李同心 何瑛 周剛 陳耑耑 魏成麗 劉敏 黃忠民 王靜 鐘敏 羅明 丁顯平

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·論著·

全血γ-干擾素釋放試驗(yàn)在結(jié)核病輔助診斷中的價(jià)值

李同心 何瑛 周剛 陳耑耑 魏成麗 劉敏 黃忠民 王靜 鐘敏 羅明 丁顯平

目的 評(píng)價(jià)全血γ-干擾素釋放試驗(yàn)(interferon gamma release assay,IGRA)- QuantiFERON@-TB Gold IT試驗(yàn)試劑盒在結(jié)核病輔助診斷中的價(jià)值。方法 搜集重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心結(jié)核科和感染科2014年7月1日至2015年12月31日期間同步進(jìn)行痰液抗酸桿菌涂片、快速培養(yǎng)(BACTECTMMGITTM960)及采用IGRA測(cè)定外周血結(jié)核分枝桿菌抗原特異性γ-干擾素(IFN-γ)應(yīng)答水平的1440例患者臨床資料，采用卡方檢驗(yàn)分析不同類別患者間不同檢測(cè)技術(shù)陽性率的差異，以P<0．05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 與臨床診斷結(jié)果相比，IGRA檢測(cè)全血診斷結(jié)核病的敏感度為77.6%(716/923)，特異度為69.9%(158/226)。與痰涂片[肺結(jié)核、肺外結(jié)核、HIV感染或AIDS患者并發(fā)肺結(jié)核的陽性率分別為28.5%(226/792)、 5.3%(7/131)、 6.1%(6/98)]、液體培養(yǎng)[肺結(jié)核、肺外結(jié)核、HIV感染或AIDS患者并發(fā)肺結(jié)核的陽性率分別為40.9%(324/792)、13.0%(17/131)、11.2%(11/98)]檢測(cè)結(jié)果相比，IGRA診斷肺結(jié)核[77.0%(610/792)]、肺外結(jié)核[80.9%(106/131)]和HIV感染或AIDS患者并發(fā)肺結(jié)核[50.0%(49/98)]的陽性率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(與痰涂片比較，χ2值分別為373.52、152.51、46.73,P值均<0.01；與液體培養(yǎng)比較，χ2值分別為212.03、121.38、34.68,P值均<0.01)。結(jié)論 IGRA檢測(cè)快速便捷，有著較高的敏感度。IGRA對(duì)結(jié)核病輔助診斷有一定的價(jià)值，尤其對(duì)肺結(jié)核、肺外結(jié)核，以及HIV感染或AIDS并發(fā)肺結(jié)核患者的診斷有一定意義。

結(jié)核； 分枝桿菌, 結(jié)核； 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)； 分子診斷技術(shù)； 評(píng)價(jià)研究

結(jié)核病是一種長(zhǎng)期危害人類身體健康的慢性傳染病，是我國(guó)防治政策規(guī)定的重大傳染病之一?？焖佟?zhǔn)確地診斷結(jié)核病一直是臨床檢測(cè)上的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。雖然細(xì)菌學(xué)診斷結(jié)核病是臨床診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但也面臨諸多問題；比如，抗酸桿菌涂片檢測(cè)陽性率低，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)周期長(zhǎng)，組織病理學(xué)檢查多為有創(chuàng)性等。我國(guó)菌陰肺結(jié)核約占所有肺結(jié)核患者的60%～70%[1]，肺外結(jié)核病約占結(jié)核病的5%～30%[2]，因此亟需一種更快速、更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室診斷方法輔助臨床診斷。

γ-干擾素釋放試驗(yàn)(interferon gamma release assay,IGRA)是近20多年來結(jié)核分枝桿菌感染免疫診斷的最重要的進(jìn)展之一，目前作為一種新的輔助診斷結(jié)核分枝桿菌感染的免疫學(xué)方法，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床并得到認(rèn)可。IGRA主要原理是檢測(cè)全血和(或)外周血單核細(xì)胞在結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激下釋放γ-干擾素的水平，判斷受試者是否感染結(jié)核，目前主要應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(enzyme linked immunospot assay,ELISPOT)[3-5]或酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immune sorbent assay,ELISA)[6-7]來檢測(cè)。相對(duì)結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)(tuberculin skin test,TST)而言,IGRA通過檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激下釋放γ-干擾素(IFN-γ)的水平，從而有效地區(qū)分結(jié)核分枝桿菌感染和BCG疫苗接種引起的免疫應(yīng)答[6-7]。目前，被美國(guó)和中國(guó)FDA批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床的較為成熟的IGRA試驗(yàn)方法主要有兩種，一種是QuantiFERON@-TB Gold IT試驗(yàn)(QFT-GIT),另一種是結(jié)核感染T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)。

本研究采用QFT-GIT對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染的患者和HIV感染并發(fā)結(jié)核分枝桿菌感染的患者進(jìn)行檢測(cè)，探討IGRA在結(jié)核病輔助診斷中的價(jià)值,結(jié)果報(bào)告如下。

資料和方法

一、研究對(duì)象、試驗(yàn)儀器及試劑

1.患者來源：收集重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心結(jié)核科和感染科2014年7月1日至2015年12月31日期間同步進(jìn)行痰液抗酸桿菌涂片、快速培養(yǎng)(BACTECTMMGITTM960)及采用IGRA測(cè)定外周血結(jié)核分枝桿菌抗原特異性IFN-γ應(yīng)答水平的1440例患者，其中男959例，女481例，年齡范圍10～85歲，平均年齡(43.4±17.5)歲。110例HIV感染或AIDS并發(fā)肺結(jié)核的患者臨床血液檢測(cè)HIV抗體為陽性,并經(jīng)重慶市HIV確證實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。所有肺結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)肺病診斷均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)制定的肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]和NTM肺病診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，所有患者(無嚴(yán)重的肝腎功能衰竭史，結(jié)核病患者無免疫系統(tǒng)疾患)血樣采集均在入院初期、使用免疫抑制劑或增強(qiáng)劑之前。

2.主要儀器及試劑來源：本研究使用的抗酸染色液購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。FACS Calibur流式細(xì)胞儀、CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)管和BACTECTMMGITTM960分枝桿菌培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)、PAN-TA雜菌抑制劑、分枝桿菌培養(yǎng)管(MGIT)及營(yíng)養(yǎng)添加劑(OADC)均來源于美國(guó)BD公司。噻吩-2-羧酸肼(TCH)和對(duì)硝基苯甲酸(PNB)羅氏培養(yǎng)基購自珠海銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司。結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白MPB64抗原檢測(cè)試劑盒(膠體金法)購自杭州創(chuàng)新生物檢控技術(shù)有限公司。QFT-GIT檢測(cè)試劑盒和專業(yè)分析判讀軟件均來源于Cellestis Limited制造商。GF-M3000型酶標(biāo)儀由山東彩虹儀器有限公司生產(chǎn)。PW-960型自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)由深圳市匯松科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。

3. 研究對(duì)象資料來源：醫(yī)院信息系統(tǒng)(hospital information system，HIS；為上海瑞美電腦科技有限公司生產(chǎn))和實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)(laboratory information system，LIS；為上海瑞美電腦科技有限公司生產(chǎn))。

二、方法

1.標(biāo)本采集：痰液留取參照中國(guó)防癆協(xié)會(huì)《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》[10]，無痰患者可采取霧化引痰或通過纖維支氣管鏡取痰，痰液不合格者，需進(jìn)一步指導(dǎo)后重新留取標(biāo)本送檢。

2.痰涂片鏡檢和分離培養(yǎng)：痰涂片按照《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》的要求處理[11]，采用萋-尼染色法鏡檢。痰液培養(yǎng)前處理按照《分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊(cè)》[12]中關(guān)于堿處理-中和離心沉淀法的要求進(jìn)行，并按照BACTECTMMGITTM960分枝桿菌痰培養(yǎng)操作說明書將前處理后的沉淀物接種于MGIT。

3.菌種鑒定：所有患者分枝桿菌培養(yǎng)產(chǎn)物均采用如下鑒定：(1)參照中國(guó)防癆協(xié)會(huì)《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》[10]，使用TCH和PNB進(jìn)行分枝桿菌菌種初步鑒定試驗(yàn)，TCH、PNB藥物終濃度分別為5 μg/ml、500 μg/ml。對(duì)照管陽性、TCH陽性或陰性、PNB陰性的菌株為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群，對(duì)照管陽性、TCH陽性、PNB陽性或陰性的菌株為非結(jié)核分枝桿菌。對(duì)照管陰性，即不生長(zhǎng)，需要重做。(2)膠體金法定性檢測(cè)培養(yǎng)陽性菌液中的結(jié)核分枝桿菌分泌蛋白MPB64抗原。以上兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致才納入本研究的統(tǒng)計(jì)范圍。

4.QFT-GIT檢測(cè)方法：主要包括血液培養(yǎng)和酶聯(lián)免疫法測(cè)定IFN-γ的水平兩個(gè)步驟。

具體操作如下：抽取血液至3支QFT專用采血管(采血量要準(zhǔn)確，采集后立即劇烈上下振搖10次，以確保整個(gè)試管內(nèi)層都被血液覆蓋)，將采血管以直立方式，于37 ℃培養(yǎng)16～24 h。培養(yǎng)結(jié)束后，采血管以(2000～3000)×g離心15 min，分離血細(xì)胞及血漿。從每支離心后的采血管取血漿用ELISA法進(jìn)行IFN-γ的定量,以裝有450 nm濾光片及620～650 nm參考濾光片的酶標(biāo)儀來讀取吸光度值(A值)。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：利用QFT-GIT專業(yè)分析判讀軟件，分析原始數(shù)據(jù)，報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果判讀原理如表1所示。

質(zhì)量控制：每次試驗(yàn)均測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并利用LIS分析標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定值的準(zhǔn)確度。若QFT-GIT陰性對(duì)照管的IFN-γ值高于8 IU/ml，如果不能排除技術(shù)上的差錯(cuò)和樣本污染的可能，需要將該個(gè)體所有血漿樣本都重測(cè)。

5.CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)：實(shí)驗(yàn)操作按照美國(guó)BD公司FACS Calibur流式細(xì)胞儀說明書進(jìn)行。CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)單位：個(gè)/μl，本實(shí)驗(yàn)室參考值為414～1123個(gè)/μl。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用Microsoft Excel軟件進(jìn)行基礎(chǔ)數(shù)據(jù)整理，采用SPSS 13.0分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組陽性率比較采用卡方檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、 臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)情況

143例患者各種實(shí)驗(yàn)室檢查陰性但又疑似結(jié)核病、臨床診斷不明確者，不納入本統(tǒng)計(jì)范圍。1247例患者臨床診斷和全血IGRA檢測(cè)結(jié)果均已明確，其中肺結(jié)核患者792例，肺外結(jié)核131例，NTM肺病43例,HIV感染或AIDS患者并發(fā)肺結(jié)核98例,臨床診斷其他疾病183例(含心血管系統(tǒng)疾病75例，呼吸系統(tǒng)疾病53例，肝膽系統(tǒng)疾病41例，泌尿系統(tǒng)疾病9例，結(jié)膜炎3例，肺癌2例)。50例患者臨床診斷明確，全血IGRA檢測(cè)結(jié)果為“不明確”。實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果顯示：痰涂片和液體培養(yǎng)總陽性率為29.0%(376/1297)，其中涂片陽性共244例，陽性率為18.8%(244/1297)；液體培養(yǎng)陽性362例，陽性率為27.9%(362/1297)，經(jīng)菌種鑒定結(jié)核分枝桿菌343例，占94.8%(343/362)；NTM 19例，占5.2%(19/362)；14例痰涂片陽性的肺結(jié)核患者液體培養(yǎng)為陰性。全血IGRA檢測(cè)結(jié)果：833例患者檢測(cè)為陽性,陽性率為64.2%(833/1297)；414例患者檢測(cè)為陰性；50例患者(已剔除3例臨床診斷不明確患者)檢測(cè)為“不確定”，其痰涂片和液體培養(yǎng)均為陰性。

二、全血IGRA與痰涂片、液體培養(yǎng)的檢測(cè)結(jié)果

肺結(jié)核、肺外結(jié)核、NTM肺病、HIV感染或AIDS患者并發(fā)肺結(jié)核、其他系統(tǒng)疾病5組患者痰涂片陽性率分別是28.5%(226/792)、5.3%(7/131)、11.6%(5/43)、6.1%(6/98)、0.0%(0/183)；痰液體培養(yǎng)陽性率分別是40.9%(324/792)、13.0%(17/131)、23.3%(10/43)、11.2%(11/98)、0.0%(0/183)；全血IGRA檢測(cè)陽性率分別是77.0%(610/792)、80.9%(106/131)、27.9%(12/43)、50.0%(49/98)、30.6%(56/183)，見表2。全血IGRA與痰涂片相比，菌陰(涂陰和培陰)肺結(jié)核、肺外結(jié)核、HIV感染或AIDS患者并發(fā)肺結(jié)核各組陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為373.52、152.51、46.73,P值均<0.01)，NTM肺病組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.59,P>0.05)。全血IGRA與痰液體培養(yǎng)相比，肺結(jié)核、肺外結(jié)核、HIV感染或AIDS患者并發(fā)肺結(jié)核各組內(nèi)檢測(cè)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為212.03、121.38、34.68,P值均<0.01)，NTM肺病組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.24,P>0.05)。在涂陽患者中，肺結(jié)核、肺外結(jié)核、NTM肺病和HIV感染或AIDS患者并發(fā)肺結(jié)核的全血IGRA檢測(cè)陽性率分別為93.8%、100.0%、40.0%、66.7%；而在涂陰患者中，各組全血IGRA檢測(cè)陽性率分別為70.3%、79.8%、26.3%、48.9%。

表1 QFT-GIT結(jié)果判讀原理表

注 Nil表示空白對(duì)照管IFN-γ檢測(cè)值；TB-Nil表示結(jié)核抗原管IFN-γ檢測(cè)值減去空白對(duì)照管IFN-γ檢測(cè)值；Mitogen-Nil表示促有絲分裂因子管IFN-γ檢測(cè)值減去空白對(duì)照管IFN-γ檢測(cè)值，單位均為“IU/ml”

三、全血IGRA檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷結(jié)果的比較

臨床診斷為肺結(jié)核、肺外結(jié)核的923例患者，痰涂片陽性233例，痰涂片檢測(cè)結(jié)核病的敏感度為25.2%(233/923)，特異度為97.8%(221/226)；液體培養(yǎng)陽性為341例，液體培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)核病的敏感度為36.9%(341/923)，特異度為95.6%(216/226)；全血IGRA檢測(cè)陽性716例，IGRA檢測(cè)結(jié)核病的敏感度為77.6%(716/923)，特異度為69.9%(158/226)，見表3。比較痰涂片、液體培養(yǎng)、全血IGRA 3種方法對(duì)臨床診斷結(jié)核病患者標(biāo)本檢測(cè)的敏感度和特異度，3種方法的敏感度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=559.60,P<0.01)，3種方法的特異度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=101.02,P<0.01)。

四、全血IGRA檢測(cè)結(jié)果不確定患者CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

50例患者全血IGRA檢測(cè)結(jié)果為“不確定”，占全部患者的3.9%(50/1297)，臨床診斷26例為結(jié)核病(12例菌陰肺結(jié)核，5例菌陽肺結(jié)核，3例AIDS并發(fā)肺結(jié)核，2例結(jié)核性胸膜炎，2例頸部淋巴結(jié)結(jié)核，1例AIDS并發(fā)結(jié)核性胸膜炎，1例骨結(jié)核)，24例為非結(jié)核病(8例AIDS，6例肺炎，5例胸膜炎，3例胸腔積液，2例糖尿病；實(shí)驗(yàn)室和影像學(xué)檢查均已排除結(jié)核病)。22例結(jié)核病患者全血CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果低于參考值下限，占84.6%(22/26)，20例非結(jié)核病患者全血CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果低于參考值下限，占83.3%(20/24)，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.07,P>0.05)，統(tǒng)計(jì)全血IGRA檢測(cè)結(jié)果“陽性”和“陰性”的患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果具體見表4。833例IGRA檢測(cè)陽性患者中，25例CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)低于參考值下限，占3.0%(25/833)；414例IGRA檢測(cè)陰性患者中，28例CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)低于參考值下限，占6.8%(28/414)，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.62,P<0.01)。IGRA不確定組CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)分別與陽性、陰性組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=429.86,P<0.01；χ2=207.75,P<0.01)。

表2 不同組別患者的痰檢與全血IGRA檢測(cè)結(jié)果

表3 痰涂片、液體培養(yǎng)、全血IGRA檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷結(jié)果的比較

注 結(jié)核病包括肺結(jié)核和肺外結(jié)核；非結(jié)核病包括NTM肺病和其他系統(tǒng)疾病

討 論

QFT-GIT是一種體外診斷試驗(yàn)，它利用克隆早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)、培養(yǎng)濾液蛋白10(CFP-10)和TB7.7(P4)這3種蛋白的混合多肽刺激肝素化全血中的T淋巴細(xì)胞，再利用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定與多肽抗原體外反應(yīng)所產(chǎn)生的γ-干擾素，從而判斷受試者是否受到結(jié)核分枝桿菌的感染。該試驗(yàn)不能區(qū)分近期感染和既往感染，也不能區(qū)別結(jié)核潛伏感染和活動(dòng)性結(jié)核??；當(dāng)檢測(cè)結(jié)果是陰性時(shí)表示可能沒有感染但不能完全排除，尤其是當(dāng)患者患有多種疾病而結(jié)核病只是其中一種時(shí)，又或者患者受免疫抑制限制，但發(fā)展成活動(dòng)性結(jié)核病的可能性很大時(shí)。 QFT-GIT檢測(cè)應(yīng)用ESAT-6、CFP-10和TB7.7(P4)作為抗原，ESAT-6、CFP-10抗原的蛋白編碼來源于結(jié)核分枝桿菌基因中的一個(gè)菌種特異性基因片段RD-1，而所有的BCG菌株和絕大多數(shù)NTM(堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌和蘇爾加分枝桿菌除外)不含RD-1,因此該試驗(yàn)有著較高的特異度，且不受是否接種BCG的影響[6-7,13-14]。

本研究顯示，全血IGRA對(duì)于肺結(jié)核、肺外結(jié)核、NTM肺病、HIV感染或AIDS并發(fā)肺結(jié)核的患者檢測(cè)陽性率分別為77.0%(610/792)、80.9%(106/131)、27.9%(12/43)、50.0%(49/98)，均高于痰涂片和痰液體培養(yǎng)的陽性率[28.5%(226/792)、5.3%(7/131)、11.6%(5/43)、6.1%(6/98)和41.0%(325/792)、13.0%(17/131)、23.3%(10/43)、11.2%(11/98)]。全血IGRA分別與痰涂片、痰液體培養(yǎng)相比，肺結(jié)核、肺外結(jié)核、HIV感染或AIDS并發(fā)肺結(jié)核各組內(nèi)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.01)，NTM肺病組內(nèi)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均>0.05)。由此可見，在肺結(jié)核、肺外結(jié)核、HIV感染或AIDS并發(fā)肺結(jié)核的診斷上，全血IGRA檢測(cè)較痰涂片和培養(yǎng)有著更高的敏感度。在涂陽患者中，肺結(jié)核、肺外結(jié)核、NTM肺病和HIV感染或AIDS并發(fā)肺結(jié)核的全血IGRA檢測(cè)陽性率分別為93.8%、100.0%、40.0%、66.7%；而在涂陰患者中，各組全血IGRA檢測(cè)陽性率分別為70.3%、79.8%、26.3%、48.9%；此結(jié)果顯示：肺結(jié)核和肺外結(jié)核患者選擇全血IGRA輔助診斷結(jié)核病有著更高的價(jià)值，尤其對(duì)肺外結(jié)核和HIV感染或AIDS并發(fā)肺結(jié)核時(shí)更有意義。

表4 不同全血CD4+ T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果在IGRA檢測(cè)結(jié)果3類患者中的統(tǒng)計(jì)分析

注 表中括號(hào)內(nèi)數(shù)值為“構(gòu)成比(%)”

本研究中以臨床診斷結(jié)核病為標(biāo)準(zhǔn)，全血IGRA對(duì)臨床患者標(biāo)本檢測(cè)的敏感度為77.6%(716/923)，高于痰涂片、液體培養(yǎng)的敏感度(P<0.01)；全血IGRA檢測(cè)的特異度為69.9%(158/226)，低于痰涂片、液體培養(yǎng)的特異度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。國(guó)內(nèi)外IGRA檢測(cè)的敏感度為53%～98%，特異度為60%～90%,多篇文獻(xiàn)報(bào)道的敏感度和特異度>70%[15-18]。本研究中IGRA特異度稍低，分析原因主要是：NTM肺病中27.9%(12/43)的患者呈陽性，其他系統(tǒng)疾病中30.6%(56/183)的患者呈陽性，兩者較高的陽性率降低了IGRA特異度。前者呈現(xiàn)較高的陽性率與此類人群中可能有些受NTM和結(jié)核分枝桿菌的混合感染但臨床上患者結(jié)核病表現(xiàn)不明顯，或感染了與IGRA檢測(cè)抗原相交叉的NTM，如海分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌等有關(guān)；后者呈現(xiàn)較高的陽性率，主要原因與本中心收治患者病源種類有關(guān)，可能由于患者生活在結(jié)核病高度流行環(huán)境，已感染了結(jié)核分枝桿菌，但目前沒有發(fā)病，臨床和實(shí)驗(yàn)室無法判斷已感染了結(jié)核分枝桿菌；或既往患結(jié)核病未痊愈。這些患者均為外院轉(zhuǎn)診或本中心收治的高度懷疑結(jié)核病但結(jié)核感染診斷依據(jù)不足者，雖然病歷上臨床診斷與結(jié)核感染不相關(guān)，但筆者認(rèn)為此類患者考慮為結(jié)核潛伏性感染的可能性較大，應(yīng)該繼續(xù)追蹤、關(guān)注這類患者，以證實(shí)是否患有結(jié)核病[15,19-20]。有文獻(xiàn)報(bào)道證明，IGRA試驗(yàn)檢測(cè)效率受結(jié)核分枝桿菌感染流行情況等影響，在低風(fēng)險(xiǎn)人群中檢測(cè)的特異度較好,而在有潛在結(jié)核分枝桿菌感染的高危人群中檢測(cè)的特異度明顯降低[16,21-22]。

T淋巴細(xì)胞參與全血IGRA反應(yīng)過程。效應(yīng)T細(xì)胞是免疫應(yīng)答的主要成分，CD4+T淋巴細(xì)胞在免疫反應(yīng)中扮演重要角色，可以通過監(jiān)測(cè)人體內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量來評(píng)估人體免疫功能。本研究中50例全血IGRA檢測(cè)結(jié)果為“不確定”，占全部患者的3.9%(50/1297)，22例結(jié)核病患者全血CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果低于參考值下限，占84.6%(22/26)，20例非結(jié)核病患者全血CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果低于參考值下限，占83.3%(20/24)，兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.07,P>0.05)。IGRA不確定組CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)分別與陽性、陰性組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=429.86,P<0.01；χ2=207.75,P<0.01)。這說明IGRA“不確定”的結(jié)果與人體淋巴細(xì)胞數(shù)量低下、淋巴細(xì)胞活力降低、免疫功能受損、淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ不足等有關(guān)。當(dāng)患者的免疫功能受到抑制或免疫系統(tǒng)功能欠佳，均有可能造成IGRA結(jié)果的不確定性。

許多研究表明，QFT-GIT優(yōu)點(diǎn)較多：QFT-GIT試驗(yàn)設(shè)置了空白對(duì)照管和陽性對(duì)照管，以利于評(píng)價(jià)受試者的基礎(chǔ)免疫狀態(tài)和血樣處理是否得當(dāng)(陽性對(duì)照管)，及排除受試者體內(nèi)嗜異性抗體效應(yīng)和非特異的IFN-γ等影響(空白對(duì)照管)，從而提高了方法學(xué)的可靠性[17,23-25]。QFT-GIT試驗(yàn)屬于體外試驗(yàn)，方便快捷，由專業(yè)軟件判定結(jié)果，不受人為因素影響。QFT-GIT試驗(yàn)出現(xiàn)不確定結(jié)果，提示可能受試者免疫功能異?；蜓獦犹幚怼⒎跤^程不恰當(dāng)[17,23-25]。QFT-GIT試驗(yàn)有著較高的敏感度和特異度，在檢測(cè)過程中已對(duì)單個(gè)核細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化，基本可以消除淋巴細(xì)胞相對(duì)減少對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響[16]，但本研究提示淋巴細(xì)胞嚴(yán)重減少對(duì)檢測(cè)結(jié)果仍有干擾。因此，IGRA(QFT-GIT)在臨床上可以作為結(jié)核病輔助診斷手段，尤其對(duì)肺外結(jié)核、涂陰肺結(jié)核，以及HIV感染或AIDS并發(fā)肺結(jié)核的患者有一定價(jià)值。但是QFT-GIT試劑盒價(jià)格較貴，對(duì)標(biāo)本采集和處理的要求較高，結(jié)果不明確樣本需重復(fù)檢測(cè)，在一定程度上限制了其在臨床診斷中的使用。

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(本文編輯：薛愛華)

The values of whole blood interferon-γ release assay in auxiliary diagnosis of tuberculosis

LITong-xin,HEYing,ZHOUGang,CHENDuan-duan,WEICheng-li,LIUMin,HUANGZhong-min,WANGJing,ZHONGMin,LUOMing,DINGXian-ping.

DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingPublicHealthMedicalCenter,Chongqing400036,China

LUOMing,Email:luoming1976@aliyun.com

Objective To evaluate the effects of whole blood interferon-γ release assay (IGRA) QuantiFERON@-TB Gold IT kit (QFT-GIT) in auxiliary diagnosis of tuberculosis. Methods A total 1440 patients from tuberculosis and Infection Departments of Chongqing Public Health Medical Center were collected and detected with sputum smear, Bactec960 and QFT from July 1,2014 to December 31,2015. The levels of IFN-γ of different groups of patients were analyzed by Chi-squareχ2test，P<0.05 was considered as statistically significant. Results The sensitivity and specificity of QFT were 77.6% (716/923) and 69.9% (158/226) when compared with clinical diagnosis. Compared with sputum smear (the positive rate 28.5% (226/792) in pulmonary tuberculosis, 5.3% (7/131) in extra-pulmonary tuberculosis and 6.1% (6/98) in HIV or AIDS/TB) and liquid culture (the positive rate 40.9% (324/792) in pulmonary tuberculosis, 13.0% (17/131) in extra-pulmonary tuberculosis and 11.2% (11/98) in HIV or AIDS/TB), IGRA showed higher positive rate (the positive rate 77.0% (610/792) in pulmonary tuberculosis, 80.9% (106/131) in extra-pulmonary tuberculosis and 50.0% (49/98) in HIV or AIDS/TB). The difference was significant statistically (χ2values 373.52,152.51 and 46.73 compared to sputum smear,χ2values 212.03, 121.38 and 34.68 compared to liquid culture,P<0.01). Conclusion IGRA is a rapid and simple tool for diagnosis of tuberculosis with high sensitivity especially for smear and culture negative, extra-pulmonary and HIV/AIDS combined tuberculosis.

Tuberculosis；Mycobacteriumtuberculosis； Enzyme-linked immunospot assay； Molecular diagnostic techniques； Evaluation studies

10.3969/j.issn.1000-6621.2016.08.005

重慶市衛(wèi)生局2012年醫(yī)學(xué)科研重點(diǎn)項(xiàng)目(2012-1-085)

400036 重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心檢驗(yàn)科(李同心、何瑛、周剛、陳耑耑、魏成麗、王靜)，感染二科(劉敏)，病案室(黃忠民)，結(jié)核重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(鐘敏、羅明)；四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳醫(yī)學(xué)研究所 特色生物資源研究與利用川渝共建重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(丁顯平)

羅明， Email: luoming1976@aliyun.com

2016-05-09)