任虹，傅超美，何瑤，羅妮妮，季寧平，楊歡

·炮制制劑·

大黃傳統(tǒng)飲片與煮散顆粒在不同時間點蒽醌類成分和干膏收率的比較

任虹，傅超美*，何瑤，羅妮妮，季寧平，楊歡

目的：比較大黃傳統(tǒng)飲片與煮散顆粒在不同煎煮時間點總蒽醌含量、干膏收率的變化。方法：采用HPLC法測定并比較大黃傳統(tǒng)飲片和煮散顆粒在不同煎煮時間點煎出液中總蒽醌含量以及干膏收率。結(jié)果：煎煮5～60 min時，不同時間點大黃煮散顆粒煎出液中的總蒽醌含量及干膏收率均高于大黃傳統(tǒng)飲片煎出液。結(jié)論：本試驗驗證了中藥煮散省材省時之優(yōu)點，以期為中藥傳統(tǒng)飲片應(yīng)用形式提供適應(yīng)現(xiàn)代社會需求的新型飲片。

大黃傳統(tǒng)飲片；大黃煮散顆粒；總蒽醌；游離型蒽醌；結(jié)合型蒽醌

大黃性寒、味苦，歸大腸、脾、胃、肝、心經(jīng)，具有瀉下攻積、瀉火解毒、涼血止血、活血祛瘀和清泄?jié)駸岬墓π1]，臨床常用于治療實熱便秘，熱結(jié)胸痞，濕熱瀉痢，黃疸，淋病，水腫腹?jié)M，小便不利等癥[2]。其中有效成分[3]主要為蒽醌類化合物，其中游離型蒽醌有大黃素、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚。結(jié)合型蒽醌有大黃素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷，大黃酚-1-O-β-D-葡萄糖苷，大黃素甲醚-6-O-β-D-葡萄糖苷，蘆薈大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷，大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷，大黃素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷等,經(jīng)過水解后，結(jié)合型蒽醌會轉(zhuǎn)化成游離型蒽醌。中藥煮散是指以水為溶媒，將藥材顆?；蛩幉募?xì)末煎煮后，取汁服用的用藥形式[4-6]，本試驗在傳統(tǒng)中藥煮散理論指導(dǎo)下，通過比較不同時間點大黃傳統(tǒng)飲片與煮散顆粒[7]煎煮過程中總蒽醌含量、干膏收率的變化，為臨床安全使用煮散顆粒以及開發(fā)節(jié)藥、環(huán)保的新型中藥現(xiàn)代飲片提供思路。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

大黃傳統(tǒng)飲片（四川新荷花中藥飲片股份有限公司，產(chǎn)地四川，批號1204127，經(jīng)鑒定為蓼科植物藥用大黃，且符合2015年版《中國藥典》大黃項下規(guī)定），大黃煮散顆粒為提前制備的實驗室自制顆粒（取大黃細(xì)粉，按1 mL/g均勻加水，過1號網(wǎng)篩，擠出制粒，于60 ℃干燥3 h取出，整粒即得大黃煮散顆粒）。

1.2 試劑

大黃素甲醚對照品（四川省維克奇生物技術(shù)有限公司，批號120902，純度≥98%）大黃素對照品（四川省維克奇生物技術(shù)有限公司，批號120210，純度≥98%），蘆薈大黃素（四川省維克奇生物技術(shù)有限公司，批號120723，純度≥98%），大黃酸（四川省維克奇生物技術(shù)有限公司，批號120115，純度≥98%），大黃酚（四川省維克奇生物技術(shù)有限公司，批號120621，純度≥98%），甲醇(色譜純)，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

1.3 儀器

LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津公司)，DJ靈巧型粉碎機(jī)(上海淀久中藥機(jī)械制造有限公司)，Sartorius-BS110S 型分析天平(德國賽多利斯公司)，R501B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申順生物科技有限公司)，HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)。

1.4 方法

試驗依據(jù) 2015 年版《中國藥典》中大黃項下的定量測定的方法和文獻(xiàn)中用的各種方法，選擇測定大黃中的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素和大黃素甲醚以及干膏收率的含量進(jìn)行測定。

1.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱DiamonsilTMC18（5μm，250 mmx4.6 mm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）；檢測波長：254 nm；流速：1 ml/ min；柱溫：30 ℃；理論板數(shù)按大黃素峰計算應(yīng)不低于3000。

1.4.2 對照品溶液的制備 取各對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml對照品含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素和大黃素甲醚分別為24 μg、279 μg、126 μg、13 μg、19.5 μg的標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

1.4.3 供試品溶液的制備 根據(jù)前期預(yù)試驗結(jié)果，探討出了具體的供試品溶液制備方法，為分別精密稱取大黃傳統(tǒng)飲片5 g，共10份，分別加入16倍量水，浸泡15 min，取5份樣品分別煎煮5、10、15、20、30 min，濾過，濾液定容至100 ml，備用。另5份樣品煎煮30 min，濾過，收集濾液備用，濾渣中加入16倍量水分別煎煮5、10、15、20、30 min，濾過，合并2 次濾液，定容至100 ml，備用。水煎液冷卻后，經(jīng)0.45μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。分別精密稱取大黃煮散顆粒5 g，共10份，同法制備大黃煮散顆粒的供試品溶液。

用移液管取10 ml大黃傳統(tǒng)飲片提取液續(xù)濾液于分液漏斗中，分別加入三次氯仿溶液，每次分別為20 ml、20 ml、10 ml氯仿，待分層后，收集氯仿層溶液，保留水層待用，揮干氯仿液后，用甲醇溶解并定容放置于10 ml容量瓶中，即得大黃傳統(tǒng)飲片游離型蒽醌供試品溶液。

將上述水層溶液置于圓底燒瓶中，加入8%鹽酸5 mL和20 ml氯仿后，置75 ℃水浴鍋中水浴1 h，收集氯仿層；同法提取兩次，每次氯仿液量分別為20 ml、10 ml。收集三次氯仿液，揮干氯仿液后，用甲醇溶解并定容放置于10 ml容量瓶中，即得大黃傳統(tǒng)飲片結(jié)合型蒽醌供試品溶液。

同法制得大黃煮散顆粒游離型蒽醌供試品溶液和大黃煮散顆粒結(jié)合型蒽醌供試品溶液。

總蒽醌含量=游離型蒽醌含量+結(jié)合型蒽醌含量。

1.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取“1.4.2”項下對照品溶液2，6，10，14，18 μl注入液相色譜儀，測定峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）、峰面積值為縱坐標(biāo)（Y）繪制蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素和大黃素甲醚的標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得到回歸方程分別為Y1= 7E+06 X1 + 28396 R=0.9994, Y2= 3E+06 X2 - 39854 R=0.9996, Y3= 1E+06 X3 - 8088 R=0.9991, Y4=8E+06 X4 + 22980 R=0.9991, Y5=2E+06 X5 + 8786 R=0.9992.五種對照品分別在48～432 ng，558～5022 ng，252～2268 ng，26～234 ng，39～351 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.4.5 樣品測定 分別精密吸取大黃對照品10μL，大黃飲片及煮散顆粒不同時間點的供試品溶液10μL，按“1.4.1”項下色譜條件測定。色譜圖見圖1、2、3。

圖1 大黃對照品色譜圖

圖2 大黃煮散顆粒30min色譜圖

圖3 大黃傳統(tǒng)飲片30min色譜圖

1.4.6 干膏收率的測定 分別精密稱取大黃傳統(tǒng)飲片5 g，共10份，分別加入16倍量水，浸泡30 min，取5份樣品分別煎煮5、10、15、20、30 min，濾過，濾液定容至100 ml，備用。另5份樣品煎煮30 min，濾過，收集濾液備用，濾渣中加入16倍量水分別煎煮5、10、15、20、30 min，濾過，合并2 次濾液，定容至100 ml，得大黃傳統(tǒng)飲片不同時間點的干膏收率供試品溶液。分別精密稱取大黃煮散顆粒5 g，共10份，同法制備大黃煮散顆粒不同時間點的干膏收率供試品溶液。分別精密吸取上述供試液50 ml，置已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質(zhì)量。

干膏收率%=[（干膏重量×煎出液總量）／（藥材量×所取藥液量）]×100%

2 結(jié)果與結(jié)論

將大黃傳統(tǒng)飲片與煮散顆粒不同煎煮時間點總蒽醌含量和干膏收率的測定結(jié)果見表1、2，由表2結(jié)果更為直觀的轉(zhuǎn)化成折線圖后，見圖4、5。在每個測定含量的時間點，煮散顆粒的游離型蒽醌含量、結(jié)合型蒽醌含量、總蒽醌含量總是高于傳統(tǒng)飲片，且含量相差的倍數(shù)分別為1.36～2.68倍、1.39～1.97倍、1.37～2.19倍。并且大黃煮散顆粒的干膏收率是大黃傳統(tǒng)飲片干膏收率量的1.39～1.90倍。

表1 大黃傳統(tǒng)飲片與大黃煮散顆粒總蒽醌含量（n=3）

表2 大黃傳統(tǒng)飲片、煮散顆粒不同煎煮時間總蒽醌含量及干膏收率的對比(n=3)

圖4 大黃傳統(tǒng)飲片、煮散顆粒不同煎煮時間總蒽醌的對比

圖5 大黃傳統(tǒng)飲片、煮散顆粒不同煎煮時間干膏收率的對比

3 討論

在前期試驗中，課題組對不同粒度的大黃煮散顆粒進(jìn)行了考察，結(jié)果得出大黃粉末粒度越細(xì)，其有效成分煎出率較高，成型性較好，但其濾過性較差，故通過對以后實際生產(chǎn)的考慮，確定大黃細(xì)粉為最佳粒度。故本試驗以大黃細(xì)粉為研究對象。

通過大黃傳統(tǒng)飲片與煮散顆粒煎煮過程中總蒽醌含量和干膏收率變化的考察，大黃傳統(tǒng)飲片粉碎成細(xì)粉后進(jìn)行煎煮，總蒽醌含量和干膏收率大大增加。目前，中藥材的使用需求量日益增大，中藥材的資源保護(hù)迫在眉睫，而縱觀現(xiàn)行的中藥傳統(tǒng)飲片、中藥配方顆粒等均不能很好的解決這些問題。本試驗結(jié)果不僅驗證了中藥煮散省材省時之優(yōu)點，同時為中藥傳統(tǒng)飲片應(yīng)用形式的創(chuàng)新提供新思路。

本試驗從大黃的主要有效成分含量方面對大黃傳統(tǒng)飲片和大黃煮散顆粒進(jìn)行了對比研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無論在哪一方面，大黃煮散顆粒都是優(yōu)于大黃傳統(tǒng)飲片的，這為促進(jìn)煮散顆粒在中醫(yī)藥事業(yè)方面的應(yīng)用提供了一定的依據(jù)。但在以后的研究中應(yīng)同時對大黃煮散顆粒的毒理作用和體內(nèi)藥物代謝動力學(xué)方面進(jìn)行深入的研究，從而準(zhǔn)確確定大黃煮散顆粒的使用劑量，以便更加安全的使用于臨床治療中。

[1] 張廷模.臨床中藥學(xué).上海科學(xué)技術(shù)出版社.第一版,2006：136.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典(一部).中國醫(yī)藥科技出版社.2015： 22.

[3] 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典.上?？茖W(xué)技術(shù)出版社. 第二版.2006,138.

[4] 穆蘭澄,曹京梅,李冀湘,等.中藥煮散的歷史沿革與現(xiàn)代研究概述.中國實驗方劑學(xué)雜志,2008;14(7)：74.

[5] 江泳,馮欣,楊殿新,等.對中藥煮散劑現(xiàn)狀的認(rèn)識與思考.四川中醫(yī),2010;28(5)：69.

[6] 林俊芝,傅超美,毛茜,等. 黃柏飲片與煮散顆粒在不同煎煮時間點鹽酸小檗堿含量和干膏收率的比較．中國實驗方劑學(xué)雜志,2012;12(18)：41～43.

[7] 孫冬梅,饒梅冰,熊紅,等.大黃不同煎煮時間對小承氣湯中結(jié)合型蒽醌含量的影響.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2011;5(23)：53～55.

(責(zé)任編輯：傅舒)

Comparison of total anthraquinone content and yield of dry extract from decoction pieces and powder of Rhubarb at different boiling time

/REN Hong, FU Chao-mei, HE Yao, LUO Ni-ni, JI Ning-ping, YANG Huan//(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:The thesis is to explore the variation of total anthraquinone content and yield of dry extract between traditional decoction pieces and powder of Rhubarb at different boiling time．Method:HPLC was used to detect the content of total anthraquinone and yield of dry extract from decoction of traditional decoction pieces and powder of Rhubarb at different time.Result:The content of total anthraquinone and yield of dry extract in powder were increased compared with those in traditional decoction pieces of Rhubarb during 5～60 min.Conclusion:This study has testified the advantage of timesaving and energy-saving of Chinese medicine decoction made from powder so as to provide new decoction pieces for modern society.

Rhubarb traditional decoction pieces；the powder of Rhubarb；total anthraquinone；free anthraquinone；combined anthraquinone

R285.5

A

1674-926X(2016)05-007-03

成都中醫(yī)藥大學(xué) 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點實驗室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗室—省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

任虹，女，助教，從事中藥制劑新技術(shù)新方法研究 Tel：15882232829 Email：363568917@qq.com

傅超美，男，教授，從事中藥制劑新技術(shù)新方法研究 Email：chaomeifu@126.com

2016-04-12