蒲澤晏，胥國(guó)強(qiáng)，李祥坤，李　鳳，黃雪梅

(遂寧市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川遂寧 629000)

·論著·

2 513例抗核抗體與抗核抗體譜檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析

蒲澤晏，胥國(guó)強(qiáng)，李祥坤，李鳳，黃雪梅

(遂寧市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川遂寧 629000)

摘要:目的分析本實(shí)驗(yàn)室抗核抗體(ANA)與抗核抗體譜(ANAs)15項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果，并探討兩者之間的關(guān)系。方法分別用間接免疫熒光法(IIF)和免疫印跡法(IBT)檢測(cè)患者ANA和ANAs，判斷其ANA滴度、熒光模型和ANAs結(jié)果，并對(duì)ANA和ANAs檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果471例ANA陽(yáng)性患者標(biāo)本中，顆粒型161例，均質(zhì)型110例，胞質(zhì)型96例、核仁型37例、著絲點(diǎn)型28例，其他型合計(jì)39例；滴度為1∶100者196例，占41.61%(196/471)，其中ANAs陽(yáng)性53例，占27.04%(53/196)；滴度為1∶320者123例，占26.11%(123/471)，其中ANAs陽(yáng)性67例，占54.47%(67/123)；滴度為1∶1 000者152例，占32.27%(152/471)，其中ANAs陽(yáng)性132例，占86.84%(132/152)；2 042例ANA陰性標(biāo)本中45例ANAs檢測(cè)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為2.2%(45/2042)；高滴度ANA患者血清中ANAs的陽(yáng)性率高于低滴度(χ2=123.132,P<0.05)。結(jié)論不同滴度的ANA與ANAs之間有一定的關(guān)系，如果以ANA進(jìn)行過(guò)篩，陽(yáng)性再做ANAs會(huì)漏檢部分患者，建議IIF和IBT聯(lián)合應(yīng)用，防止風(fēng)濕病的漏診。

關(guān)鍵詞:抗核抗體；抗核抗體譜；間接免疫熒光法；免疫印跡法

抗核抗體(ANA)是抗細(xì)胞核內(nèi)成分的抗體，因?yàn)榧?xì)胞核包含多種成分，所以有抗核內(nèi)多種物質(zhì)的抗體譜即抗核抗體譜(ANAs)，ANA屬于自身抗體。自身抗體的檢測(cè)對(duì)風(fēng)濕病的診斷和鑒別診斷具有重要價(jià)值，尤其是結(jié)締組織病(CTD)的早期診斷至為重要[1]。目前國(guó)內(nèi)外檢測(cè)ANA的方法主要有間接免疫熒光法(IIF)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，廣泛用于風(fēng)濕病的篩查[2-4]。國(guó)內(nèi)外很多實(shí)驗(yàn)室為了節(jié)省檢測(cè)成本，只將ANA陽(yáng)性的標(biāo)本才做特異性ANAs檢測(cè)。還有一些實(shí)驗(yàn)室僅用自動(dòng)化儀器檢測(cè)特異性的ANAs、不作ANA的IIF或免疫印跡法(IBT)篩查。本文通過(guò)對(duì)2 513例ANA與15種抗體的對(duì)比分析，探討ANA與ANAs的關(guān)系，明確ANA與ANAs檢測(cè)的意義及能否相互代替。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2014年10月1日至2015年1月22日本院門(mén)診及住院患者2 513例，其中男849例，年齡1～94歲，平均48.94歲；女1 664例，年齡10個(gè)月至89歲，平均45.80歲。

1.2標(biāo)本采集抽取清晨空腹靜脈血3 mL，靜置30 min后，離心分離血清(3 000 r/min離心10 min)。當(dāng)日不能及時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本置于-20 ℃冰箱保存。

1.3檢測(cè)方法ANA采用IIF法檢測(cè)，試劑盒為歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司生產(chǎn)，每次試驗(yàn)均設(shè)陰、陽(yáng)對(duì)照，操作嚴(yán)格按照試劑盒提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，熒光顯微鏡觀察結(jié)果，細(xì)胞或組織內(nèi)出現(xiàn)特異性熒光判為陽(yáng)性。測(cè)定3個(gè)滴度，1∶100、1∶320、1∶1 000;抗體滴度大于等于1∶100為陽(yáng)性。ANAs采用IBT法檢測(cè)，試劑盒為歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司生產(chǎn)，可檢測(cè)抗-nRNP、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小體、組蛋白、核糖體P蛋白和AMA M2等15種不同抗原IgG類抗體。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作及判定結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1ANA陽(yáng)性標(biāo)本的核型分析2 513份血樣中ANA 陽(yáng)性共471例，陽(yáng)性率為18.74%(471/2 513)。熒光模式顆粒型占34.18%(161/471)，均質(zhì)型占23.35%(110/471)，胞質(zhì)型占20.38%(96/471)，核仁型占7.86%(37/471)，著絲點(diǎn)型5.94%(28/471)，其他核型占8.28%(39/471)，具有兩種或兩種以上核型的占6.16%(29/471)。見(jiàn)表1。

表1　　471例ANA陽(yáng)性標(biāo)本中不同熒光核型的比例

2.2不同熒光滴度ANA標(biāo)本中ANAs的陽(yáng)性率比較471例ANA陽(yáng)性，滴度為1∶100者占41.61%(196/471)，其中ANAs陽(yáng)性53例，占27.04%；滴度為1∶320者占26.11%(123/471)，其中ANAs陽(yáng)性67例，占54.47%；滴度為1∶1 000者占32.27%(152/471)，其中ANAs陽(yáng)性132例，占86.84%(132/152)。高滴度ANA患者血清中ANAs的陽(yáng)性率高于低滴度，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=123.132,P<0.05)。

2.32 513例標(biāo)本中ANAs陽(yáng)性結(jié)果分析2 513份血樣ANAs 檢測(cè)陽(yáng)性297例，陽(yáng)性率為11.82%(297/2 513)。2 042例ANA陰性標(biāo)本中45例ANAs檢測(cè)陽(yáng)性，陽(yáng)性率為2.20%，其中44例為單項(xiàng)陽(yáng)性，1例為2項(xiàng)陽(yáng)性。

3討論

ANA是CTD 重要的血清學(xué)標(biāo)志，IIF是檢測(cè)ANA的金標(biāo)準(zhǔn)[5],是篩查自身抗體的主要方法[6-7]，是目前應(yīng)用最廣泛的自身抗體篩查試驗(yàn)。本組資料IIF法檢測(cè)的 2 513 份血樣中ANA陽(yáng)性471例，陽(yáng)性率為18.74%(471/2 513)，低于郭大文等[6]報(bào)道的52.00%，但高于高仕萍等[4]報(bào)道的6.25%，可能與受檢查人群、地區(qū)、醫(yī)生對(duì)風(fēng)濕病的認(rèn)知度有關(guān)。ANA 熒光模式本組以顆粒型占34.18%(161/471)，均質(zhì)型占23.35%(110/471)，胞質(zhì)型占20.38%(96/471)，這3型占77.91%，與郭大文等[6]和陳燚瓊等[8]報(bào)道存在一定的差異，郭大文等[6]報(bào)道顆粒型占43.48%，陳燚瓊等[8]報(bào)道顆粒型占62.94%，ANA 熒光模式的差異可能與ANA成分復(fù)雜、檢查對(duì)象差異、人為分型誤差等因素有關(guān)。本研究471例陽(yáng)性中ANA滴度與ANAs的陽(yáng)性率有一定的關(guān)系，本組ANAs/ANA 的比值隨ANA 滴度的升高而增大，與郭大文等[6]報(bào)道的“ANAs 的陽(yáng)性率隨ANA 滴度增大而升高”一致。

本組資料顯示ANA陽(yáng)性率高于ANAs,與相關(guān)報(bào)道一致[2-4,8]。ANA陰性標(biāo)本中ANAs 檢測(cè)陽(yáng)性率為2.20%，低于胡朝軍等[3]報(bào)道的10.17%,高于郭大文等[6]報(bào)道的0.50%。高仕萍等[4]報(bào)道2 207份血樣中ANAs陽(yáng)性、ANA陰性者僅3例。賴永才等[9]報(bào)道132例抗ENA抗體陽(yáng)性病例ANA的陽(yáng)性率為93.90%，有6.10%的ANA陰性患者抗ENA抗體陽(yáng)性。從文獻(xiàn)上看各家報(bào)道結(jié)果差異較大，分析原因可能與選取病例的數(shù)量和診斷的可靠程度、醫(yī)院的?？铺厣?、醫(yī)生和檢驗(yàn)人員的技術(shù)水平、使用儀器試劑的廠家等的差異有關(guān)。由于ANA檢測(cè)的IIF方法是手工實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)過(guò)程中影響因素較多，檢測(cè)結(jié)果最顯著的問(wèn)題是重復(fù)性差[10]，這可能也是各實(shí)驗(yàn)室報(bào)道差異較大的原因，因此，人員教育、素質(zhì)提高和質(zhì)量控制是保障質(zhì)量工作的核心[11-12]。

筆者認(rèn)為ANA與ANAs的檢測(cè)各家報(bào)道結(jié)果差異較大，目前尚缺乏多中心大樣本的研究，沒(méi)有形成“專家共識(shí)”，期望今后有“專家共識(shí)”或其他相關(guān)規(guī)范性文件或操作出臺(tái)。根據(jù)作者對(duì)2 513份血樣的對(duì)比分析認(rèn)為：由于ANA與ANAs敏感性、特異性有差異,如果ANA陰性標(biāo)本不做ANAs會(huì)導(dǎo)致部分患者漏診,兩者聯(lián)合檢測(cè)在CTD 診斷中具有一定互補(bǔ)性，可減少漏診或誤診。

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Comparative analysis of antinuclear antibody and antinuclear antibody spectrum for 2 513 samples

PuZeyan,XuGuoqiang,LiXiangkun,LiFeng,HuangXuemei

(DepartmentofClinicalLaboratory,SuiningCentralHospital,Suining,Sichuan629000，China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the results of combined detection of the 15 indexes of antinuclear antibodies (ANA) and antinuclear antibody spectrum (ANAs) in our laboratory and to investigate the correlation between them.MethodsThe ANA fluorescence pattern and the ANA titer were detected by the indirect immunofluorescence(IIF) and the ANAs was detected by immunoblotting(IBT).The results of the ANA and ANAs were analyzed.ResultsAmong the 471 samples of ANA positive,161 cases were speckled pattern,110 cases were homogeneous pattern,96 cases were cytoplasmic pattern,37 cases were nucleolar pattern,28 cases were centromere pattern,and 39 cases were the other pattern.The positive rate of ANA titer of 1∶100 was 41.61%(196/471) and positive rate of ANAs was 27.04%(53/196).The positive rate of ANA titer of 1∶320 was 26.11%(123/471) and positive rate of ANAs was 54.47%(67/123).The positive rate of ANA titer of 1∶1 000 was 32.27%(152/471) and positive rate of ANAs was 86.84%(132/152).45 cases were detected with the ANAs positive of in 2 042 ANA negative samples,the positive rate were 2.2%(45/2 042).The positive rate of ANAs in high ANA titer samples was higher than that in low ANA titer samples(χ2=123.132,P<0.05).ConclusionThe ANA titer and ANAs has certain relationship.If ANA is regarded as positive to test ANAs,a small proportion of patients will miss detection.Thus,the combination detection of IIF and IBT is suggested to avoid the misdiagnosis of rheumatic.

Key words:antinuclear antibody;antinuclear antibodies spectrum;indirect immunofluorescence;immunoblotting

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.018

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)10-1346-02

(收稿日期：2015-11-15)

作者簡(jiǎn)介：劉藝，男，檢驗(yàn)技師，主要從事臨床檢驗(yàn)方向的研究?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail：zxm18@sohu.com。