劉翠華　昌　暢

南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥材科，廣東　廣州　510515

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HPLC法鑒別黃芪與紅芪中黃芪甲苷含量的研究

劉翠華昌暢

南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥材科，廣東廣州510515

【摘要】目的：探討采用高效液相色譜法鑒別黃芪與紅芪中黃芪甲苷含量的價(jià)值。方法：根據(jù)高效液相色譜法，色譜柱(150 mm × 4.4mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(32∶68)；流速1 ml/min；柱溫：25℃。分別對(duì)黃芪與紅芪中的黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：在2.024～10.120μg范圍內(nèi)，黃芪甲苷的線性關(guān)系良好。結(jié)論：該方法具有準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可重復(fù)的特點(diǎn)。黃芪中明顯含有黃芪甲苷，而紅芪中黃芪甲苷的含量十分微少，可提供此法鑒別黃芪與紅芪。

【關(guān)鍵詞】黃芪；紅芪；黃芪甲苷； 高效液相色譜法

黃芪是臨床常用的補(bǔ)益藥，其味甘，性溫，具有利尿排毒、斂瘡生肌、補(bǔ)氣固表的功效。研究發(fā)現(xiàn)，黃芪所含的皂苷具有提高免疫的功能，而皂苷中的主要有效成分為黃芪甲苷，并具有降壓、消炎鎮(zhèn)痛的活性。紅芪具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、斂瘡生肌的功效。與黃芪相比，紅芪的抗菌、降壓作用較強(qiáng)。研究采用效液相色譜法對(duì)黃芪與紅芪中黃芪甲苷進(jìn)行鑒別，進(jìn)而為黃芪、紅芪中藥制劑的質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器Agilent 1260型高效液相色譜儀(蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技有限公司)；ABS135-S型分析天平(美國(guó)梅特勒-托利多公司)。

1.2材料黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所)；紅芪(購(gòu)自鄭州藥材市場(chǎng))；黃芪(購(gòu)自甘肅蘭州藥材市場(chǎng))；高純氮?dú)?純度為99.999%，濟(jì)南堯天儀器有限公司)。甲醇、乙醇為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2方法

2.1色譜條件日本島津C18色譜柱(150mm × 4.4mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-水(32∶68)；流速1ml/min；柱溫：25℃。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于4000。見(jiàn)圖1。

圖1　黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)液色譜圖

2.2供試品溶液的制備精密稱取黃芪/紅芪粉末4.0g，放入索氏提取器，加入甲醇40m1，冷浸后再加30 ml甲醇。然后80℃回流4個(gè)小時(shí)，過(guò)濾，濃縮干燥，提取物加l0 ml水輕微加熱進(jìn)行溶解。用水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，每次40 ml，共4次。合并正丁醇液并洗滌，洗滌用氨試液進(jìn)行，每次用40 ml，共洗滌2次，棄去氨液。蒸干正丁醇液后在殘?jiān)屑尤胨?ml。使用50ml水洗脫后棄去水液，再用40%乙醇洗脫，乙醇用量為30m1，同樣去除乙醇洗脫液。隨后用70%乙醇80ml繼續(xù)進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，蒸干，甲醇溶解后放進(jìn)5ml量瓶輕搖至均勻。

2.3對(duì)照品溶液制備精密稱取5.0mg對(duì)照品黃芪甲苷放入l0 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻得對(duì)照品溶液。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性關(guān)系精密吸取對(duì)照品溶液4、8、12、16、20μl測(cè)定，以黃芪甲苷含量為橫坐標(biāo)，峰面積均值為縱坐，得回歸方程：Y=1.294×10-6X+0.02812(R=0.9994)。表明黃芪甲苷在2.024～10.120μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取黃芪甲苷對(duì)照品溶液，分別在0、 3 、6、12、18、24h測(cè)定其峰面積。結(jié)果該溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6精密度實(shí)驗(yàn)取黃芪甲苷對(duì)照品溶液20μl，平行5次進(jìn)樣。結(jié)果峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.02%(n=5)，表明儀器的精密度較好。

2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)稱取黃芪藥材5.0g，平行5份。按照“2.2”的方法進(jìn)行操作，并測(cè)定峰面積。結(jié)果樣品5次所得的黃芪甲苷含量一致，說(shuō)明方法具有良好的重復(fù)性。

2.5回收率實(shí)驗(yàn)稱取黃芪藥材5.0g，平行5份，每份加入黃芪甲苷3.0mg，按照“2.2”的方法操作。平均回收率為98.2%，RSD=0.87%。說(shuō)明樣品的回收率較好。

2.6樣品測(cè)定取黃芪、紅芪中藥飲品，按照“2.2”方法操作，按照“2.1”的條件測(cè)定黃芪甲苷的含量。結(jié)果：黃芪、黃芪中均含有黃芪甲苷，與黃芪相比，紅芪中黃芪甲苷的含量微小。見(jiàn)圖2、圖3。

圖2　黃芪中藥飲品色譜圖

圖3　紅芪中藥飲品色譜圖

3討論

黃芪是一種常用的補(bǔ)氣藥，含有皂苷類、黃酮類、多糖類、氨基酸類等多種化學(xué)成分。黃芪甲苷是黃芪的主要活性成分，具有抗氧化、降壓、消腫止痛、提高免疫功效等活性，目前作為監(jiān)控黃芪藥材質(zhì)量的指標(biāo)之一。薄層掃描法、高效液相色譜法均為測(cè)定黃芪甲苷含量的常用方法，但薄層掃描法的操作不便，測(cè)定結(jié)果的偏差較大，且紫外線檢測(cè)器的靈敏度較低，受雜質(zhì)的干擾較大、信噪比較低，回收率不穩(wěn)定。研究采用高效液相色譜法對(duì)黃芪與紅芪中的黃芪甲苷成分進(jìn)行了檢測(cè)，該方法具有較高的靈敏度，簡(jiǎn)單而準(zhǔn)確，無(wú)干擾，重復(fù)性較高，適用于黃芪甲苷的含量測(cè)定。此外，研究發(fā)現(xiàn)，黃芪、黃芪中均含有黃芪甲苷，但與黃芪相比，紅芪中黃芪甲苷的含量微小，這一特點(diǎn)可作為區(qū)分紅芪和黃芪飲品的判斷指標(biāo)。

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【中圖分類號(hào)】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)09-0024-02

(收稿日期：2016.03.04)