陸紹花　李　婭

1.云南省廣南縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南　廣南　663300;2.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南　昆明　650032

?

酶聯(lián)免疫法測(cè)抗-HCV-IgG的S/CO比值與HCV-RNA及肝功能的相關(guān)性研究

陸紹花1李婭2

1.云南省廣南縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南廣南663300;2.昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南昆明650032

【摘要】目的：探討酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)抗-HCV-IgG水平與實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HCV-RNA載量及肝功能ALT、AST、TBIL之間的相關(guān)性。方法：選取酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)抗-HCV-IgG 有反應(yīng)的標(biāo)本186例,使用熒光定量PCR檢測(cè)HCV-RNA、生化分析儀檢測(cè)ALT、AST等肝功能指標(biāo)。結(jié)果：熒光定量PCR檢測(cè)的HCV-RNA陽(yáng)性140例，陰性46例，陽(yáng)性率75.27%。HCV-RNA定量檢測(cè)陽(yáng)性(HCV-RNA載量>1.0×103IU/ml)的140例患者ALT陽(yáng)性率達(dá)65%，AST陽(yáng)性率達(dá)57.85%, TBIL陽(yáng)性率達(dá)37.14%；46例HCV-RNA定量檢測(cè)陰性患者ALT陽(yáng)性率達(dá)36.96%，AST陽(yáng)性率達(dá)36.96%, TBIL異常率達(dá)39.13%。HCV-RNA定量檢測(cè)陽(yáng)性組患者ALT、AST陽(yáng)性率明顯高于陰性組(P<0.05)。HCV-RNA 陽(yáng)性率與ELISA 法的S/CO 值呈正相關(guān)(R=0.40,P<0.05)。結(jié)論：HCV-RNA 陽(yáng)性率與ELISA法的S/CO 比值呈正相關(guān)，可根據(jù)S/CO 比值預(yù)測(cè)HCV-RNA 的結(jié)果，進(jìn)而初步預(yù)測(cè)患者肝功能狀況，為丙肝診斷和治療提供可靠依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】抗-HCV-IgG ；酶聯(lián)免疫法；聚合酶鏈反應(yīng)；肝功能

丙型肝炎病毒(HCV)感染是一個(gè)世界性的健康問(wèn)題，主要通過(guò)血液系統(tǒng)傳播。WHO估計(jì)全世界HCV 感染率約為3.0%，大約有1.7億人被感染，而我國(guó)HCV 感染者約4000 萬(wàn)至6000 萬(wàn)人[1]，60%～80%HCV 感染者會(huì)出現(xiàn)慢性化發(fā)展，若不及時(shí)診治，容易發(fā)展為肝硬化、肝癌[2]，因此，及時(shí)檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)，及時(shí)開(kāi)展診斷和治療至關(guān)重要。本文對(duì)ELISA法檢測(cè)抗-HCV-IgG有反應(yīng)的標(biāo)本進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)，旨在分析HCV-RNA 病毒載量、肝功能指標(biāo)與抗-HCV-IgG的關(guān)聯(lián)性，為指導(dǎo)臨床工作提供支持。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年11月至2014年11月昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院門(mén)診及住院HCV患者186例，其中男116例，女70例，年齡0～88歲，平均年齡(49.50±8.95)歲。所有患者符合HCV診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。排除其他類(lèi)型肝炎患者，及存在其他可引起肝功能異常疾病的患者。1.2方法在無(wú)菌條件下抽取患者靜脈血5ml，使用TECAN全自動(dòng)酶免一體機(jī)全程檢測(cè)抗-HCV-IgG水平，當(dāng)樣品OD值/CO值(即S/CO值) ≥0.14 為抗-HCV-IgG有反應(yīng)；使用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)進(jìn)行HCV-RNA檢測(cè)，HCV-RNA 定量檢測(cè)試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，儀器為ABI7300，每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)置臨界陽(yáng)性、陰性對(duì)照，定量標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控，HCV-RNA檢測(cè)的線性反應(yīng)范圍為1.0×103～5.0×107IU/ml，檢測(cè)下限為1.0×103IU/ml。使用羅氏全自動(dòng)生化分析儀及原裝配套校準(zhǔn)物、質(zhì)控品和試劑檢測(cè)肝功能，其中：ALT>35 IU/L為異常，ASTT>40IU/L為異常，TBIL>17.1umol/L為異常。操作人員嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行上述檢測(cè)。

2結(jié)果

2.1熒光定量PCR 檢測(cè)結(jié)果186 例ELISA 法-HCV-IgG檢測(cè)有反應(yīng)的標(biāo)本中，共檢測(cè)出HCV-RNA 陽(yáng)性標(biāo)本140 例，陰性46 例，陽(yáng)性率為75.27 %，其中：116 例男性患者檢出陽(yáng)性92例，陽(yáng)性率79.31%，70 例女性患者檢出陽(yáng)性48例，陽(yáng)性率為68.57%，男女之間的HCV-RNA 陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1　男女患者HCV-RNA陽(yáng)性結(jié)果比較　(例)

2.2抗-HCV-IgG不同S/CO 值區(qū)間與HCV-RNA陽(yáng)性率的關(guān)系ELISA 法測(cè)抗-HCV-IgG初篩試驗(yàn)S/CO 比值分別在0.140-2.000、2.001-3.000、3.001-4.000、>4.001 區(qū)間時(shí)，HCV-RNA 陽(yáng)性例數(shù)分別為11(64.71%)、24(68.57%)、21(70.00%)、84 (100.00%)，抗-HCV-IgG的S/CO 不同區(qū)間的HCV-RNA 陽(yáng)性率比較，差異明顯具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HCV-RNA 陽(yáng)性率與ELISA 法的S/CO 值呈正相關(guān)(R=0.40,P<0.05)。詳見(jiàn)表2。另外，有20例S/CO 值>4.000，但是HCV-RNA 低于下限值，經(jīng)查閱病歷后證實(shí)該部分患者均使用干擾素治療后導(dǎo)致病毒載量降低到HCV-RNA檢測(cè)下限以下。繼續(xù)對(duì)30例S/CO值在3.001-4.000區(qū)間的樣本進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，ELISA 法檢測(cè)抗-HCV-IgG初篩試驗(yàn)S/CO 比值>3.701的患者HCV-RNA的陽(yáng)性率為100%。詳見(jiàn)表3。

表2　抗-HCV-IgG不同S/CO比值區(qū)間與HCV-RNA陽(yáng)性率比較　[例(%)]

注：與前3個(gè)區(qū)間陽(yáng)性率比較，★P<0.05。

表3　30例S/CO值在3.001-4.000區(qū)間與HCV-RNA陰陽(yáng)性比較

2.3HCV-RNA定量檢測(cè)結(jié)果與肝功能相關(guān)分析對(duì)186例患者進(jìn)行肝功能檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，HCV-RNA定量檢測(cè)陽(yáng)性(HCV-RNA載量>1.0×103IU/ml)的140例患者ALT陽(yáng)性率達(dá)65%，AST陽(yáng)性率達(dá)57.85%, TBIL陽(yáng)性率達(dá)37.14%；46例HCV-RNA定量檢測(cè)陰性患者ALT陽(yáng)性率達(dá)36.96%，AST陽(yáng)性率達(dá)36.96%, TBIL陽(yáng)性率達(dá)39.13%。兩組比較，HCV-RNA定量檢測(cè)陽(yáng)性組患者ALT、AST陽(yáng)性率明顯高于陰性組，差異明顯有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表4。

表4　HCV-RNA定量檢測(cè)結(jié)果與肝功能相關(guān)性　[例(%)]

注：與陰性組比較，*P<0.05。

3討論

中國(guó)HCV 的感染率約為3.2 %[4]，HCV 感染后可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥，是造成肝硬化和肝癌的主要因素[5]，且治療費(fèi)用高，療程較長(zhǎng)，但療效卻不理想，現(xiàn)階段尚無(wú)特異性疫苗對(duì)其進(jìn)行有效防治，主要依靠檢測(cè)抗-HCV-IgG 和HCV-RNA來(lái)診斷[6]。

目前對(duì)于HCV感染的臨床診斷仍以檢測(cè)抗-HCV-IgG為主，ELISA法因其靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)近年來(lái)已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外各大型醫(yī)院檢測(cè)抗-HCV-IgG的主要檢測(cè)方法[7]。但抗-HCV-IgG 不是保護(hù)性抗體，其陽(yáng)性?xún)H表示患者既往感染或現(xiàn)癥感染[8]。HCV-RNA陽(yáng)性是HCV感染的直接依據(jù)，已成為診斷HCV 感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”，可以作為臨床選擇抗病毒治療和監(jiān)測(cè)療效的依據(jù)[9]。但由于PCR操作復(fù)雜，受較多影響因素制約，很多大型醫(yī)院未開(kāi)展。

本文研究發(fā)現(xiàn)HCV-RNA 陽(yáng)性的比例隨著ELISA 法抗-HCV-IgG篩檢陽(yáng)性的S/CO 值的升高而增加。對(duì)抗-HCV -IgG篩查有反應(yīng)的標(biāo)本，目前國(guó)內(nèi)大多醫(yī)院沒(méi)有開(kāi)展HCV-RNA確診試驗(yàn)便報(bào)告陽(yáng)性結(jié)果，常引起不必要的糾紛[10]。本研究發(fā)現(xiàn)S/CO>3.701的患者HCV-RNA的陽(yáng)性率為100.00%，因此，建議ELISA 法抗-HCV-IgG S/CO>3.701者，直接檢測(cè)HCV-RNA，檢測(cè)是否有病毒復(fù)制及決定是否進(jìn)行抗病毒治療。根據(jù)ELISA 法篩查抗-HCV-IgG結(jié)果的S/CO 值預(yù)測(cè)HCV-RNA 結(jié)果對(duì)臨床醫(yī)生給患者合理解釋檢測(cè)結(jié)果和進(jìn)一步的檢查建議有重要的指導(dǎo)意義。但值得注意的是，本研究發(fā)現(xiàn)20例S/CO 值>4.000的患者，其HCV-RNA載量低于檢測(cè)下限值，提示干擾素能有效抑制患者血清中HCV的復(fù)制，降低血清轉(zhuǎn)氨酶，促進(jìn)肝細(xì)胞的修復(fù)，容易導(dǎo)致CR檢測(cè)的HCV-RNA檢測(cè)假陽(yáng)性結(jié)果，進(jìn)行HCV診斷過(guò)程中需要了解患者干擾素服用史，避免漏診、誤診[11]。

ALT 是臨床最常規(guī)的肝功能檢查項(xiàng)目，當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，肝細(xì)胞膜通透性增加[12]。本研究顯示ALT、AST在HCV-RNA陽(yáng)性時(shí)存在明顯異常(P<0.05),證實(shí)血清中HCV-RNA水平高，提示病毒在肝臟中大量復(fù)制，可能有持續(xù)性肝臟損傷的危險(xiǎn)。就其原因主要在于丙型肝炎發(fā)病過(guò)程中肝炎病毒感染使機(jī)體免疫系統(tǒng)活化，這些活化的細(xì)胞可與因肝炎病毒感染而改變的肝細(xì)胞膜成分發(fā)生免疫應(yīng)答，從而造成肝功能的衰退以及肝細(xì)胞的壞死[13]。

綜上所述，HCV-RNA 陽(yáng)性率與ELISA法的S/CO 比值呈正相關(guān)，可根據(jù)S/CO 比值預(yù)測(cè)HCV-RNA 的結(jié)果，進(jìn)而初步預(yù)測(cè)患者肝功能狀況，為丙肝患者的診斷和治療提供可靠依據(jù)。兩種檢測(cè)方法聯(lián)合使用，可進(jìn)一步完善診斷、評(píng)價(jià)HCV治療效果，具有重要的臨床使用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1]劉義慶，鄒建文,田文君，等.化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)抗-HCV 抗體與HCV-RNA 的關(guān)聯(lián)研究[J]，國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,35(13):1749-1750.

[2]孔文麗,楊以良,徐洪芹，等.慢性丙型肝炎患者抗病毒治療中肝功能與病毒學(xué)應(yīng)答的關(guān)系[J]. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào),2016,1(1):99-103.

[3]陳紅松,竇曉光,段鐘平，等. 丙型肝炎防治指南[J]. 臨床肝膽病,2015,24(15): 3797-3801.

[4]黃秀瓊，吳英．110 例丙肝患者HCV-RNA 載量及抗-HCV 與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性研究[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012,33(15):1809-1810.

[5]陳新月,任姍.丙型肝炎防治指南(2015年更新版)解讀[J]. 北京醫(yī)學(xué),2015,15(12): 1186-1188.

[6]方偉,吳虹. 慢性丙型肝炎患者HCV-RNA載量與抗-HCV及肝功指標(biāo)的相關(guān)性研究[J]. 中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育,2015,31(27): 40-42.

[7]王江南,陳秀榮,李健. ELISA法檢測(cè)抗-HCV-IgG抗體以及FQ-PCR檢測(cè)血清HCV-RNA在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 廣東醫(yī)學(xué),2015,24(16): 3797-3801.

[8]周永玲.HCV檢測(cè)中使用膠體金法與酶聯(lián)免疫反應(yīng)的比較[J]. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2015,99(35): 154-157.

[9]楊平,畢永春,胡偉，等. 丙型肝炎病毒抗體聯(lián)合核酸定量檢測(cè)對(duì)丙型肝炎患者的早期診斷價(jià)值研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2014,11(8):1020-1022.

[10]陳暖,張俏忻,程碧珍. 提高丙型肝炎診斷準(zhǔn)確性的檢測(cè)方法[J]. 中國(guó)校醫(yī),2015,10(6): 431-435.

[11]時(shí)雪真,陳利民. 丙型肝炎病毒耐受干擾素的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)輸血,2015,11(7): 1418-1421.

[12]邵芳. HCV抗原、HCV抗體及HCV-RNA聯(lián)合檢測(cè)與ALT的相關(guān)性及其臨床意義[J]. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化,2014，5(2): 80-82.

[13]孟憲春,王萬(wàn)海,常謙，等. 肝功能主要指標(biāo)對(duì)HCV抗體檢測(cè)陽(yáng)性者診斷意義的評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2015,11(9): 1904-1907.

通信作者：李婭，碩士，昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科副主任技師，E-mail:13708710060@139.com

【中圖分類(lèi)號(hào)】R575

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)09-0082-03

(收稿日期：2016.03.16)