yáng)110101)

【摘要】目的觀察血管生成素-2(Ang-2)與酪氨酸激酶受體-2(Tie-2)在子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)患者子宮內(nèi)膜中的表達(dá)，探討其在EMs的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體作用。方法選取本院2012年1月至2013年12月收治的70例EMs患者為研究組，選取同期70例非EMs患者為對(duì)照組，分別取材兩組的內(nèi)膜組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定Ang-2、Tie-2的表達(dá)狀況。結(jié)果(1) Ang-2主要定位在細(xì)胞質(zhì)中，主要表達(dá)于腺上皮細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞，間質(zhì)細(xì)胞中可見(jiàn)少量表達(dá)。Tie-2主要定位在腺上皮細(xì)胞胞漿中，少數(shù)定位在間質(zhì)細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞中。(2)研究組患者中Ang-2、Tie-2陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.7%和72.9%，顯著高于對(duì)照組(分別為42.9%和38.6%)(P<0.05)。Ang-2在EMs患者增殖期的陽(yáng)性表達(dá)率(67.5%)顯著低于分泌期(86.7%)(P<0.05)；Tie-2在EMs患者增殖期的陽(yáng)性表達(dá)率(87.5%)顯著高于分泌期(53.3%)(P<0.05)。結(jié)論Ang-2、Tie-2在EMs患者內(nèi)膜組織中均有較高表達(dá)，提示其參與EMs的發(fā)生發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜異位癥；血管生成素-2；酪氨酸激酶受體-2；表達(dá)

Methods： Seventy patients with endometriosis (study group) and 70 patients without endometriosis (control group) were selected in our hospital from Jan 2012 to Dec. 2013. The endometrial tissues were collected for detecting the expression of Ang-2 and Tie-2 by immunohistochemical method.

Results： Ang-2 was mainly localized in the cytoplasm and expressed mainly in epithelial cells and vascular endothelial cells，and slightly expressed in stromal cells. Tie-2 is mainly located in the cytoplasm of epithelial cells，and a few located in the interstitial cells and vascular endothelial cells. The expression rate of Ang-2 and Tie-2 in the study group (75.7% and 72.9% respectively) were significantly higher than those in control group (42.9%，38.6%，respectively) (P<0.05). In the patients with endometriosis，Ang-2 expression rate in proliferative phase (67.5%) was significantly lower than that in secretory phase (86.7%)(P<0.05)，but Tie-2 expression rate in proliferative phase (87.5%) was significantly higher than that in the secretory phase (53.3%)(P<0.05).

Conclusions： Ang-2 and Tie-2 are highly expressed in endometrial tissues of the patients with endometriosis，which suggests that Ang-2 and Tie-2 may be involved in the development of endometriosis.

(JReprodMed2016，25(6)：545-549)

子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)是臨床中常見(jiàn)的婦科疾病，具有較高的發(fā)病率，臨床表現(xiàn)主要為盆腔疼痛、不孕以及月經(jīng)異常等，嚴(yán)重影響患者的健康和生活。EMs的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，但有研究證實(shí)EMs的發(fā)生發(fā)展與血管生成密切相關(guān)，異位內(nèi)膜病灶中的微血管密度明顯高于在位子宮內(nèi)膜[1]。血管生成素-2(Ang-2)參與血管生成的過(guò)程，其通過(guò)與內(nèi)皮細(xì)胞特異性酪氨酸激酶受體-2(Tie-2)的結(jié)合，促進(jìn)血管的發(fā)生與生長(zhǎng)[2]。本研究重點(diǎn)分析Ang-2與Tie-2在EMs患者異位內(nèi)膜與在位內(nèi)膜中的表達(dá)，并與非EMs患者正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況進(jìn)行比較，進(jìn)一步了解二者在EMs發(fā)生發(fā)展過(guò)程中作用，以期為該病的診斷與治療提供一定參考。

資料與方法

一、研究對(duì)象

選取本院2012年1月至2013年12月收治的70例EMs患者為研究組，選取同期因不孕不育、卵巢囊腫、子宮肌瘤等來(lái)我院就診的70例非EMs患者為對(duì)照組。

研究組納入標(biāo)準(zhǔn)：符合美國(guó)生殖學(xué)會(huì)制定的EMs診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，且經(jīng)病理檢查證實(shí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有基礎(chǔ)內(nèi)分泌疾病、生殖道炎癥和婦科惡性腫瘤以及放置宮內(nèi)節(jié)育器的患者，手術(shù)治療前半年服用過(guò)甾體類(lèi)激素藥物的患者，不同意參與本研究的患者。

本次研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且患者均知情同意，簽署知情同意書(shū)。

二、研究方法

研究組患者腹腔鏡手術(shù)或開(kāi)腹手術(shù)后經(jīng)病理檢查確診，術(shù)中選取子宮異位內(nèi)膜病灶組織進(jìn)行取材，并刮宮取材部分在位內(nèi)膜新鮮組織。對(duì)照組患者則是在子宮肌瘤切除術(shù)、不孕及卵巢囊腫等手術(shù)探查或治療過(guò)程中取材正常子宮內(nèi)膜組織。兩組患者子宮內(nèi)膜組織取材后，浸泡在10.0%的中性緩沖福爾馬林液中進(jìn)行固定，固定24 h后進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋和切片處理，制成4.0 μm的石蠟切片，行HE染色。由兩名病理科醫(yī)師在顯微下觀察組織染色情況，依據(jù)美國(guó)生殖學(xué)會(huì)分期標(biāo)準(zhǔn)[3]進(jìn)行EMs內(nèi)膜分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期)，并對(duì)子宮內(nèi)膜形態(tài)進(jìn)行分期[4]：(1)增殖期：月經(jīng)周期第5～14天，卵泡發(fā)育成熟階段，卵泡刺激素作用下子宮內(nèi)膜及間質(zhì)細(xì)胞呈增生狀態(tài)；(2)分泌期：月經(jīng)周期第15～28天，黃體形成后，在孕激素作用下子宮內(nèi)膜呈分泌 反應(yīng)，血管管腔擴(kuò)張、內(nèi)膜增厚，分泌糖原。

確定分期后的蠟塊重新切片、貼片，行免疫組織化學(xué)染色。Ang-2和Tie-2的免疫組化染色均采用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作[5]，并做好詳細(xì)的記錄。

三、結(jié)果判斷

由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲閱片。免疫組化染色陽(yáng)性信號(hào)為：光學(xué)顯微鏡下觀察到黃色或者棕色染色。并依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比和染色情況進(jìn)行分級(jí)。

依據(jù)內(nèi)膜組織顯色程度進(jìn)行評(píng)分：0分：無(wú)任何顯色；1分：顯示為淺黃色或者黃色；2分：顯示為棕黃色；3分：顯示為棕褐色。依據(jù)內(nèi)膜組織顯色面積比例評(píng)分：0分：陽(yáng)性細(xì)胞染色面積在細(xì)胞總面積中所占比例<10.0%；1分：陽(yáng)性細(xì)胞面積所占比例為10.1%～25.0%；2分：陽(yáng)性細(xì)胞面積25.1%～50.0%；3分：陽(yáng)性細(xì)胞面積50.1%～75.0%；4分：陽(yáng)性細(xì)胞面積>75.0%。將兩者的乘積作為最終評(píng)分[6]，評(píng)價(jià)其陽(yáng)性強(qiáng)度：陰性(-)：評(píng)分為0分；弱陽(yáng)性(+)：評(píng)分在1～4分之間；陽(yáng)性(++)：評(píng)分為5～8分；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：評(píng)分為9～12分。

各組患者中的陽(yáng)性表達(dá)率=弱陽(yáng)性+陽(yáng)性+強(qiáng)陽(yáng)性患者數(shù)/各組例數(shù)。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析與處理，計(jì)數(shù)資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、兩組患者一般資料比較

研究組患者年齡21～44歲，平均年齡(34.3±4.2)歲；內(nèi)膜臨床分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期24例，Ⅲ期18例，Ⅳ期10例；增殖期40例，分泌期30例；孕次1～4次，平均(1.5±0.2)次。對(duì)照組患者年齡20～42歲，平均年齡(33.9±4.7)歲；增殖期38例，分泌期32例；孕次1～5次，平均(1.4±0.2)次。兩組患者的一般資料比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。

二、Ang-2和Tie-2在內(nèi)膜組織中的表達(dá)

Ang-2主要定位在細(xì)胞質(zhì)中，主要表達(dá)于腺上皮細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞，少數(shù)表達(dá)在間質(zhì)細(xì)胞(圖1、2)。Tie-2主要定位在腺上皮細(xì)胞胞漿中，少數(shù)定位在間質(zhì)細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞中(圖3、4)。

研究組患者中Ang-2、Tie-2陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.7%、72.9%，顯著高于對(duì)照組(分別為42.9%、38.6%)(P<0.05)(表1)。

A：異位內(nèi)膜；B：在位內(nèi)膜圖1　Ang-2在EMs患者內(nèi)膜組織中的陽(yáng)性表達(dá) (免疫組化 ×400)

圖2　Ang-2在對(duì)照組內(nèi)膜組織中的陽(yáng)性表達(dá) (免疫組化 ×200)

A：異位內(nèi)膜；B：在位內(nèi)膜圖3　Tie-2在EMs患者內(nèi)膜組織中的陽(yáng)性表達(dá) (免疫組化 ×400)

圖4　Tie-2在對(duì)照組內(nèi)膜組織中的陽(yáng)性表達(dá) (免疫組化 ×200)

組 別例數(shù)陰性弱陽(yáng)性陽(yáng)性強(qiáng)陽(yáng)性陽(yáng)性表達(dá)率研究組70 Ang-21718251053(75.7)* Tie-2191923951(72.9)*對(duì)照組70 Ang-2401911030(42.9) Tie-2431710027(38.6)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

三、Ang-2和Tie-2在兩組患者內(nèi)膜增殖期與分泌期的表達(dá)

Ang-2在研究組患者增殖期的陽(yáng)性表達(dá)率(67.5%)顯著低于其在分泌期的陽(yáng)性表達(dá)率(86.7%)(P<0.05)；Tie-2在研究組患者增殖期的陽(yáng)性表達(dá)率(87.5%)則顯著高于其在分泌期的陽(yáng)性表達(dá)率(53.3%)(P<0.05)。Ang-2在對(duì)照組患者增殖期的陽(yáng)性表達(dá)率(60.5%)顯著高于分泌期(15.6%)(P<0.05)；Tie-2在對(duì)照組患者增殖期的陽(yáng)性表達(dá)率(57.9%)亦顯著高于分泌期(18.8%)(P<0.05)(表2)。

表2　Ang-2和Tie-2在兩組患者內(nèi)膜增殖期

注：與同組分泌期比較，*P<0.05

討論

EMs一般發(fā)生在育齡女性中，且發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)。其病因?qū)W說(shuō)認(rèn)為異位內(nèi)膜本身和周?chē)M織新血管的建立與維持，是子宮內(nèi)膜異位種植成活和EMs發(fā)生的重要條件，其中，新生血管的形成是EMs發(fā)生的重要環(huán)節(jié)[7-8]。因此，在EMs發(fā)病機(jī)制的探討中，血管生成的多種促進(jìn)因子引起了高度關(guān)注。

Ang-2及其受體Tie-2均在血管生成中起到關(guān)鍵性的作用，Ang-2在一定的病理環(huán)境下刺激毛細(xì)血管增生，并提高其血管通透性，為異位生長(zhǎng)的腺上皮細(xì)胞提供更好的物質(zhì)生存基礎(chǔ)，導(dǎo)致血管生成[9-10]。Tie-2主要是維持成熟血管的穩(wěn)定性，并且在整個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞新生血管化過(guò)程中起到重要作用，有研究證實(shí)Tie-2的缺乏很容易導(dǎo)致血管生成受阻[11-14]。

本研究結(jié)果顯示，Ang-2和Tie-2在EMs患者的子宮內(nèi)膜組織中異常表達(dá)，顯著高于其在非EMs婦女內(nèi)膜組織中的表達(dá)量，提示Ang-2、Tie-2參與了EMs的發(fā)生發(fā)展。由于體內(nèi)多種因素的影響，Ang-2、Tie-2的表達(dá)明顯增加，促進(jìn)了血管生成的不穩(wěn)定性，使得患者更容易受到其他促血管生成因子的影響，進(jìn)一步引起病灶組織中的血管生成[15-16]。本研究還對(duì)EMs患者內(nèi)膜增殖期與分泌期Ang-2、Tie-2的陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行分析，結(jié)果顯示增殖期的Ang-2陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于分泌期，而增殖期的Tie-2陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于分泌期；對(duì)照組患者內(nèi)膜組織中Ang-2、Tie-2的陽(yáng)性表達(dá)率均是增殖期顯著高于分泌期，提示Ang-2在EMs患者中主要表達(dá)于分泌期，Tie-2則主要表達(dá)于增殖期，而在非EMs患者女性中Ang-2、Tie-2均主要表達(dá)于增殖期。Ang-2主要表達(dá)在腺上皮細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞，隨著分泌期子宮內(nèi)膜明顯增厚，其表達(dá)呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)；Tie-2作為Ang-2的受體，主要表達(dá)在腺上皮細(xì)胞胞漿中，血管內(nèi)皮細(xì)胞中有少量表達(dá)，增殖期子宮內(nèi)膜組織的血管生成較分泌期更為活躍，因此Tie-2在增殖期表達(dá)相對(duì)增加。二者可能在體內(nèi)多種因素的刺激下，Ang-2在分泌期內(nèi)膜組織中異常高表達(dá)，Tie-2則在增殖期異常高表達(dá)，從而減少了血管的穩(wěn)定性，導(dǎo)致血管重構(gòu)，引起EMs的發(fā)生[17-18]。

綜上所述，Ang-2、Tie-2在EMs患者子宮內(nèi)膜中均有較高表達(dá)，提示二者參與EMs的發(fā)生發(fā)展，并可能起到重要作用。但其具體的作用機(jī)制和表達(dá)通路，尚需要后續(xù)進(jìn)一步研究探討。

【參考文獻(xiàn)】

[1]黃丹丹. VEGF、Ang-2、Tie-2在子宮內(nèi)膜異位癥不同臨床分期中的表達(dá)及意義[J]. 中國(guó)冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2015，32：211-213.

[3]Ludwin A，Ludwin I. Comparison of the ESHRE-ESGE and ASRM classifications of Müllerian duct anomalies in everyday practice[J]. Hum Reprod，2015，30：569-580.

[4]樂(lè)杰 主編. 婦產(chǎn)科學(xué). 第五版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：29.

[5]凌艷，劉陽(yáng). 子宮內(nèi)膜異位癥中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、血管生成素-2與微血管密度的表達(dá)及臨床意義[J]. 中國(guó)婦幼保健，2014，29：191-193.

[6]王瑞華，謝建國(guó)，陳華，等. 促血管生成素-2和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，33：1236-1239.

[7]馮艷，盧秀琴. VEGF、Ang-2和IL-1β在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)[J]. 山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，45：961-963.

[8]何勤徑. 血管生成素-2、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與微血管密度在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及臨床意義[J]. 河北醫(yī)藥，2014，36：1025-1027.

[9]黃彩彩，康佳麗，張佳立，等. 血管生成素-2及其受體Tie-2在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)[J]. 中國(guó)婦幼保健，2012，27：1540-1543.

[10]杜彥博，孫兆貴，王健. 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用[J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2010，19：538-544.

[11]宋潔，尹利榮，馬洪達(dá)，等. 內(nèi)皮抑素基因治療裸鼠子宮內(nèi)膜異位癥對(duì)Ang-2/Tie-2的影響[J]. 天津醫(yī)藥，2010，38：124-126.

[12]王爽，張曉玲. Ang-2、VEGF在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥中表達(dá)及相關(guān)性研究[J]. 實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2010，26：594-597.

[13]Fang Y，Li C，Shao R，et al. Prognostic significance of the angiopoietin-2/angiopoietin-1 and angiopoietin-1/Tie-2 ratios for early sepsis in an emergency department[J]. Crit Care，2015，19：367.

[14]劉淑艷. 子宮內(nèi)膜異位癥患者外周血和腹腔液中血管生成素-2和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子水平的檢測(cè)及臨床意義[J]. 海南醫(yī)學(xué)，2010，21：86-87.

[15]Ng TK. Letter to the editor regarding “Virtual screening of natural and synthetic ligands against diabetic retinopathy by molecular interaction with angiopoietin-2”[J]. Asia Pac J Ophthalmol (Phila)，2014，3：395-396.

[16]Zhang B，Khalaf H，Sirsj? A，et al. Gingipains from the periodontal pathogen porphyromonas gingivalis play a significant role in regulation of angiopoietin 1 and angiopoietin 2 in human aortic smooth muscle cells[J]. Infect Immun，2015，83：4256-4265.

[17]張曉玲，王爽，朱清仙. 血管生成素-2在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 中國(guó)綜合臨床，2009，25：1311-1313.

[18]宋娟，馬洪達(dá)，尹利榮，等. Ang-2、Tie-2與ER-α在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義[J]. 天津醫(yī)藥，2009，37：734-736.

[編輯：肖曉輝]

Expression of angiopoietin-2 and its receptor in endometriosis

GAO Jing

DepartmentofObstetrics&Gynecology，theFourthAffiliatedHospitalofLiaoningUniversityofTCM，Shenyang110101

【Abstract】Objective： To investigate the expression of angiopoietin-2 (Ang-2) and tyrosine kinase receptor-2 (Tie-2) in endometriosis，and explore its specific role in development of endometriosis.

Key words：Endometriosis；Angiopoiethin-2；Tyrosine kinase receptor-2；Expression

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.06.011

【收稿日期】2015-10-08；【修回日期】2015-11-19

【作者簡(jiǎn)介】高靜，女，遼寧人，本科，副主任醫(yī)師，婦科內(nèi)分泌專(zhuān)業(yè).