楊 濤，何揚(yáng)州，李謂娟（. 廈門市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建廈門 36009；. 廈門市同安區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，福建廈門 3600）

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福建省廈門市豬偽狂犬病血清學(xué)流行率估計(jì)與風(fēng)險(xiǎn)因素分析

楊 濤1，何揚(yáng)州1，李謂娟2
（1. 廈門市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建廈門 361009；
2. 廈門市同安區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，福建廈門 361100）

摘 要：豬偽狂犬病是國家要求豬場(chǎng)開展凈化的病種。為做好豬偽狂犬病的凈化工作，對(duì)廈門市豬群偽狂犬病感染狀況進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，從而估計(jì)其血清學(xué)流行率。本研究使用豬偽狂犬病病毒gE-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)了2 402份血清樣品；另外實(shí)地調(diào)查了40個(gè)豬場(chǎng)的飼養(yǎng)管理和免疫等情況，分析偽狂犬病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素。結(jié)果顯示，廈門市豬偽狂犬病血清學(xué)的場(chǎng)真實(shí)流行率為71.8%（95% CI：62.3%～81.2%），個(gè)體真實(shí)流行率為59.0%（95%CI：57.3%～60.7%）；外購種豬是豬場(chǎng)感染偽狂犬病的主要危險(xiǎn)因素。

關(guān)鍵詞：豬偽狂犬??；流行率；風(fēng)險(xiǎn)因素

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）又稱奧耶斯基氏?。ˋujeszky’s disease），是由偽狂犬病病毒（PRV）引起的一種急性傳染病，可引起豬嚴(yán)重的繁殖障礙，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害極大。PRV在我國普遍存在，自2011年底我國北方部分省份暴發(fā)了豬偽狂犬病以來[1]，一些免疫過偽狂犬病疫苗、控制較好的規(guī)模化豬場(chǎng)也出現(xiàn)了偽狂犬病的流行。從2012年至2015年的PRV感染情況調(diào)查結(jié)果[2-6]中可以發(fā)現(xiàn)，我國華東和華南地區(qū)的豬群PRV野毒感染程度總體呈上升趨勢(shì)，PRV場(chǎng)陽性率也逐年上升。我國在《國家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020）》中將豬偽狂犬病列為優(yōu)先防治的動(dòng)物疫病病種，并將其列為種畜禽凈化的重點(diǎn)疫病，要求到2020年全國所有種豬場(chǎng)達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。

疫苗注射是防治本病的主要手段，尤其是基因缺失弱毒疫苗。我國于20世紀(jì)70年代從匈牙利引進(jìn)了豬偽狂犬病 Bartha K61毒株來控制該病。Bartha株為天然gE基因缺失株。為了與血清學(xué)診斷方法相配套，目前國內(nèi)自行研制的PR基因缺失疫苗也缺失了gE基因。因此，通過野毒抗體監(jiān)測(cè)，可以掌握豬群PRV的感染狀況。

廈門市近幾年來一直推行生豬退養(yǎng)政策，只允許在6個(gè)行政區(qū)中的同安區(qū)和翔安區(qū)養(yǎng)殖。同安區(qū)較早推行生豬退養(yǎng)政策，只允許20個(gè)符合環(huán)保條件的規(guī)模豬場(chǎng)在限養(yǎng)區(qū)域內(nèi)養(yǎng)殖；翔安區(qū)目前的豬場(chǎng)數(shù)量還比較多，但規(guī)模較小，絕大多數(shù)存欄在300頭以下，計(jì)劃將規(guī)模豬場(chǎng)數(shù)量控制在47個(gè)。為了掌握廈門市目前的PRV感染狀況，估計(jì)其流行率和分布，尋找群間傳播的風(fēng)險(xiǎn)因素，本研究結(jié)合血清學(xué)檢測(cè)和問卷調(diào)查，對(duì)廈門市豬群進(jìn)行了調(diào)查，旨在為該病的防控及凈化提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，從而提出有效的防控策略。

1　材料與方法

1.1目標(biāo)群

將同安區(qū)所有的20個(gè)豬場(chǎng)（存欄量均超過500頭）和翔安區(qū)102個(gè)存欄量超過500頭的規(guī)模豬場(chǎng)作為目標(biāo)群，于2015年10月至11月采用橫斷面研究方法對(duì)豬場(chǎng)進(jìn)行抽樣檢測(cè)，估計(jì)其豬偽狂犬病血清學(xué)流行率，并對(duì)同安區(qū)的這20個(gè)豬場(chǎng)和從翔安區(qū)抽樣檢測(cè)的豬場(chǎng)中隨機(jī)選取20個(gè)，進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)問卷調(diào)查，了解其豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理水平和免疫情況。

1.2抽樣策略和樣本量

將同安區(qū)豬場(chǎng)全部納入抽樣范圍，對(duì)翔安區(qū)豬場(chǎng)抽樣數(shù)量采用估計(jì)流行率的方法進(jìn)行計(jì)算，按照95%置信水平（CL）和15%可接受絕對(duì)誤差（d），設(shè)預(yù)期流行率為50%（p）。因群體數(shù)量較小，通過校正公式：，確定需要抽取的豬場(chǎng)數(shù)量為31個(gè)；對(duì)豬場(chǎng)內(nèi)的抽樣數(shù)量也采用估計(jì)流行率的方法進(jìn)行計(jì)算，按95% CL和15%可接受絕對(duì)誤差（d），設(shè)預(yù)期流行率為30%（p），根據(jù)計(jì)算公式：，計(jì)算出每場(chǎng)需要隨機(jī)抽取36頭[7]。現(xiàn)場(chǎng)抽樣時(shí)，采取系統(tǒng)隨機(jī)抽樣方法，按一定的欄位間隔進(jìn)行抽樣，抽取的豬群主要為育肥豬和生產(chǎn)母豬。

1.3血樣收集和檢測(cè)

將從豬場(chǎng)采集的全血樣品置于一次性采血器中，送至廈門市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清分離，實(shí)施檢測(cè)前置于-20 ℃冷凍保存。血清樣品用ID.vet公司生產(chǎn)的PRV gE-ELISA試劑盒檢測(cè)其gE抗體。只要有一個(gè)樣品檢測(cè)為gE抗體陽性，則其所在豬場(chǎng)即被定義為PR陽性場(chǎng)。

1.4數(shù)據(jù)分析

1.4.1場(chǎng)流行率估計(jì)。群體水平表觀流行率（HAP）為檢測(cè)到的陽性場(chǎng)群占抽樣研究群的比值。需要考慮抽樣權(quán)重后計(jì)算出全市的群體流行率，群體水平真實(shí)流行率（HTP）結(jié)合群敏感性（HSe）和群特異性（HSp）計(jì)算，計(jì)算公式：HTP=（HAP+HSp-1）其中p是場(chǎng)內(nèi)真實(shí)流行率，Se是ELISA診斷試劑盒的試驗(yàn)敏感性，Sp為試驗(yàn)特異性，n為場(chǎng)內(nèi)豬只抽樣數(shù)量[8]。

1.4.2個(gè)體流行率估計(jì)。個(gè)體水平表觀流行率（AP）為檢測(cè)到的陽性豬只數(shù)量占抽樣研究群數(shù)量的比值。通過抽樣權(quán)重分析后計(jì)算出全市的個(gè)體流行率，抽樣權(quán)重分析參照Ian Dohoo等的方法[9]，個(gè)體真實(shí)流行率（TP）結(jié)合檢測(cè)試劑敏感性（Se）和特異性（Sp）計(jì)算，計(jì)算公式：TP=（AP+Sp-1）/（Se+Sp-1）。場(chǎng)流行率和個(gè)體流行率的95% CI，根據(jù)《獸醫(yī)流行病學(xué)調(diào)查與監(jiān)測(cè)：抽樣技術(shù)》中提供的公式計(jì)算[10]。陽性率的95% CI，根據(jù)公式：計(jì)算，其中p是平均陽性率，Z為標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布中概率為0.05所對(duì)應(yīng)的值，n為群體抽樣數(shù)量。

1.4.3風(fēng)險(xiǎn)因素分析。將血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果和問卷調(diào)查中收集到的豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理和生物安全防護(hù)等相關(guān)信息輸入到Microsoft Excel表，所有變量均為二分類變量，以豬場(chǎng)是否感染偽狂犬病為因變量，然后用Epi infoTM7統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單變量分析，即將疾病狀態(tài)和每個(gè)解釋變量之間的關(guān)聯(lián)通過c2檢驗(yàn)，篩選出p< 0.05的變量。

2　結(jié)果與分析

2.1豬偽狂犬病流行率估計(jì)

調(diào)查結(jié)果顯示，通過抽樣權(quán)重分析，廈門市PRV血清學(xué)場(chǎng)表觀流行率為72.8%，個(gè)體表觀流行率為57.9%（表1）。根據(jù)ELISA診斷試劑盒的試驗(yàn)敏感性（Se=98%）和特異性（Sp=99.9%）[11]，計(jì)算出HSe=100%，HSp=96.5%，得到廈門市PRV血清學(xué)場(chǎng)真實(shí)流行率為71.8%（95% CI：62.3%～81.2%），個(gè)體真實(shí)流行率為59.0%（95% CI：57.3%～60.7%）。

2.2不同規(guī)模豬場(chǎng)分布情況

抽取的59個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)以中小規(guī)模為主，占86.4%（51/59），不同養(yǎng)殖規(guī)模的PRV gE抗體場(chǎng)陽性率均較高，經(jīng)c2檢驗(yàn)，差異不顯著（P=0.443）；而PRV gE抗體個(gè)體陽性率則隨著規(guī)模增大而升高，經(jīng)c2檢驗(yàn)，P＜0.001，說明不同養(yǎng)殖規(guī)模的PRV gE抗體個(gè)體陽性率之間差異極顯著，具體數(shù)據(jù)見表2。

2.3豬群分布情況

在59個(gè)豬場(chǎng)中，共抽取了4個(gè)生長(zhǎng)階段的豬群，其中以育肥豬樣品數(shù)量最大（73.9%），其次為生產(chǎn)母豬，保育豬和哺乳仔豬樣品數(shù)量較少。gE抗體個(gè)體陽性率最高的是保育豬，最低的是生產(chǎn)母豬，哺乳仔豬和育肥豬的gE抗體陽性率相近，具體數(shù)據(jù)見表3。

2.4風(fēng)險(xiǎn)因素單因素分析

對(duì)同安區(qū)的20個(gè)豬場(chǎng)和從翔安區(qū)抽樣檢測(cè)的豬場(chǎng)中隨機(jī)選取20個(gè)，共40個(gè)豬場(chǎng)，進(jìn)行了現(xiàn)場(chǎng)問卷調(diào)查。設(shè)計(jì)了17個(gè)問題，其中對(duì)“是否對(duì)病死豬進(jìn)行無害化處理”的回答完全一致。對(duì)剩下的16個(gè)假定風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行了單因素Logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)外購種豬是豬場(chǎng)感染PRV的主要危險(xiǎn)因素（表4）。

3　討論

本次調(diào)查結(jié)果顯示，廈門市豬群PR流行率較高，大部分豬場(chǎng)存在野毒感染，防控任務(wù)非常嚴(yán)峻，對(duì)廈門市開展豬群PR的控制和凈化帶來挑戰(zhàn)。從2個(gè)區(qū)的情況分析，同安區(qū)豬群PR的場(chǎng)流行率和個(gè)體流行率均低于翔安區(qū)，這符合實(shí)際情況。因?yàn)橥矃^(qū)較早開展轄區(qū)內(nèi)生豬的退養(yǎng)工作，保留下來的多是生產(chǎn)管理和防疫措施等相對(duì)比較規(guī)范的豬場(chǎng)，所以相比較翔安區(qū)的豬場(chǎng)，其PR流行率會(huì)低一些。調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，廈門市PRV gE抗體個(gè)體陽性率隨著規(guī)模增大而升高。一般情況下，由于中小規(guī)模豬場(chǎng)的生產(chǎn)管理和生物安全水平相對(duì)較差，感染疾病的概率會(huì)高于大規(guī)模豬場(chǎng)。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)中小規(guī)模豬場(chǎng)PR場(chǎng)陽性率反而低于大規(guī)模豬場(chǎng)，這可能是中小規(guī)模豬場(chǎng)的生產(chǎn)模式多為自繁自養(yǎng)型，而大規(guī)模豬場(chǎng)因引入種豬導(dǎo)致PRV感染率較高，風(fēng)險(xiǎn)因素分析結(jié)果證實(shí)了這一推斷。

風(fēng)險(xiǎn)因素分析發(fā)現(xiàn)外購種豬是廈門市豬場(chǎng)感染PRV的主要危險(xiǎn)因素。豬場(chǎng)在引進(jìn)PR隱性感染的種豬時(shí)，如果沒有按規(guī)定程序進(jìn)行嚴(yán)格地隔離和檢測(cè)，就極易導(dǎo)致PRV 在場(chǎng)內(nèi)的傳播和擴(kuò)散。這與劉華[12]等在2013年對(duì)安徽省規(guī)模種豬場(chǎng)PR的研究中發(fā)現(xiàn)購入種豬不經(jīng)檢測(cè)是場(chǎng)間傳播的風(fēng)險(xiǎn)因素一致。所以在豬群PR的控制和凈化工作中，一定要加強(qiáng)源頭管理，從源頭上杜絕PRV的傳播。

表1　廈門市豬偽狂犬病表觀流行率估計(jì)結(jié)果

表2　不同規(guī)模場(chǎng)豬偽狂犬病血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

表3　不同群豬gE抗體陽性率分布情況

目前，國內(nèi)外普遍采用PRV gE基因缺失疫苗對(duì)該病進(jìn)行免疫預(yù)防，配套使用PRV gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)血清中PRV野毒抗體進(jìn)行檢測(cè)，從而有效監(jiān)測(cè)豬群中PRV 野毒感染情況。但疫苗免疫接種并未從根本上消除隱性感染，尤其是2011年后新流行的PRV致病性有所增強(qiáng)。安同慶、徐秀玲[13-14]等研究表明，現(xiàn)有的商用疫苗Bartha K61株對(duì)其僅有50%的保護(hù)率，在考慮成本效益的前提下，短期內(nèi)無法通過檢測(cè)淘汰的方式開展豬群PR的控制和凈化，疫苗免疫接種仍然是當(dāng)前豬偽狂犬病的主要防控措施。因此，如何通過科學(xué)使用疫苗，以及執(zhí)行嚴(yán)格的生物安全措施來防控PR是迫在眉睫的任務(wù)。下一步將對(duì)各種商用疫苗的田間免疫效果和合理的免疫程序開展研究。

表4　豬偽狂犬病單因素風(fēng)險(xiǎn)因素分析

參考文獻(xiàn)：

[1] 彭金美，安同慶，趙鴻遠(yuǎn)，等. 豬偽狂犬病病毒新流行株的分離鑒定及抗原差異性分析[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，35 （1）：1-4.

[2] 鄒敏，楊旭兵，鄭輝，等. 2012-2013年我國部分地區(qū)豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查[J].中國動(dòng)物檢疫，2015，32（4）：1-5.

[3] 張顯浩，陳瑞愛，李冰，等. 2012 年-2013年我過集約化豬場(chǎng)豬偽狂犬病病毒感染情況的調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，36（3）：133-136.

[4] 王喜姣，熊文婕，曹國敏. 2010-2013年廣西規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病毒野毒株感染血清學(xué)調(diào)查[J]. 廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，46（3）：508-511.

[5] 夏爐明，孫泉云，盧軍，等. 2014年上海部分規(guī)模豬場(chǎng)母豬偽狂犬病感染情況調(diào)查[J]. 中國動(dòng)物檢疫，2015，32（7）：17-19.

[6] 占松鶴，劉華，周迎春，等. 安徽省規(guī)?；N豬場(chǎng)豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，36（3）：124-127.

[7] 沈朝建，王幼明. 獸醫(yī)流行病學(xué)調(diào)查與監(jiān)測(cè)抽樣技術(shù)手冊(cè)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2013：43.

[8] Michael T. Veterinary epidemiology[M].Third edition. UK：Blackwell Publishing，2007：323.

[9] Dohoo I，Martin W，Stryhn H. Veterinary Epidemiologic Research[M]. Charlottetown，Canada：AVC Inc，2003.

[10] 孫向東，劉擁軍，王幼明. 獸醫(yī)流行病學(xué)調(diào)查與監(jiān)測(cè)：抽樣技術(shù)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011：85-86.

[11] Morenkov O S， Fodor N， Fodor I. Indirect ELISAs based on recombinant and affi nity-purifi ed glycoprotein E of Aujeszky’s disease virus to differentiate between vaccinated and infected animals[J].Acta Vet Hungarica，1999，47（1）：137-150.

[12] 劉華，占松鶴，王靖飛，等. 2013年安徽省中小規(guī)模種豬場(chǎng)豬偽狂犬病群流行率及風(fēng)險(xiǎn)因素橫斷面研究[J]. 中國動(dòng)物檢疫，2014，31（11）：16-20.

[13] An T Q，Peng J M，Tian Z J，et a1.Pseudorabies Virus Variant in Bartha K61-Vaccinated pigs，China，2012[J].Emerging Infectious Diseases，2013，19（11）：1749-1755.

[14] Yu XL，Zhou Z，Hu D M，et a1. Pathogenic Pseudorabies Virus，China，2012[J]. Emerging Infectious Diseases，2014，20 （1）：102-104.

（責(zé)任編輯：朱迪國）

Sero-prevalence Estimation and Risk Factor Analysis of Swine Pseudorabies in Xiamen City of Fujian Province

Yang Tao1，He Yangzhou1，Li Weijuan2
（1. Xiamen Animal Disease Prevention and Control Center，Xiamen，F(xiàn)ujian 361009；
2. Tongan District Animal Health Inspection Institution of Xiamen City，Xiamen，F(xiàn)ujian 361100）

Abstract：Pseudorabies is a targeted swine disease being eliminated in China. In order to control swine pseudorabies effectively，an epidemiological investigation was conducted to estimate the prevalence and to identify key risk factors for infection in Xiamen.A total of 2 402 serum samples were tested by PRV gE-ELISA kits for testing gE antibody and 40 pig farms were investigated to know its management and immune state. The results showed that the true herd prevalence of pseudorabies was 71.8%（95% CI：62.3%～ 81.2%） and the true individual prevalence was 59.0%（95%CI：57.3% ～60.7%）. The risk factor analysis results indicated that introduction of breeding pigs was the major risk factor of pseudorabies infection in farms.

Key words：pseudorabies；prevalence rate；risk factor

中圖分類號(hào)：S851.3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1005-944X（2016）05-0008-04

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.05.003

基金項(xiàng)目：廈門市科技計(jì)劃項(xiàng)目（3502Z20154095）