陜西省渭南市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科(渭南 714000)　張　博　張　穎　牛力春　尚鐵燕　雷　紅

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MIF及HIF-1α在上皮性卵巢癌中的表達及其臨床意義*

陜西省渭南市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科(渭南 714000)張博張穎△▲牛力春△尚鐵燕雷紅

摘要目的：探討MIF和HIF-1α在上皮性卵巢癌組織中的表達情況及其與臨床病理因素的相關(guān)性。方法：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測80例上皮性卵巢癌組織中MIF和HIF-1α的表達情況，分析MIF和HIF-1α表達在上皮性卵巢癌組織中的臨床意義。結(jié)果：MIF在卵巢癌組織中表達陽性率為68.8%，HIF-1α在卵巢癌組織中表達陽性率為77.5%。MIF和HIF-1α表達均與卵巢癌手術(shù)分期、細胞分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.05)，與卵巢癌患者年齡和病理類型無關(guān)(P>0.05)。卵巢癌組織中MIF和HIF-1α兩者表達之間為正相關(guān)(R=0.605,P<0.05)。結(jié)論：MIF和HIF-1α表達之間具有協(xié)同作用,與卵巢癌病程發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

主題詞 卵巢腫瘤 巨噬細胞游走抑制因子缺氧誘導(dǎo)因子1,α亞單位 免疫組織化學(xué)

巨噬細胞移動抑制因子(MIF)是一個功能強大的多功能蛋白,可由活化的T淋巴細胞分泌，并抑制巨噬細胞遷移,還可促進多種炎性因子分泌從而參與炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答調(diào)控[1-2]。近年來研究表明,MIF作為細胞因子可促進腫瘤細胞生長增殖、血管形成、增加侵襲能力、抑制抑癌基因p53活性等多種機制參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展；還有研究表明，MIF高表達與乳腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌等多種腫瘤的不良預(yù)后和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[3-4]。有文獻報道缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)可上調(diào)MIF基因表達水平，而MIF過表達可促進HIF-1α基因的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性，從而正向反饋促進腫瘤細胞在低氧環(huán)境下的新生血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移等[1-3]。因此，MIF和HIF-1α在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮極其重要的作用。本研究通過RT-PCR及免疫組化技術(shù)探討MIF和HIF-1α在上皮性卵巢癌中的表達情況及其相關(guān)性，為進一步深入理解卵巢癌發(fā)病機制提供實驗依據(jù)。

對象與方法

1對象收集三二三醫(yī)院及渭南市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科于2010年1月至2014年12月期間收治的卵巢腫瘤患者80例,年齡31～79歲,平均48.75歲。病理類型包括漿液性囊腺癌38例,粘液性囊腺癌26例,子宮內(nèi)膜樣癌11例,其他類型5例；細胞學(xué)分級高分化癌18例,中分化癌32例,低分化癌40例。按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2012年新的手術(shù)病理分期標準分為I期8例、Ⅱ期12例、Ⅲ期46例、Ⅳ期14例。納入標準：①初診卵巢腫瘤患者,未經(jīng)任何治療；②手術(shù)病理組織HE染色確診為上皮性卵巢癌；③臨床病理資料完整。

2實驗試劑小鼠抗人HIF-1α單克隆抗體購自美國Santa公司，兔抗人MIF單克隆抗體購自美國CST公司，SP法免疫組織化學(xué)試劑盒購自北京中杉金橋公司。

3實驗方法卵巢癌病理組織蠟塊常規(guī)4 μm切片,分別做HE染色、MIF和HIF-1α免疫組織化學(xué)染色，以PBS代替一抗作為陰性對照，以乳腺癌組織作為MIF和HIF-1α的陽性對照。免疫組化操作嚴格按照SP法免疫組織化學(xué)試劑盒說明書進行。

4結(jié)果判讀首先由病理醫(yī)生根據(jù)HE染色結(jié)果進行病理診斷復(fù)核,然后MIF和HIF-1α的免疫組化結(jié)果由兩名病理醫(yī)生分別獨立閱片進行結(jié)果判讀。細胞核或細胞質(zhì)見棕色或棕褐色顆粒為免疫組化結(jié)果陽性。顯微鏡高倍視野下隨機觀察5個視野，按照每個視野中陽性細胞數(shù)比例進行評分,陽性細胞<5%記為0，5%～25%為1，26%～50%為2，51%～75%為3,>50%為4,評分為1～4分為陽性。

結(jié)果

1卵巢癌病理組織中MIF和HIF-1α的表達情況見附圖。MIF在卵巢癌組織中為細胞質(zhì)表達，陽性率為68.8%(55/80)，HIF-1α在卵巢癌組織中主

要為細胞質(zhì)表達，也可見細胞核表達，陽性率為77.5%(62/80)。

附圖　MIF和HIF-1α在卵巢癌組織中表達情況(SP×400)

2MIF和HIF-1α陽性表達與卵巢癌臨床病理因素的相關(guān)性見表1。中晚期(Ⅲ+Ⅳ)卵巢癌患者中MIF和HIF-1α陽性表達率均顯著高于早期(Ⅰ+Ⅱ)卵巢癌患者(P<0.05)。卵巢癌組織中MIF和HIF-1α在高分化、中分化和低分化分組中陽性表達率分別為50.0%，84.4%，72.5%和55.6%，78.1%和92.5%，隨著細胞分化程度的降低，MIF和HIF-1α蛋白陽性表達率均逐漸升高，差異有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。卵巢癌患者中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的MIF和HIF-1α陽性表達率高于淋巴結(jié)陰性的患者，差異有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。但卵巢癌組織中MIF和HIF-1α陽性表達均與年齡、病理類型無關(guān)(P>0.05)。

表1　MIF和HIF-1α陽性表達與卵巢癌臨床病理因素的關(guān)系[n(%)]

注：*P<0.05，**P<0.01，#P<0.001

3MIF和HIF-1α蛋白在卵巢癌組織中表達的相關(guān)性見表2。80例卵巢癌組織中，MIF和HIF-1α蛋白表達均陽性為52例，MIF和HIF-1α蛋白表達均陰性為15例，采用Spearman等級相關(guān)性分析MIF和HIF-1α蛋白在卵巢癌組織中表達的相關(guān)性結(jié)果表明，兩者表達之間為正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R=0.605，具有統(tǒng)計學(xué)意義(X2=29.326，P=0.000)。

表2　卵巢癌組織中MIF和HIF-1α表達之間的相關(guān)性

討論

MIF是一種多效能的蛋白,同時具有炎性因子和細胞因子的功能。MIF作為炎性因子,由活化的T淋巴細胞分泌,通過抑制巨噬細胞遷移和促進多種炎性因子分泌,廣泛參與機體的病理生理過程,在炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要調(diào)控作用。作為細胞因子,MIF在腫瘤細胞生長增殖、血管形成、侵襲轉(zhuǎn)移、細胞分化等方面扮演重要角色[3-4]。因此有學(xué)者提出MIF通過誘導(dǎo)炎性因子改變組織微環(huán)境從而促進細胞惡變發(fā)生和腫瘤細胞轉(zhuǎn)移。這一學(xué)說已經(jīng)得到初步證實?，F(xiàn)有的研究表明MIF可能通過以下幾種途徑在腫瘤細胞發(fā)病機制中扮演重要角色：①MIF通過激活MAPK/ERK和PI3K/AKT信號通路促進腫瘤細胞生長增殖；②MIF可上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達，促進腫瘤新生血管形成；③MIF能增加多種基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)表達，通過促進細胞外基質(zhì)降解增加腫瘤細胞浸潤轉(zhuǎn)移能力；④MIF通過抑制抑癌基因p53功能發(fā)揮抵抗凋亡作用；⑤MIF通過誘導(dǎo)NFκB等炎癥因子參與腫瘤細胞的免疫逃逸[5-8]。本研究用免疫組化檢測了卵巢癌中MIF蛋白的表達情況。結(jié)果表明MIF在卵巢癌組織中表達陽性率為68.8%。卵巢癌組織中FIGO分期較晚、細胞分化程度差、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的患者中MIF表達陽性率較高(P<0.05)，但MIF表達與年齡、病理類型無關(guān)(P>0.05)。這一結(jié)果提示，隨著卵巢癌病程的進展，MIF表達水平也逐漸增加，MIF可能在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

由于實體瘤組織處于乏氧狀態(tài)，因此HIF-1α在腫瘤細胞的適應(yīng)性生存過程中發(fā)揮非常重要的調(diào)控作用。HIF-1α主要通過以下途徑促進腫瘤發(fā)生發(fā)展：①通過促進VEGF轉(zhuǎn)錄水平和增加VEGF mRNA穩(wěn)定性上調(diào)VEGF的表達水平，從而促進腫瘤組織新生血管形成，有利于腫瘤細胞生長和浸潤；②HIF-1α通過上調(diào)糖酵解中關(guān)鍵酶表達，促進腫瘤細胞糖酵解，為腫瘤細胞提供能量支持；③HIF-1α通過降低E-cadherin和β-catenin表達，降低細胞間、細胞與基質(zhì)間粘附性，從而有利于腫瘤細胞遷移和浸潤[9-10]。本研究免疫組化結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO分期較晚、細胞分化程度差、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的卵巢癌患者中HIF-1α蛋白表達水平較高，提示HIF-1α表達上調(diào)參與卵巢癌發(fā)生發(fā)展，并與腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移相關(guān)。

本研究用Spearman相關(guān)分析進一步探索了卵巢癌組織中MIF和HIF-1α表達的相關(guān)性,結(jié)果表明MIF和HIF-1α兩者表達之間為正相關(guān)(R=0.605，P<0.05)，提示MIF和HIF-1α表達在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中起協(xié)同作用。文獻報道,HIF-1α可上調(diào)MIF基因表達水平，而MIF過表達可促進HIF-1α基因的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性[1-3]。因此我們推測,腫瘤組織中乏氧環(huán)境誘導(dǎo)HIF-1α表達，HIF-1α高表達進一步促進MIF表達水平增加。MIF上調(diào)一方面發(fā)揮炎性因子作用，通過誘導(dǎo)炎性因子改變組織微環(huán)境，為腫瘤細胞創(chuàng)造生存條件；另一方面,發(fā)揮細胞因子作用,促進腫瘤細胞生長增殖、血管形成、侵襲轉(zhuǎn)移等。同時,MIF又可正反饋調(diào)控HIF-1α表達,從而在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮極其重要的作用。

綜上所述,MIF和HIF-1α表達之間具有協(xié)同作用，與卵巢癌病程發(fā)生發(fā)展相關(guān)，但其具體機制還需進一步深入研究。

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(收稿：2015-12-04)

Expression and significance of MIF and HIF-1α in the epithelial ovarian carcinoma

Department of Gynecology and Obstetrics,Weinan Central Hospital(Weinan 714000)

Zhang BoZhang YingNiu Lichunet al

ABSTRACTObjective：To determine the expression of MIF和HIF-1α in the epithelial ovarian carcinoma and explore the correlation between the MIF and HIF-1α and clinicopathologic features. Methods:Using immunohistochemistry SP method to detected the expression of MIF and HIF-1α in 80 cases diagnosed with epithelial ovarian carcinoma in obstetrics and gynecology department.Results:The positive expression rate of MIF and HIF-1α were 68.8% and 77.5% separately. The expression of MIF and HIF-1α were closely related with FIGO stage, differentiation degree and lymph node metastasis(P<0.05). There was a positive correlation between the positive rates of MIF and the positive rates of HIF-1α(R=0.605，P<0.05). Conclusion:MIF and HIF-1α maybe play an important role during tumor progress, invasion and metastasis of epithelial ovarian carcinoma.

KEY WORDSOvarian neoplasmsMacrophage migration-inhibitory factors Hypoxia-inducible factor 1, alpha subunit Immunohistochemistry

【中圖分類號】R737.33

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.06.040

*國家自然科學(xué)基金資助項目(81302243)

陜西省自然科學(xué)基金資助項目(2014JM4157)

解放軍第三二三醫(yī)院培育課題(2012323B14)

△解放軍第三二三醫(yī)院婦產(chǎn)科

▲通訊作者

·臨床病理·