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(成都市婦女兒童中心醫(yī)院，四川成都 610091)

·臨床研究·

川崎病患兒外周血淋巴細(xì)胞亞群變化及臨床意義

祝絢，王雪梅，劉成桂，曹登成

(成都市婦女兒童中心醫(yī)院，四川成都 610091)

摘要:目的通過檢測川崎病(KD)患兒不同階段外周血中淋巴細(xì)胞亞群絕對值的變化，分析其臨床意義。方法采用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測31例KD急性期(急性期組)，30例KD恢復(fù)期患兒(恢復(fù)期組)和35例健康兒童(對照組)外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD19+和CD56+水平，并對結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果急性期組CD3+、CD4+、CD8+明顯低于對照組，CD19+明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；恢復(fù)期組CD3+、CD8+明顯低于對照組，CD19+明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；恢復(fù)期組CD3+、CD8+明顯高于急性期，CD19+明顯低于急性期，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CD4+/CD8+和CD56+在三組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論檢測淋巴細(xì)胞亞群對評估KD患兒免疫狀況、診斷和治療具有重要的臨床價值。

關(guān)鍵詞:川崎病；淋巴細(xì)胞亞群；流式細(xì)胞術(shù)

川崎病(KD)是一種急性、自限性全身血管炎性疾病，1967年首次被日本川崎富所報道，好發(fā)于6個月至5歲的嬰幼兒，臨床表現(xiàn)為高燒、皮疹、淋巴結(jié)腫大和結(jié)膜充血，其發(fā)病機制尚不明確[1]。川崎病可引起免疫紊亂，累及冠狀動脈，誘發(fā)心血管疾病和后天性心臟病等嚴(yán)重后遺癥，是導(dǎo)致嬰幼兒死亡的重要因素之一。隨著發(fā)病率的日益增長，長期以來KD缺乏特異、有效的診斷方法[2]。本文通過對KD患兒急性期、恢復(fù)期外周血淋巴細(xì)胞亞群的測定，并和正常兒童進(jìn)行比較，評估KD患兒免疫功能變化，為臨床對KD診斷、治療和預(yù)后提供一定幫助。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年1月至2014年12月本院兒科收治的KD患兒61例，其中男39例，女22例，年齡5個月至8歲，平均(4.1±1.3)歲。采用2002年日本川崎病研究委員會第5次修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，按病程將61例KD患兒分為急性期組(病程10 d內(nèi)未經(jīng)治療)和恢復(fù)期組(病程21～28 d)，急性期組31例，恢復(fù)期組30例；對照組35例為同期門診健康體檢兒童，兩組性別和年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法分別于急性期和治療恢復(fù)期檢測外周血淋巴細(xì)胞亞群。

1.3儀器和試劑采用美國BECKMAN COULTER公司CYTOMICS FC 500流式細(xì)胞儀檢測CD3+、CD4+、CD8+、CD19+和CD56+水平。試劑盒由美國BECKMAN COULTER公司提供，嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行。

2結(jié)果

研究結(jié)果顯示，急性期組CD3+、CD4+、CD8+明顯低于對照組，CD19+明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；恢復(fù)期組CD3+、CD8+明顯低于對照組，CD19+明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；恢復(fù)期組CD3+、CD8+明顯高于急性期，CD19+明顯低于急性期，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CD4+/CD8+和CD56+在三組中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　　外周血細(xì)胞亞群比較±s)

*：P<0.05，與對照組比較；△：P<0.05，與急性期組比較。

3討論

川崎病是一種以高燒、皮疹、黏膜炎、淋巴結(jié)腫大伴冠狀動脈損害和免疫紊亂為特征的嬰幼兒急性血管炎，可誘發(fā)冠狀動脈擴(kuò)張、心肌炎、后天性心臟病等嚴(yán)重并發(fā)癥，是威脅嬰幼兒健康的重要疾病之一。日本和美國做了大量流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，但其發(fā)病機制至今尚未清楚，也沒有特異性的檢測手段[2,4]，這對KD患兒的疾病診斷、病程評估、治療和預(yù)后造成一定困擾。

川崎病的早診斷、早治療對減少川崎病及其并發(fā)癥具有重要意義。雖然川崎病的發(fā)病機制尚不清楚，但很多研究都顯示KD發(fā)病與淋巴細(xì)胞感染密切相關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)，病毒、細(xì)菌、超抗原、遺傳因素等都可能參與了KD的病理機制[1]。Burns等[4]認(rèn)為，KD患兒的血管炎和免疫紊亂可能與親淋巴細(xì)胞性病毒同時對內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞存在親和性有關(guān)。通過檢測KD患兒和健康兒童外周血單個核細(xì)胞培養(yǎng)的上清液顆粒部分發(fā)現(xiàn)，KD患兒的外周血單個核細(xì)胞上清液顆粒部分有逆轉(zhuǎn)錄病毒活化，而這種逆轉(zhuǎn)錄病毒的活化傳達(dá)到固定的T細(xì)胞系，從而證明了KD與淋巴細(xì)胞的外源感染有關(guān)。丙種球蛋白是目前治療KD的主要方法之一[2]，其作用機制可能與延緩了淋巴細(xì)胞的凋亡時間，降低了淋巴細(xì)胞凋亡比例和DNA片段有關(guān)，提示KD與自身免疫性疾病和無功能淋巴細(xì)胞凋亡相關(guān)[5]。而Lee等[6]的研究表明，免疫球蛋白和阿司匹林聯(lián)合治療組的患者比單獨用阿司匹林治療組的患者CD4+、CD8+和T細(xì)胞總數(shù)上升更明顯，B細(xì)胞下降更明顯，認(rèn)為丙種球蛋白對KD患兒的治療可修復(fù)T、B細(xì)胞的紊亂，特別是B細(xì)胞的紊亂。因此，外周血淋巴細(xì)胞水平變化與KD患兒病程發(fā)展密切相關(guān)，不容忽視。

淋巴細(xì)胞是機體免疫系統(tǒng)功能中最重要的細(xì)胞群，是反映機體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)。當(dāng)淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異?；蜃兓瘯r，就會導(dǎo)致機體免疫紊系統(tǒng)亂并產(chǎn)生病理變化，尤其是T淋巴細(xì)胞以及T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+的數(shù)量和相對比值的變化在免疫系統(tǒng)中占主導(dǎo)地位[7]。本研究結(jié)果顯示，KD急性期與恢復(fù)期CD3+、CD8+明顯低于正常組，CD19+明顯高于對照組。CD3+的降低說明了T淋巴細(xì)胞總數(shù)的減少導(dǎo)致了KD患兒T細(xì)胞的異常，免疫應(yīng)答使機體免疫系統(tǒng)處于失衡狀態(tài)，特別是CD8+的明顯減少，提示作為Ts細(xì)胞減少可能導(dǎo)致機體免疫系統(tǒng)的過度激活，引起細(xì)胞免疫的紊亂。另一方面，Th細(xì)胞和Ts比例在機體正常情況下維持一個相對平衡狀態(tài)，一旦這個平衡打破，機體免疫系統(tǒng)也會出現(xiàn)紊亂。雖然三組中CD4+/CD8+的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但在急性期CD4+是明顯低于正常組，到了恢復(fù)期CD4+與正常組并無差別，說明CD4+降低的速度相對CD8+速度慢，說明Th細(xì)胞相對Ts細(xì)胞增加，B細(xì)胞的激活又依賴于Th細(xì)胞和Ts細(xì)胞的調(diào)節(jié)，CD19+的明顯增高可能與Ts的減少伴有Th的增加有關(guān)，從而造成B細(xì)胞抑制降低，活化增加，導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn)，并產(chǎn)生大量抗體，使得患兒的體液免疫發(fā)生紊亂。此外，處于恢復(fù)期的患兒CD3+、CD8+明顯高于急性期，CD4+恢復(fù)到正常，CD19+也明顯降低，說明細(xì)胞免疫和體液免疫的紊亂無論在T淋巴細(xì)胞總數(shù)，還是Th/Ts細(xì)胞的比例以及B淋巴細(xì)胞的總數(shù)在恢復(fù)期都處于一個逐漸修復(fù)平衡的狀態(tài)，這對病程的判斷和治療有重要意義。

綜上所述，動態(tài)檢測淋巴細(xì)胞亞群對對評估患兒的免疫狀況、病理進(jìn)程、療效和預(yù)后有一定的幫助。

參考文獻(xiàn)

[1]Ashrafi AH,Wang J,Stockwell CA,et al.Kawasaki disease:four case reports of cardiopathy with an institutional and literature review[J].Pediatr Dev Pathol,2007,10(6):491-499.

[2]Pinna G,Kafetzis D,Tselkas O,et al.Kawasaki disease:an overview[J].Curr Opin Infect Dis,2008,21(3):263-270.

[3]Levison ME,Thomas M,Pallasch J,et al.Diagnosis,treatment,and long-term management of Kawasaki disease:a statement for health professionals from the Committee on Rheumatic Fever,Endocarditis,and Kawasaki Disease,Council on Cardiovascular Disease in the Young,American Heart Association[J].Pediatrics,2004,114(6):1708-1733.

[4]Burns JC,Geha RS,Schneeberger EE,et al.Polymerase activity in lymphocyte culture supernatants from patients with Kawasaki disease[J].Nature,1986,323(6091):814-816.

[5]Yi QJ,Li CR,Yang XQ.Effect of intravenous immunoglobulin on inhibiting peripheral blood lymphocyte apoptosis in acute Kawasaki disease[J].Acta Paediatr,2001,90(6):623-627.

[6]Lee HK,Kim DS,Noh GW,et al.Effects of intravenous immune globulin on the peripheral lymphocyte phenotypes in Kawasaki disease[J].Yonsei Med J,1996,37(5):357-363.

[7]Santana MA，Esquivel-Guadarrama F.Cell biology of T cell activation and differentiation[J].Int Rev Cytol,2006,250(250):217-274.

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.039

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)10-1393-03

(收稿日期：2016-01-23)