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        阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者超敏血清C反應(yīng)蛋白和T淋巴細(xì)胞亞群水平的變化及臨床意義

        2016-06-20 05:29:14林群英吳良寧林國(guó)盛涂海健
        關(guān)鍵詞:亞群淋巴細(xì)胞阻塞性

        林群英 吳良寧 周 敬 林國(guó)盛 林 娟 涂海健

        (1莆田學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸科 莆田 351100; 2福建中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 福州 350122;3復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科 上?!?00032)

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        阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者超敏血清C反應(yīng)蛋白和T淋巴細(xì)胞亞群水平的變化及臨床意義

        林群英1吳良寧2周敬3△林國(guó)盛1林娟1涂海健1

        (1莆田學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸科莆田351100;2福建中醫(yī)藥大學(xué)研究生院福州350122;3復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科上海200032)

        【摘要】目的評(píng)價(jià)阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征 (obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)患者血清超敏C反應(yīng)蛋白 (hypersensitive-C reactive protein,hs-CRP)和T淋巴細(xì)胞亞群 (T lymphocyte subsets,T-LS)的變化,探討OSAHS對(duì)T-LS水平的影響及hs-CRP水平、T-LS水平與OSAHS之間的相互關(guān)系。方法選擇門診及住院的單純OSAHS患者59例,同期健康體檢者24例作為對(duì)照組,兩組之間年齡和性別等構(gòu)成差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有受試者均接受連續(xù)7 h的夜間多導(dǎo)睡眠儀監(jiān)測(cè)以判斷OSAHS患者病情的嚴(yán)重程度;于次日清晨采集外周靜脈血5 mL,測(cè)定血清中hs-CRP和T-LS水平。結(jié)果OSAHS組CD3+CD4+T細(xì)胞較對(duì)照組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05);而 CD3+、CD3+CD8+T細(xì)胞和CD4+/CD8+T細(xì)胞較對(duì)照組差異均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)。 結(jié)論OSAHS患者體內(nèi)存在T-LS水平的改變,可能導(dǎo)致不同程度的免疫功能下降。

        【關(guān)鍵詞】阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征;T淋巴細(xì)胞亞群;超敏C反應(yīng)蛋白

        *This work was supported by the Natural Science Foudation of Fujian Province,China (2013J01390).

        阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征 (obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)是患者夜間睡眠過程中反復(fù)出現(xiàn)呼吸暫停及覺醒,反復(fù)低氧血癥導(dǎo)致患者晨起頭痛、口干、白天嗜睡明顯、記憶力下降,嚴(yán)重者可伴發(fā)心腦血管、精神神經(jīng)、血液和代謝等多系統(tǒng)合并癥,甚至可能發(fā)生夜間猝死[1]。近年來由于飲食結(jié)構(gòu)的改變與不良生活方式的蔓延,人群肥胖率增高,各種類型的睡眠呼吸紊亂尤其以O(shè)SAHS發(fā)病率明顯上升,來自上海的研究提示我國(guó)30歲以上成人OSAHS的患病率為3.62%[2]。T淋巴細(xì)胞亞群(T lympnocyte subsets,T-LS)是反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo)之一,OSAHS對(duì)T-LS水平的影響,目前國(guó)內(nèi)外有一些報(bào)道,但意見不一,尚無(wú)定論。覃羽華等[3]研究認(rèn)為T細(xì)胞參與了OSAHS的發(fā)生、發(fā)展過程,OSAHS患者機(jī)體免疫功能可能下降。影響OSAHS患者體內(nèi)T-LS水平變化的因素較多,病情嚴(yán)重程度居于重要作用,而超敏C反應(yīng)蛋白 (hypersensitive-C reactive protein,hs-CRP)作為反映OSAHS病情嚴(yán)重程度的重要炎癥指標(biāo),有助于闡明OSAHS嚴(yán)重程度與其體內(nèi)T-LS水平變化之間的關(guān)系。因此,本研究擬探討OSAHS患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群水平的變化,以及OSAHS患者體內(nèi)hs-CRP及T-LS水平與病情嚴(yán)重程度之間的相互關(guān)系。

        資 料 和 方 法

        研究對(duì)象OSASH組:OSASH患者59例,年齡18~69歲,平均 (46.04±13.12)歲;其中輕度20例,中度18例,重度21例;均為福建莆田學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸科2012年10月至2014年5月初次確診為單純OSASH的門診及住院患者,且患者均未接受任何相關(guān)的睡眠呼吸疾患的??圃\治。正常對(duì)照組:健康體檢者24例,其中男21例,女3例,年齡19~70歲,平均 (48.40±16.54)歲,無(wú)夜間打鼾,經(jīng)夜間7 h多導(dǎo)睡眠圖檢查不符合OSAHS診斷。所有受試者均接受相關(guān)病史詢問,排除各種風(fēng)濕免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、長(zhǎng)期營(yíng)養(yǎng)不良、感染性疾病、血液系統(tǒng)性疾病、惡性腫瘤及口服可能影響免疫系統(tǒng)藥物的患者。行夜間多導(dǎo)睡眠圖 (polysomnogram,PSG),監(jiān)測(cè)當(dāng)天禁止飲酒、咖啡、濃茶及服用鎮(zhèn)靜安眠類藥物。

        OSAHS疾病的診斷及分級(jí)診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2011年1月中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)睡眠呼吸障礙學(xué)組制定的《阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南 (2011年修訂版)》[1]。患者入選依據(jù)為主要臨床病史、專項(xiàng)體格檢查和PSG監(jiān)測(cè)結(jié)果。臨床有典型的夜間睡眠打鼾伴呼吸暫停、日間嗜睡評(píng)分 (ESS評(píng)分≥9分)等癥狀;體格檢查和/或影像學(xué)檢查有上氣道1個(gè)或多個(gè)部位的狹窄及阻塞,呼吸暫停低通氣指數(shù) (apnea hypopnea index,AHI)≥5次/h者可診斷為OSAHS;對(duì)于日間嗜睡不明顯 (ESS評(píng)分<9分)者,AHI≥10次/h或AHI≥5/h,且存在認(rèn)知功能障礙、腦血管疾病、冠心病、高血壓、糖尿病等1項(xiàng)或1項(xiàng)以上合并癥,均可明確OSAHS診斷。

        根據(jù)AHI及最低經(jīng)皮氧飽和度 (LSaO2)的不同,將OSAHS患者病情程度分為輕度、中度和重度。AHI<5,SaO2>90%為正常;AHI 5~15及SaO285%~90%為輕度OSAHS;AHI 15~30及SaO280%~85%為中度OSAHS;AHI>30及SaO2<80% 為重度OSAHS。體質(zhì)指數(shù) (body mass index,BMI)是目前國(guó)際上常用的衡量人體胖瘦程度以及是否健康的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn),肥胖是OSAHS發(fā)病的危險(xiǎn)因素,與OSAHS嚴(yán)重程度密切相關(guān)[4]。BMI=體重 (kg)/身高 (m2),18.5~23.9為正常,24~27.9為超重,≥28為肥胖。

        多導(dǎo)睡眠圖監(jiān)測(cè)所有入選研究對(duì)象均接受連續(xù)7 h的夜間PSG (澳大利亞Compumedics公司)監(jiān)測(cè),監(jiān)測(cè)內(nèi)容包括腦電、眼動(dòng)、肌動(dòng)、心電、口鼻呼吸氣流、胸腹呼吸運(yùn)動(dòng),所有數(shù)據(jù)經(jīng)分析獲得結(jié)果,用于疾病診斷及疾病嚴(yán)重程度的判斷。

        T淋巴細(xì)胞亞群水平的檢測(cè)所有入院受試者于次日清晨醒后使用EDTA-K 抗凝管 (紫色帽)通過靜脈穿刺以無(wú)菌方式采集血液2~3 mL,進(jìn)行 T-LS分析。血樣于采集后48 h內(nèi)染色,染色后24 h內(nèi)進(jìn)行分析。將BD Multitest試劑盒溶血素用室溫去離子水稀釋10倍,備用。取12×75 mm管1支,編號(hào);將20 μL的BD Multitest CD3/CD8/CD45/D4試劑移取到標(biāo)記管的底部,將50 μL充分混勻的抗凝血移取到標(biāo)記管底部,移取過程中避免血液污染管壁,蓋上管蓋,輕輕震蕩、混勻,在室溫環(huán)境下避光孵育15 min。其后,管內(nèi)添加450 μL的BD Multitest溶血素,避免光線直射;蓋上管蓋并輕輕震蕩、混勻,再次在室溫環(huán)境下避光孵育15 min;最后,在BD Facscalibur流式細(xì)胞儀上對(duì)樣本進(jìn)行分析。操作步驟嚴(yán)格按BD試劑盒說明書進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的正常參考值:CD3+T細(xì)胞,55%~84%;CD3+CD4+T細(xì)胞,31%~60%;CD3+CD8+T細(xì)胞,13%~41%。

        hs-CRP水平的檢測(cè)所有入院受試者于次日晨起后使用分離膠促凝管 (黃色帽)采集靜脈血2~3 mL,分離血清進(jìn)行hs-CRP分析。使用hs-CRP檢測(cè)試劑盒 (i-CHROMATMhs-CRP,免疫熒光干式定量法)在i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀 (韓國(guó)BoditechMed Inc公司)上進(jìn)行檢測(cè)。

        結(jié)果

        臨床特征比較OSAHS組與正常對(duì)照組的臨床特征比較見表1。OSASH組的AHI與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01)。OSASH組的LSaO2與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。OSASH組的BMI較對(duì)照組略高,但兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;兩組間性別、年齡均無(wú)明顯差異 (P>0.05)。

        表1 OSAHS組與正常對(duì)照組的臨床特征比較

        vs.the control group,(1)P<0.05;,(2)P<0.01.

        T-LS水平比較OSAHS組與正常對(duì)照組T-LS水平的比較見表2。OSAHS組CD3+CD4+T細(xì)胞較對(duì)照組CD3+CD4+T細(xì)胞明顯降低,且隨著OSAHS疾病嚴(yán)重程度的增加,患者CD3+CD4+T細(xì)胞 (%)逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05);CD3+T細(xì)胞所占T淋巴細(xì)胞的百分率較對(duì)照組無(wú)明顯改變 (P>0.05);CD3+CD8+T細(xì)胞較對(duì)照組CD3+CD8+T細(xì)胞有所升高 (P>0.05),而CD4+/CD8+T細(xì)胞較對(duì)照組略有下降 (P>0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        hs-CRP水平比較OSAHS組與正常對(duì)照組hs-CRP水平相比,發(fā)現(xiàn)隨著OSAHS疾病嚴(yán)重程度的增加,hs-CRP水平隨之增高 (圖1)。對(duì)照組hs-CRP水平[(4.54±0.93) mg/L]與輕度OSAHS組hs-CRP水平[(5.62±1.22) mg/L]、中度OSAHS組hs-CRP水平 [(8.21±0.97) mg/L]和重度OSAHS組hs-CRP水平[(15.10±1.09) mg/L]之間比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        OSAHS患者血清hs-CRP水平與T-LS水平的關(guān)系繪制OSAHS患者血清hs-CRP水平與T-LS中的CD3+CD4+T-LS散點(diǎn)圖(圖2),發(fā)現(xiàn)OSAHS患者血清hs-CRP水平與該細(xì)胞亞群水平具有相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)R2=0.713。

        表2 OSAHS組與正常對(duì)照組T-LS水平的比較

        vs.the control group,(1)P<0.05;,(2)P<0.01.

        vs.the control group,(1)P<0.05;(2)P<0.01.

        圖1不同組別OSAHS患者與正常對(duì)照組間血清hs-CRP水平比較

        Fig 1Comparison of hs-CRP level between different OSAHS groups and control growp

        OSAHS是多種病因?qū)е碌囊归g反復(fù)上氣道狹窄或阻塞,出現(xiàn)間歇性低氧和再氧合,導(dǎo)致間歇性的胸腔壓力急劇變化和波動(dòng)、氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)、交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮、內(nèi)分泌紊亂及微覺醒增加等病理生理改變,嚴(yán)重危害全身各組織、器官功能,甚至導(dǎo)致全身代謝綜合征。OSAHS病因復(fù)雜,既有上氣道解剖上的狹窄,也有上氣道組織功能上的缺陷,是多種病因綜合作用的結(jié)果[5]。OSAHS的一個(gè)最重要的病理生理特征為間歇性低氧和再氧合交替出現(xiàn),類似缺血再灌注過程,可誘發(fā)氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng),進(jìn)而引起人體各器官組織的損害,包括免疫系統(tǒng)[6]。

        血清hs-CRP是一個(gè)炎癥指標(biāo)。OSAHS作為一種系統(tǒng)綜合征,激活炎性系統(tǒng)發(fā)生一系列免疫反應(yīng),釋放各種炎性因子,如IL-6,IL-10,腫瘤生長(zhǎng)因子b,核因子κb等。本研究結(jié)果顯示OSAHS患者與健康對(duì)照組相比,體內(nèi)hs-CRP水平顯著升高,且隨著疾病嚴(yán)重程度的增加,患者體內(nèi)hs-CRP水平的升高越明顯。Hartmann等[7]研究指出,OSAHS患者體內(nèi)hs-CRP水平升高與血清中IL-6升高關(guān)系密切,IL-6是肝臟中調(diào)節(jié)hs-CRP水平的一個(gè)關(guān)鍵因子。

        T淋巴細(xì)胞是體內(nèi)免疫系統(tǒng)最為重要的免疫細(xì)胞群,正常機(jī)體的各個(gè)T-LS相互影響并發(fā)揮作用,維持機(jī)體正常的免疫功能。當(dāng)T-LS的數(shù)量或比例發(fā)生改變和/或T-LS功能出現(xiàn)異常時(shí),機(jī)體免疫功能出現(xiàn)紊亂,進(jìn)而導(dǎo)致一系列的病理生理改變。成熟的T淋巴細(xì)胞表面均可表達(dá)CD3分子,而CD4、CD8不能同時(shí)表達(dá)于成熟的T淋巴細(xì)胞表面,故可將成熟的T淋巴細(xì)胞分為CD3+CD4+T細(xì)胞和CD3+CD8+T細(xì)胞兩個(gè)亞群。CD4+輔助T細(xì)胞的主要功能是通過其分泌的淋巴因子,增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答過程。CD8+細(xì)胞毒T細(xì)胞可抑制B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的功能,從而抑制免疫應(yīng)答過程,以保持免疫功能的平衡。

        近年來,許多研究發(fā)現(xiàn)OSAHS患者體內(nèi)存在免疫功能的改變。Dyugovskaya等[8]發(fā)現(xiàn),OSAHS患者體內(nèi)CD8+T淋巴細(xì)胞表型和功能增強(qiáng),可能與其較高的心腦血管并發(fā)癥發(fā)生率相關(guān)。湯冰祥等[9]發(fā)現(xiàn),重度OSAHS患者體內(nèi)CD3+T淋巴細(xì)胞水平及CD4+T淋巴細(xì)胞水平無(wú)明顯變化,而CD8+T淋巴細(xì)胞水平明顯升高,CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比例顯著降低。覃羽華等[3]的研究提示,OSASH患者體內(nèi)CD3+T淋巴細(xì)胞水平無(wú)明顯變化,而CD8+T淋巴細(xì)胞水平明顯升高,CD4+T淋巴細(xì)胞水平降低,CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比例顯著降低。本研究?jī)山M之間在性別比例、年齡及BMI均無(wú)顯著差異。通過對(duì)受試者外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平測(cè)定,結(jié)果顯示:OSAHS組CD3+T淋巴細(xì)胞水平較對(duì)照組無(wú)明顯變化,CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞水平較對(duì)照組顯著降低 (P<0.05),CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞水平較對(duì)照組有所升高,而CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞較對(duì)照組略有下降。提示OSAHS患者的血T-LS變化,以CD4+T淋巴細(xì)胞減少及CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞降低為主,CD4+T淋巴細(xì)胞減少占優(yōu)勢(shì)。CD4+T淋巴細(xì)胞減少,使CD8+T淋巴細(xì)胞功能相對(duì)亢進(jìn),其抑制B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞功能增加,進(jìn)而導(dǎo)致T-LS功能紊亂。

        CD4+T淋巴細(xì)胞水平的增加和CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值的升高提示機(jī)體細(xì)胞免疫功能增強(qiáng),而CD8+T淋巴細(xì)胞的增加和CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值的降低提示機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降[10]。由此可見,OSAHS患者體內(nèi)存在T-LS水平的變化,其免疫功能亦可能出現(xiàn)不同程度的下降。本研究與上述文獻(xiàn)結(jié)果略有差異,這可能與下列因素有關(guān):(1) 本研究選取的OSAHS患者均為初次確診患者,其病程較短,基本屬于OSAHS發(fā)病早期,而成熟的T淋巴細(xì)胞表面均可表達(dá)CD3分子,故只有長(zhǎng)病程反復(fù)CO2潴留、酸中毒和低氧血癥等病理生理改變,才有可能導(dǎo)致CD3改變。(2) CD3+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量與正常對(duì)照組無(wú)明顯變化,但CD8+T淋巴細(xì)胞略高于對(duì)照組,而CD4+T淋巴細(xì)胞、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞均低于對(duì)照組。CD8+T淋巴細(xì)胞升高,CD4+T淋巴細(xì)胞降低,可使具有外周血成熟T淋巴細(xì)胞共同標(biāo)志的CD3+T淋巴細(xì)胞無(wú)明顯變化。(3) 受試者可能合并某些潛在的影響機(jī)體免疫功能的疾病。(4) 患者病情和病程差異。本研究所采用的儀器、方法與文獻(xiàn)有所不同及病例數(shù)偏少等局限性,故尚需要進(jìn)一步行多中心、大樣本的研究,并對(duì)T淋巴細(xì)胞的功能進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)OSAHS患者體內(nèi)hs-CRP水平與T-LS中的CD3+CD4+淋巴細(xì)胞亞群水平之間具有相關(guān)性,提示免疫機(jī)制和炎性因子共同參與了OSAHS的病理生理變化,且兩者間存在某種聯(lián)系。進(jìn)一步研究可能機(jī)制,將有助于全面了解OSAHS的發(fā)生、發(fā)展過程,為今后臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

        綜上所述,OSAHS患者體內(nèi)存在T-LS水平及比例的變化,可能與OSAHS患者免疫功能的下降相關(guān)。其可能的原因是,由于反復(fù)間歇低氧再氧合,致體內(nèi)大量氧自由基產(chǎn)生和炎性反應(yīng),使T淋巴細(xì)胞免疫功能受損[11],進(jìn)而導(dǎo)致一系列疾病如感染、腫瘤等發(fā)生率升高,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和壽命。因此,對(duì)OSAHS患者進(jìn)行合理的免疫功能調(diào)節(jié)很重要,可以通過增強(qiáng)抵抗力、改善通氣、糾正缺氧和CO2潴留等進(jìn)行調(diào)節(jié)[12]。應(yīng)做到早發(fā)現(xiàn)、早治療,及時(shí)干預(yù)病情的進(jìn)展,預(yù)防并發(fā)癥的發(fā)生;同時(shí)應(yīng)注意對(duì)OSAHS患者進(jìn)行外周血T-LS的檢測(cè),以協(xié)助判斷機(jī)體的免疫功能及治療效果與預(yù)后。

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        The change and clinical significance of T lymphocyte subsets andserum hypersensitive-C reactive protein levels in patients with obstructive sleep apnea hypopnea syndrome

        LIN Qun-ying1,WU Liang-ning2,ZHOU Jing3△, LIN Guo-sheng1, LIN Juan1, TU Hai-jian1

        (1DepartmentofRespiratoryMedicine,theAffilicatedHosipitalofPutianUniversity,Putian351100,FujianProvince,Chian;2SchoolofGraduate,FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,FujianProvince,China;3DepartmentofGeneralPractice,ZhongshanHospital,FudanUniversity,Shanghai200032,China)

        【Abstract】ObjectiveTo evaluate the change of T lymphocyte subsets and serum hypersensitive-C reactive protein (hs-CRP) level in patients obstructive sleep apnea hypopnea syndrome (OSAHS),and to explore OSAHS′s influence on the level of T lymphocyte subsets (T-LS) and the relationship among hs-CRP,level of T lymphocyte subsets and OSAHS.MethodsA total of 59 in-patients and out-patients with OSAHS was selected as the OSAHS group,24 healthy subjects were selected as control group.There was no significant differences in gender and age between these two groups.All subjects underwent 7 hours continuous nighttime polysomnography (PSG) monitoring to access their disease severity of OSAHS.The next morning,5 mL blood was collected from peripheral vein for testing the levels of hs-CRP and T-LS.ResultsCompared with control group,the level of CD3+ CD4+ T lymphocyte in OSAHS group was decreased with statistical significance,but the levels of CD3+,CD3+ CD8+ and CD4+/CD8+ T lymphocyte had no significant difference (P>0.05).ConclusionsChanges of T-LS level in OSAHS patients may lead to decline of immunologic function in different levels.

        【Key words】obstructive sleep apnea hypopnea syndrome;T lymphocyte subsets;hypersensitive-C reactive protein

        【中圖分類號(hào)】R 562

        【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

        doi:10.3969/j.issn.1672-8467.2016.01.009

        (收稿日期:2015-06-13;編輯:王蔚)

        福建省自然科學(xué)基金 (2013J01390)

        △Corresponding authorE-mail:dreamingkoala@126.com

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