李鳳玲，呂宗德（南京市動物疫病預(yù)防控制中心，江蘇南京 210012）

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江蘇省南京市豬偽狂犬病血清流行病學(xué)調(diào)查

李鳳玲，呂宗德
（南京市動物疫病預(yù)防控制中心，江蘇南京 210012）

摘 要：為了解南京市豬偽狂犬病野毒感染情況，2015年對南京市40個(gè)豬場660份豬血清進(jìn)行了偽狂犬病毒gE抗體監(jiān)測和分析。結(jié)果顯示，全市共發(fā)現(xiàn)7個(gè)抗體陽性豬場，場陽性率為17.50%；共檢出gE抗體陽性血清31份，抗體陽性率為4.69%。經(jīng)產(chǎn)母豬gE抗體場陽性率最高，達(dá)28.57%，血清gE抗體陽性數(shù)占總數(shù)的8.57%；而8個(gè)后備母豬場均沒有檢測到gE陽性抗體；斷奶前仔豬的gE抗體陽性也相對較低。結(jié)果表明，南京市豬場仍有偽狂犬野毒感染或因母本感染野毒導(dǎo)致母源抗體的存在。

關(guān)鍵詞：豬偽狂犬??；gE抗體；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

偽狂犬病毒（PRV）屬于皰疹病毒科、豬皰疹病毒屬，很多動物對其易感，而豬是PRV的唯一自然宿主，感染后的臨床癥狀主要以母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、木乃伊胎，仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀并大量死亡為主要特征[1]。偽狂犬病也被稱作奧耶斯基病（Aujezsky Disease，AD）、瘋癢病[2]。

我國自1947年首次報(bào)道該病以來，已有20多個(gè)?。ㄊ校┫嗬^報(bào)道出現(xiàn)過本病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國豬群偽狂犬病平均陽性率在20%以上[4]。近年來，一些規(guī)模化豬場逐漸實(shí)行豬場凈化的政策，其中部分規(guī)模豬場已經(jīng)達(dá)到了PRV野毒陰性狀態(tài)。要徹底消滅豬偽狂犬病，需要采取綜合防控措施和有效的檢測方法，才能最終消除豬偽狂犬病。

相關(guān)研究表明，在PRV野毒感染的豬群中均能檢測到病毒的gE基因，而目前國內(nèi)的偽狂犬疫苗大多缺失gE基因[5]。因此gE可作為“標(biāo)記”基因，來區(qū)別感染和疫苗接種豬。本試驗(yàn)使用gE-ELISA診斷試劑盒對南京市豬偽狂犬病野毒感染情況進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查和分析。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1主要試劑及儀器。酶標(biāo)儀為Bio-RAD Model 550公司產(chǎn)品；豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測試劑盒（批號：EL680）購自美國IDEXX公司。

1.1.2血清。隨機(jī)抽檢南京市40個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場的豬血清660份。所有豬場均未免疫普通的偽狂犬弱毒疫苗或滅活疫苗，部分豬群免疫了gE缺失疫苗。

1.2方法

1.2.1制備血清。采血，4℃ 2 000 rpm，離心10 min，取上清，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。按檢測試劑盒操作說明進(jìn)行。反應(yīng)包括以下三個(gè)步驟：血清樣品加入后，血清里的抗體和微孔內(nèi)包被抗原相結(jié)合。洗板后加入酶標(biāo)抗偽狂犬gE單抗，競爭結(jié)合gE病毒抗原。如果血清中沒有g(shù)E抗體，酶標(biāo)gE抗體就與gE抗原自由反應(yīng)，相反，酶標(biāo)gE抗體與抗原反應(yīng)被阻斷。孵育后，沒有反應(yīng)的標(biāo)記物被洗掉，加入底物后，與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)。被檢樣品的A（650）值除以陰性對照的平均A（650）值，計(jì)算得出樣品/陰性值（S/N）。樣品中g(shù)E抗體的含量與其A （650）值和S/N成反比。如果S/N低于或等于0.60，樣品被判定為gE抗體陽性。

2　檢測結(jié)果

2.1總體檢測結(jié)果

在全市40個(gè)豬場中共發(fā)現(xiàn)7個(gè)抗體陽性豬場，場陽性率為17.50% ；共檢出gE抗體陽性血清31份，抗體陽性率為4.69%。結(jié)果表明南京市豬場仍有偽狂犬野毒感染的可能或母本感染了野毒導(dǎo)致存在母源抗體。具體檢測結(jié)果見表1。

表1　2015年南京市豬場偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

2.2群間檢測結(jié)果

不同豬群的檢測結(jié)果顯示，經(jīng)產(chǎn)母豬gE抗體場陽性率最高，達(dá)28.57%，母豬gE抗體陽性數(shù)占總數(shù)的8.57%；而8個(gè)后備母豬場點(diǎn)均沒有檢測到gE抗體陽性；斷奶前仔豬的gE抗體陽性也相對較低。具體檢測結(jié)果見表2。

表2　 2015年南京市不同豬群偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

3　討論

ELISA方法檢測豬群偽狂犬病帶毒情況，比較方便、實(shí)用，特別適合基層獸醫(yī)系統(tǒng)的檢測。使用gE缺失疫苗，再檢測gE基因蛋白抗體，可以有效檢驗(yàn)免疫豬是否感染PRV。若血清中顯示gE抗體陽性，說明豬體感染了野毒或是母本感染了PRV。本試驗(yàn)中，對gE抗體結(jié)果通過S/N的比值顯示，大于0.7是陰性，小于或等于0.6則為陽性。如果母豬感染了PRV，可能會使豬群的母源抗體持續(xù)到15～16周齡，甚至部分豬群在16周齡之后還有g(shù)E抗體。如果在10～12周齡之間檢測到較高的PRV抗體水平，表明豬群在10周齡之前可能就已感染了PRV[6]。

本次檢測結(jié)果顯示，南京市部分豬場的PRV帶毒現(xiàn)象依然存在，尤其是經(jīng)產(chǎn)母豬和商品豬。通過對2個(gè)陽性經(jīng)產(chǎn)母豬場進(jìn)行調(diào)查分析，發(fā)現(xiàn)這2個(gè)豬場沒有實(shí)行人工受精，而是采用自然配種，可能是種公豬帶毒，導(dǎo)致母豬感染；如果豬場中存在PRV，仔豬斷奶后在轉(zhuǎn)群過程中，由于應(yīng)急反應(yīng)，可能導(dǎo)致商品豬再次感染PRV，這可能是商品豬發(fā)生感染的主要原因；而后備母豬均經(jīng)過嚴(yán)格挑選和檢測，所以在檢測中沒有發(fā)現(xiàn)陽性。

因此，凈化豬偽狂犬病需要采取綜合防控措施。只有堅(jiān)持“預(yù)防為主，防重于治”的方針，才能做到病毒的清除與凈化。具體措施包括：引種檢疫；堅(jiān)持自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式；免疫接種；檢測和淘汰凈化群體；加強(qiáng)飼養(yǎng)和生物安全管理，做好豬流、車流、人流和物流的管理[7]。疫苗接種可以阻止豬臨床發(fā)病，降低強(qiáng)毒排出量，縮短強(qiáng)毒排出時(shí)間，進(jìn)而減少帶毒豬；同時(shí)加強(qiáng)生物安全管理，免疫前檢測gE抗體，評估野毒感染情況；免疫gE自然缺失疫苗后，定期檢測野毒感染陽性率，淘汰陽性種豬，最終實(shí)現(xiàn)凈化的目標(biāo)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 姜艷芬，楊增岐，祝衛(wèi)國，等. 陜西省豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查和WG株的分離鑒定[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006（9）：115-158.

[2] 鄒敏，楊旭兵，鄭輝，等. 2012—2013年我國部分地區(qū)豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中國動物檢疫，2015（4）：61-63.

[3] 周斌，蘇鑫銘，張素芳，等. PCR快速檢測偽狂犬病病毒野毒感染[J]. 中國病毒學(xué)，2004（6）：89-92.

[4] 程晶，陳艷紅，蔭碩焱，等. 2006-2008年我國部分地區(qū)規(guī)?；i場PRV血清流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中國動物傳染病學(xué)報(bào)，2009 （1）：169-172.

[5] 杜宗沛，吳植，解慧梅. 2009—2010年江蘇中部地區(qū)部分種豬場主要疫病流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中國動物檢疫，2011（2）：72-75.

[6] 陳平潔，余業(yè)東，黃庭汝，等. 廣東省豬偽狂犬病流行的危險(xiǎn)因素分析[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008（3）：101-104.

[7] 聶奎，李竹青，曾政，等. 川渝部分地區(qū)育肥豬偽狂犬病血清流行病學(xué)調(diào)查及危險(xiǎn)性因素[J]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013（9）：134-137.

（責(zé)任編輯：朱迪國）

Sero-epidemiological Survey of Swine Pseudorabies in Nanjing City of Jiangsu Province

Li Fengling，Lü Zongde
（Nanjing Animal Disease Prevention & Control Center，Nanjing，Jiangsu 210012）

Abstract：In order to understand the status of wild pseudorabies virus（PRV）infection of pigs， 660 serum samples from 40 pig farms in Nanjing city were investigated for detection and analysis on antibodies against glycoprotein E（gE）of PRV in 2015. The results showed that 31 samples from 7 pig farms were positive for gE antibodies，the farm positive rate was 17.5%，and the antibody positive rate was 4.69%. Furthermore，the farm positive rate and antibody positive rate of multiparous sows were 8.57% and 28.57% respectively. No sample was found in farms of replacement gilts and the gE antibody rate of piglets before weaning was relatively low. The results indicated that there was wild virus infection or maternal antibodies of PRV in sows in Nanjing pig farms.

Key words：pseudorabies virus；gE antibodies；ELISA

中圖分類號：S851.3

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B

文章編號：1005-944X（2016）05-0012-03

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.05.004