陳兆芳，楊壽昌，陳春福，邱國(guó)院，蔣玲榮，武有聰*（.大理大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南大理　67000；2.大理衛(wèi)生學(xué)校，云南大理　67000）

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健康大學(xué)生肛門(mén)直腸酵母菌的分離和菌種分布

陳兆芳1，2，楊壽昌1，陳春福1，邱國(guó)院1，蔣玲榮1，武有聰1*
（1.大理大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南大理671000；2.大理衛(wèi)生學(xué)校，云南大理671000）

［摘要］目的：探索酵母菌在健康大學(xué)生肛門(mén)直腸的攜帶情況及菌種分布。方法：隨機(jī)抽取大理大學(xué)健康大學(xué)生217名，采集肛門(mén)直腸拭子接種于SDA培養(yǎng)基，根據(jù)菌落特點(diǎn)、形態(tài)染色和生化反應(yīng)綜合鑒定。結(jié)果：健康大學(xué)生肛門(mén)直腸有效標(biāo)本217份，分離到酵母菌72份，總體攜帶率為33.2%；其中男生標(biāo)本98份，分離出酵母菌19株，攜帶率為19.4%，女生標(biāo)本119份，分離出酵母菌53株，攜帶率為44.5%（χ2=15.332，P=0.00）。72株酵母菌中有白假絲酵母菌35株（占48.6%），光滑假絲酵母菌21株（占29.2%），熱帶假絲酵母菌13株（18.0%），克柔假絲酵母菌2株（占2.8%），其他酵母菌1株（占1.4%）。結(jié)論：健康大學(xué)生肛門(mén)直腸攜帶多種酵母菌，且以白假絲酵母菌為主。女生肛門(mén)直腸酵母菌攜帶率顯著高于男生。

［關(guān)鍵詞］酵母菌；肛門(mén)直腸；健康大學(xué)生

［DOI］10. 3969/j. issn. 1672-2345. 2016. 02. 020

酵母菌（俗稱(chēng)念珠菌）廣泛分布于人體皮膚粘膜、口腔、腸道、外陰陰道和肛門(mén)直腸等，為臨床上常見(jiàn)的條件致病性真菌。由各種原因?qū)е碌臋C(jī)體抵抗力下降、寄生部位發(fā)生改變或菌群失調(diào)而引起的真菌感染率越來(lái)越高〔1-2〕。酵母菌是構(gòu)成人體微生態(tài)環(huán)境的重要常住寄生菌。隨著年齡、激素水平和微環(huán)境因素的改變酵母菌的攜帶率和毒力因子的表達(dá)也會(huì)隨之改變〔3-4〕。據(jù)報(bào)道〔5-8〕，酵母菌在健康人群皮膚、口腔、腸道和外陰陰道的攜帶率分別為43.5%、8.8%、35.1%和29%，但尚未見(jiàn)健康人群肛門(mén)直腸酵母菌攜帶率的報(bào)道，也不清楚男性與女性肛門(mén)直腸酵母菌攜帶率之間的差異。本項(xiàng)目以我校健康大學(xué)生為對(duì)象，研究肛門(mén)直腸酵母菌的攜帶情況及其與性別的關(guān)系，對(duì)于臨床泌尿生殖道念珠菌病的防治具有一定意義。

1　材料與方法

1.1沙氏液體培養(yǎng)基的制備蛋白胨（Oxoid）5 g，葡萄糖10 g，蒸餾水500 mL，加熱溶解，調(diào)pH至6.0， 115℃滅菌15 min，分裝備用。

1.2改良SDA（Sabouraud dextrose agar）培養(yǎng)基的制備蛋白胨（Oxoid）10 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，加入蒸餾水1 000 mL，滅菌后適當(dāng)冷卻，加入青霉素（100 mg/mL）和氯霉素（50 mg/mL），分裝備用。

1.3標(biāo)本采集隨機(jī)抽取大理大學(xué)在讀健康大學(xué)生217名（男生98名，女生119名），年齡18～21歲，排除以下情況：長(zhǎng)期服用抗生素、抗真菌藥物及免疫抑制劑者，免疫缺陷者，HIV陽(yáng)性者，肛周有感染者、有痔者和消化系統(tǒng)癥狀者。用無(wú)菌棉簽蘸取生理鹽水，在肛周來(lái)回擦拭2～3圈，將棉簽伸入肛門(mén)內(nèi)，轉(zhuǎn)動(dòng)棉簽，之后將棉簽投入沙氏液體培養(yǎng)基內(nèi)，帶回實(shí)驗(yàn)室分離培養(yǎng)。

1.4酵母菌鑒定標(biāo)本在改良SDA培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)1～2周，每天觀察，對(duì)可疑酵母菌進(jìn)行如下鑒定：①菌落觀察；②革蘭染色；③芽管形成試驗(yàn)。在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)加入0.2 mL健康人血清，取少量酵母菌菌落，充分混勻，37℃孵育2～3 h，制成壓滴片觀察；④厚膜孢子形成試驗(yàn)：可疑菌接種于玉米瓊脂培養(yǎng)基，加蓋無(wú)菌玻片，28℃培養(yǎng)3 d后觀察；⑤科瑪嘉培養(yǎng)基鑒定：可疑菌接種于科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（CHROM agar，購(gòu)自鄭州博賽科技有限責(zé)任公司），37℃培養(yǎng)24 h，根據(jù)菌落顏色確定菌種。見(jiàn)表1。

表1　酵母菌在科瑪嘉顯色培養(yǎng)基上的菌落顏色

2　結(jié)果

2.1健康大學(xué)生肛門(mén)直腸酵母菌攜帶率為調(diào)查健康大學(xué)生肛門(mén)直腸酵母菌的攜帶情況，分析男生與女生之間酵母菌攜帶率的差異，共采集標(biāo)本217份，分離出72株酵母菌，總攜帶率為33.2%（72/217）。其中，男生標(biāo)本98份，分離出19株酵母菌，攜帶率為19.4%；女生標(biāo)本119份，分離出酵母菌53株，攜帶率為44.5%，女生肛門(mén)直腸酵母菌攜帶率顯著高于男生。見(jiàn)表2。

表2　健康大學(xué)生肛門(mén)直腸酵母菌攜帶率

2.2健康大學(xué)生肛門(mén)直腸酵母菌的菌種分布在72株酵母菌中白假絲酵母菌最多（35株，占48.6%），其次是光滑假絲酵母菌（21株，占29.2%）和熱帶假絲酵母菌（13株，占18.0%），克柔假絲酵母菌和其他酵母菌分別為2株（2.8%）和1株（1.4%）。見(jiàn)表3。

表3　72株健康大學(xué)生肛門(mén)直腸酵母菌菌種分布

3　討論

酵母菌是常見(jiàn)的條件致病性真菌，廣泛分布于健康人體的皮膚、口腔、腸道和外陰陰道等。隨著年齡的增加和藥物（如廣譜抗生素、免疫抑制劑）的長(zhǎng)期使用，酵母菌引起的感染也越來(lái)越多〔1〕。目前尚不清楚健康人群肛門(mén)直腸酵母菌的攜帶率和菌種分布，男性與女性肛門(mén)直腸酵母菌攜帶率的差異。本文以健康大學(xué)生為研究對(duì)象，分析該組人群肛門(mén)直腸酵母菌的微生物學(xué)特征和攜帶情況，對(duì)酵母菌病的防治和肛門(mén)直腸局部微生態(tài)學(xué)研究具有重要意義。

本次調(diào)查中發(fā)現(xiàn)健康大學(xué)生肛門(mén)直腸的酵母菌攜帶率為33.2%，與文獻(xiàn)報(bào)道的健康人群消化道酵母菌攜帶率33.3%接近〔9〕。其中，女性健康大學(xué)生肛門(mén)直腸酵母攜帶率為44.5%，顯著高于男性大學(xué)生的攜帶率（19.4%），這可能與女性易患泌尿生殖道念珠菌病有關(guān)〔10-11〕。白假絲酵母菌是念珠菌屬中最常見(jiàn)的、致病性較強(qiáng)的菌株〔12-13〕。白麗等〔5，14〕研究了健康人群口腔和女性生殖道的酵母菌攜帶情況，發(fā)現(xiàn)酵母菌在上述兩個(gè)部位的攜帶率分別為8.8%和19.5%，其中白假絲酵母菌的構(gòu)成比分別為43%和50%。本研究中分離出72株酵母菌，以白色假絲酵母菌為主（占48.6%）；在非白假絲酵母菌中，最多的是光滑假絲酵母菌（占29.2%），與上述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致。此外，本研究中發(fā)現(xiàn)部分健康人群肛門(mén)直腸同時(shí)攜帶兩種不同的酵母菌，有5份標(biāo)本分離出兩種不同酵母菌，均為白假絲酵母菌和光滑假絲酵母菌的混合共存，混合攜帶率為2.3%（5/217），明顯低于周菊芬等〔15〕報(bào)道的健康人群口腔酵母菌混合攜帶率（11.3%），這可能與菌種分離的部位、宿主遺傳背景和標(biāo)本量不同有關(guān)。

（感謝白麗教授對(duì)本文的指導(dǎo)！）

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（責(zé)任編輯董杰）

Isolation and Species Distribution of the Anorectal Yeast in Healthy College Students

Chen Zhaofang1,2, Yang Shouchang1, Chen Chunfu1, Qiu Guoyuan1, Jiang Lingrong1, Wu Youcong1*
（1. Pre-clinical College, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China; 2. Dali Medical School, Dali, Yunnan 671000, China）

〔Abstract〕Objective: To explore the carrier status and species distribution of yeast in anus and rectum of healthy college students. Methods: 217 cotton swabs collected randomly from the anus and rectum of healthy college students were inoculated on the modified Sabouraud Dextrose Agar（SDA）, Candida species were identified based on the colony characteristics, Gram stain, and biochemical reactions. Results: 72 Candida species were isolated from 217 specimens, the overall carrier rate of yeast in the anus and rectum of healthy college student was 33.2%（72/217）; of them, 19 strains were isolated from 98 male specimens, the carrier rate was 19.4%, and 53 strains were isolated from 119 female specimens, the carrier rate was 44.5%（χ2=15.332, P=0.00）. Among 72 Candida species, there were 35 strains of C. albicans（48.6%）, 21 strains of C. glabrata（29.2%）, 13 strains of C. tropicalis（18.1%）, 2 strains of C. krusei（2.8%）, 1 strain of other Candida species（1.3%）. Conclusion: There were various conditioned pathogenic yeasts in the anus and rectum of healthy college students, and C. albicans was the major one. The carrier rate of female students was significantly higher than that of the male students.

〔Key words〕yeast; anus and rectum; healthy college students

［中圖分類(lèi)號(hào)］R379.4

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A

［文章編號(hào)］1672-2345（2016）02-0068-03

［基金項(xiàng)目］云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目（2014FB156）

［收稿日期］2015-08-26

［作者簡(jiǎn)介］陳兆芳，講師，主要從事醫(yī)學(xué)微生物學(xué)及病理學(xué)教學(xué)研究.

*通信作者：武有聰，副教授，博士．