饒文霞 ，張開元，尹顯梅，薛倩倩，李杰，尹鴻翔

·品種品質(zhì)·

不同產(chǎn)地木香中兩種倍半萜內(nèi)酯的含量測定

饒文霞 ，張開元，尹顯梅，薛倩倩，李杰，尹鴻翔

目的：測定不同產(chǎn)地木香中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為Comatex C18( 250 mm × 4.6 mm，5 μm)，以甲醇－水（65∶35）為流動相，檢測波長225 nm，流速 1.0 mL．min-1，柱溫30℃。結(jié)果：木香烴內(nèi)酯在0.2108 μg～1.2648 μg、去氫木香內(nèi)酯在0.2332 μg～1.3992 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯回收率分別為100.75% ,100.21% 。結(jié)論：不同產(chǎn)地木香藥材中木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的含量差別較大，產(chǎn)地對藥材質(zhì)量有明顯影響。

高效液相色譜法；木香；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯

木香為傳統(tǒng)常用中藥，為菊科植物木香(Aucklandia lappa Decne.）的干燥根。性溫，味辛、苦，具有行氣止痛、健脾消食的功效，臨床上用于胸脘脹痛、瀉痢后重、食積不消、不思飲食等癥[1]。

木香主含揮發(fā)油，其主要活性成分木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯具有松弛平滑肌和解痙作用[2-3]，含量高低可作為木香質(zhì)量優(yōu)劣的評價指標之一。本文參考相關(guān)文獻[4-6]，以木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量為指標，用HPLC法對11個不同產(chǎn)地木香的木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量進行了測定。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1200高效液相色譜儀（四元泵、自動進樣器、柱溫箱、檢測器、工作站），SB-52000超聲波清洗器（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司），ULUP-1-10T 型超純水機（成都優(yōu)普超純水科技有限公司），BSA124S 電子分析天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），SHZ—D（Ⅲ）型循環(huán)水真空泵（上海一科儀器有限公司），F(xiàn)W-200高速粉碎機（北京中興偉業(yè)儀器有限公司），木香烴內(nèi)酯對照品（批號：140720，純度≥98%）、去氫木香內(nèi)酯對照品（批號：141027，純度≥98%）均購自成都普菲德生物技術(shù)有限公司，甲醇為色譜純，水為超純水。木香藥材于2014年分別在不同產(chǎn)地進行采集，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)尹鴻翔副教授鑒定為菊科植物木香（Aucklandia lappa Decne.）的根，來源見表1。

表1 木香樣品采集情況

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Comatex C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：甲醇—水（65∶35），流速：1 mL．min-1，柱溫：30 ℃，檢測波長：225 nm。

2.2 對照品溶液的制備

取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品，精密稱定，加甲醇制成木香烴內(nèi)酯質(zhì)量濃度為0.1054 mg．mL-1、去氫木香內(nèi)酯質(zhì)量濃度為0.1166 mg．mL-1的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

將木香藥材于60 ℃烘箱中干燥，粉碎，過4號篩，取木香粉末約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理（功率：250 W，頻率：40 kHz）30 min，取出，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，用0.22 μm的微孔濾膜濾過，即得。

2.4 測定波長的選擇

取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品，用甲醇溶解后，用紫外-可見分光光度計掃描，測得木香烴內(nèi)酯最大吸收波長為211 nm，去氫木香內(nèi)酯最大吸收波長為209 nm，參考相關(guān)文獻及考慮到末端吸收，選擇文獻報道常用的225 nm作為測定波長。吸收光譜圖見圖 1、圖 2。

圖 1 木香烴內(nèi)酯對照品吸收光譜

圖 2 去氫木香內(nèi)酯對照品吸收光譜

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察 精密吸取木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯對照品混合溶液 2，4，6，8，10，12 μL，注入色譜儀，測定不同進樣量下木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的峰面積，以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積(A)為縱坐標，繪制標準曲線。木香烴內(nèi)酯的回歸方程為：Y=1453.4X-3.4733，R=1，去氫木香內(nèi)酯的回歸方程為：Y=1149.9X-4.6133，R=0.9999，結(jié)果表明木香烴內(nèi)酯在0.2108 μg～1.2648 μg，去氫木香內(nèi)酯在0.2332 μg～1.3992 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.2 重復(fù)性考察 取同一批藥材6份，每份約 0.3 g，精密稱定，照供試品溶液制備方法制備，進樣10 μL，測定木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量，結(jié)果木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的RSD分別為 0.38%、0.67%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.3 精密度考察 精密吸取同一供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，連續(xù)進樣 6 次，測定峰面積值，結(jié)果木香烴內(nèi)酯峰面積RSD為0.19%，去氫木香內(nèi)酯峰面積RSD為0.27%，表明方法精密度良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，在0、4、8、12、16、24 小時進樣10 μL，測其峰面積，結(jié)果木香烴內(nèi)酯峰面積RSD為0.25%，去氫木香內(nèi)酯峰面積RSD為 0.38%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 加樣回收率考察 取已知含量同一批木香藥材6 份（木香烴內(nèi)酯含量2.05%，去氫木香內(nèi)酯含量2.68%），每份約 0.1 g，精密稱定，精密加入一定量的木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對照品，照供試品溶液制備方法制備，進樣10 μL，計算木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量，并計算回收率，結(jié)果見表2、3。

表2 木香烴內(nèi)酯加樣回收率試驗

40.10232.1020 1.05403.1660100.95 50.10352.12661.05403.1801 99.95 60.10342.12461.05403.1771 99.86

表3 去氫木香內(nèi)酯加樣回收率試驗

木香烴內(nèi)酯平均回收率為100.75%，RSD為1.59 %；去氫木香內(nèi)酯平均回收率為100.21%，RSD為1.70%，表明該方法回收率好，方法可行。

2.6 不同產(chǎn)地木香中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯含量測定

精密吸取對照品和供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，計算含量。含量測定結(jié)果見表4，色譜圖見圖3、4。

圖3 對照品色譜圖

圖4 供試品色譜圖

表 4 11批木香藥材中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

從11個不同產(chǎn)地的木香烴內(nèi)酯和去氫木香烴內(nèi)酯的含量來看，除個別產(chǎn)地外，大多數(shù)去氫木香內(nèi)酯的含量高于木香烴內(nèi)酯含量，不同產(chǎn)地之間兩者含量差別比較大，說明木香藥材受產(chǎn)地影響較大。木香的傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)為云南，被奉為道地產(chǎn)區(qū)，實驗結(jié)果表明云南麗江、大理的木香兩種成分含量總和高達5.40%和5.77%，說明云南產(chǎn)的木香質(zhì)量較佳，符合道地產(chǎn)區(qū)的內(nèi)涵。其次是四川的宣漢及九寨溝等地，近年來，四川已成為木香的主要產(chǎn)區(qū)，說明道地藥材引種后仍能保持很好的質(zhì)量，這對于木香的產(chǎn)地擴大具有重要意義。

[1] 林明俠.木香的藥理及臨床研究概況[J].中醫(yī)藥信息,2005,22(3)： 18.

[2] 肖培根.新編中藥志： 第一卷[M].北京： 化學(xué)工業(yè)出版社,2001： 184．

[3] 王永兵,王強,毛福林.木香的藥效學(xué)研究[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報,2001,32(2)：146.

[4] 劉正清.不同產(chǎn)地和采收時間木香藥材中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的測定[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2012,18(16)：116.

[5] 趙小民,殷高彬.不同產(chǎn)地木香中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 HPLC 測定[J]. 安徽醫(yī)藥,2009,13(6)：617.

[6] 徐宇,方魯延,談紅,等.HPLC 法測定木香中去氫木香內(nèi)酯的含量[J].中草藥,2004,35(12)： 1416.

(責(zé)任編輯：李蕓霞）

Determination of the contents of two kinds sesquiterpenoids in Muxiang produced in different areas

/RAO Wen-xia, ZHANG Kai-yuan, YIN Xian-mei, XUE Qian-qian, LI Jie,YIN Hong-xiang//(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine , Chengdu 611137, Sichuan )

Objective:To determine costunolide and dehydrocostuslactone in Muxiang from different productive areas.Method:HPLC method was used in the determination with Comatex C18column. The mobile phase was methanol-water (65：35), and detection wavelength was set at 225 nm with the flow rate of 1.0 mL．min-1. Column temperature was 30℃.Result:The peak area of Costunolide was linear within the range of 0.2108 μg～1.2648 μg. The peak area of Dehydrocostuslactone was linear within the range of 0.2332 μg-1.3992 μg. The average recovery of costunolide and dehydrocostuslactone was 100.75% and 100.21%, respectively.Conclusion:The contents of costunolide and dehydrocostuslactone are greatly different in Muxiang produced in different areas, which indicates that production area significantly influence Muxiang quality.

HPLC; Muxiang; costunolide; dehydrocostuslactone

R282.6

A

1674-926X(2016)05-003-03

科技部“邊遠貧困地區(qū)、邊疆民族地區(qū)和革命老區(qū)人才支持計劃科技人員專項 計劃”

成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 611137

饒文霞，女，碩士研究生，主要從事生藥學(xué)方向研究 Tel：18314514527 Email：1192884154@qq.com

尹鴻翔，男，副教授，主要從事民族藥資源可持續(xù)利用及質(zhì)量評價研究 Email：hongxiangy@126.com

2015-09-25