魯永蘭， 楊文秀*

(貴州醫(yī)科大學(xué) 病理學(xué)教研室， 貴州 貴陽(yáng)　550004)

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B細(xì)胞特異性激活蛋白在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的表達(dá)*

魯永蘭**， 楊文秀***

(貴州醫(yī)科大學(xué) 病理學(xué)教研室， 貴州 貴陽(yáng)550004)

[摘要]目的： 觀察B細(xì)胞特異性激活蛋白(PAX5)在神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(NEN)中的表達(dá)。方法： 經(jīng)證實(shí)為NEN病例標(biāo)本56例，用免疫組化SP法檢測(cè)其石蠟包埋腫瘤組織中PAX5和Ki67表達(dá)，比較PAX5在不同腫瘤大小(腫塊直徑≤2 cm或>2 cm)、Ki67表達(dá)率(Ki67≤20%或>20%)及TNM分期(早期或晚期)中的表達(dá)情況。結(jié)果： PAX5在Ki67>20%病例中的陽(yáng)性表達(dá)率(59.52%)高于Ki67≤20%病例(21.43%)，在晚期病例(62.16%)高于早期病例(26.32%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在不同腫塊直徑病例中的陽(yáng)性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.78)。結(jié)論： PAX5在NEN中有一定表達(dá)，表達(dá)與腫瘤增殖活性(Ki67表達(dá)率)及TNM分期有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]B細(xì)胞特異性激活蛋白； 神經(jīng)內(nèi)分泌； 腫瘤； 免疫組織化學(xué)； 染色法，SP

神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(neuroendocrine neoplasm，NEN)是一種來源于具有激素分泌功能的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的異質(zhì)性腫瘤。在過去30年間，其發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)[1-3]。B細(xì)胞特異性激活蛋白(B cell-specific activator protein, BSAP)又名PAX5，是一種B細(xì)胞發(fā)育和分化的重要轉(zhuǎn)移因子。目前研究熱點(diǎn)主要集中在與B細(xì)胞相關(guān)淋巴瘤，如急性B淋巴母細(xì)胞性淋巴瘤和慢性淋巴細(xì)胞白血病等[4-5]。近來關(guān)于PAX5表達(dá)對(duì)NEN的影響亦有報(bào)道。有研究發(fā)現(xiàn)，在神經(jīng)母細(xì)胞瘤和小細(xì)胞肺癌(small cell lung carcinoma, SCLC)中，PAX5基因敲除會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生存能力嚴(yán)重下降[6-7]。PAX5不僅支持癌細(xì)胞生存，也有助于癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。本研究通過檢測(cè)不同部位的NEN 中PAX5的表達(dá)，分析其與腫瘤臨床分期、腫塊大小及腫瘤增殖活性(Ki67)的關(guān)系。

1對(duì)象與方法

1.1臨床資料

收集2009年1月～2013年7月經(jīng)病理證實(shí)為NEN的標(biāo)本56例，男性37例，女性19例；年齡20～86歲，中位年齡52歲。NEN TNM臨床分期為Ⅰ期3例，Ⅱ期16例，Ⅲ期20例及Ⅳ期17例；發(fā)生部位為胃10例，腸8例，胰腺1例，肺22例，宮頸3例，卵巢2例，食道2例，鼻咽3例，皮膚4例及膀胱1例。

1.2方法

PAX5和 Ki67蛋白的表達(dá)，采用 SP法檢測(cè)，取4 μm厚打膠白片，經(jīng)烘烤、脫蠟、抗原修復(fù)、血清封閉后，加入一抗(PAX5稀釋度1∶25，Ki67稀釋度1∶100)，4 ℃孵育過夜， 0.01 mol/L的PBS(pH7.2)清洗3次，加入二抗(通用型)37 ℃孵育30 min，0.01 mol/L的PBS(pH7.2)清洗3次，DAB染色，自來水沖洗、脫水透明、封片。以0.01 mol/L的PBS(pH7.2)代替一抗作為空白對(duì)照，以組織中的淋巴細(xì)胞作為PAX5內(nèi)對(duì)照。結(jié)果判斷：PAX5和Ki67陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞核，陽(yáng)性染色為細(xì)胞內(nèi)具有清晰可見和定位準(zhǔn)確的棕黃色顆粒。

1.3觀察指標(biāo)

以腫塊最大直徑(腫塊直徑≤2 cm與>2 cm)、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率(Ki67≤20%與>20%)及TNM分期(早期與晚期)為判斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)NEN病例進(jìn)行分組，比較PAX5蛋白在相應(yīng)兩組病例中的表達(dá)情況。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)(%)表示，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

經(jīng)SP染色后，PAX5和Ki67陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞核，核內(nèi)可見清晰的棕黃色顆粒(圖1)。Ki67>20%病例的PAX5陽(yáng)性表達(dá)率高于Ki67≤20%病例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.09，P=0.01)；晚期(Ⅲ和Ⅳ期)病例的PAX5陽(yáng)性表達(dá)率高于早期(Ⅰ期和Ⅱ期)病例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.45，P=0.01)；腫塊直徑≤2 cm病例的PAX5陽(yáng)性表達(dá)率和腫塊直徑>2cm病例比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.08，P=0.78)。見表1。

注：A為 PAX5，B為Ki67≤20%，C為 Ki67>20%圖1　NEN中PAX5與Ki67的表達(dá)(SP法，×400)Fig.1　Expression of PAX5 and Ki67 in NENs of stomach

比較參數(shù)nPAX5表達(dá)(n,%)陽(yáng)性陰性χ2P腫塊最大徑(cm) ≤22110(47.62)11(52.38)0.080.78 >23518(51.43)17(48.57)Ki67表達(dá) ≤20%143(21.43)11(78.57)6.090.01 >20%4225(59.52)17(40.48)TNM分期 Ⅰ期和Ⅱ期195(26.32)14(73.68)6.450.01 Ⅲ期和Ⅳ期3723(62.16)14(37.84)

3討論

PAX是一類由9個(gè)基因組成的高度保守的、對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞分化及腫瘤形成具有重要調(diào)控作用的一組基因控制家族。PAX5主要對(duì)B細(xì)胞特異性結(jié)合蛋白進(jìn)行編碼，是一種B細(xì)胞發(fā)育和分化的重要轉(zhuǎn)移因子[8]。目前研究熱點(diǎn)主要集中在與B細(xì)胞相關(guān)淋巴瘤，如慢性淋巴細(xì)胞白血病和霍奇金淋巴瘤等。近來已有學(xué)者關(guān)注到PAX5對(duì)NEN的影響。Nguyen等[9]檢測(cè)了53例來自不同部位的小細(xì)胞癌PAX5蛋白，發(fā)現(xiàn)其陽(yáng)性率為79.2%。本研究采用SP法檢測(cè)56例NEN中PAX5蛋白表達(dá)情況，分析PAX5表達(dá)與本組病例部分臨床病理特征的關(guān)系;結(jié)果發(fā)現(xiàn)PAX5表達(dá)與腫瘤大小無明顯關(guān)系(P>0.05)，而與Ki67指數(shù)及腫瘤臨床分期密切相關(guān)(P<0.05);PAX5的陽(yáng)性表達(dá)在Ki67>20%的NEN病例高于Ki67≤20%的病例；在晚期NEN病例高于早期病例，這與Panzuto等[10]的研究結(jié)果基本一致。在NEN的診斷中，國(guó)際公認(rèn)的最可靠的標(biāo)記是CgA、Syn和CD56等[11]。本研究結(jié)果表明，PAX5在NEN中有一定程度表達(dá)，表達(dá)與腫瘤增殖活性(Ki67表達(dá)率)、TNM分期有關(guān)。提示PAX5陽(yáng)性表達(dá)可能是NEN病理診斷的重要補(bǔ)充。關(guān)于PAX5表達(dá)對(duì)NENs臨床病理特征和預(yù)后的影響的機(jī)制有待于進(jìn)一步的深入研究。

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(2016-02-25收稿，2016-04-30修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 劉華

Expression of PAX5 in Neuroendocrine Neoplasms

LU Yonglan, YANG Wenxiu

(DepartmentofPathology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004 ,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To observe the expression of B cell-specific activator protein (PAX5) in neuroendocrine neoplasms(NENs). Methods: 56 confirmed NEN cases specimens were enrolled in this study. Immunohistochemical SP method was adopted to detect the expression of Pax5 and Ki67 in paraffin embedding tumor tissues. The positive expression rates of Pax5 was compared in different tumor size (mass diameter≤2 cm or>2 cm), in different Ki67 expression rates (Ki67≤20% or>20%) and in different TNM stage (early or late stage). Results: The positive expression rate of Pax5 in Ki67>20% cases was 59.52%, significantly higher than 21.43% in Ki67 ≤ 20% cases(P<0.05). The positive expression rate of Pax5 in late stage was 62.16%, significantly higher than 26.32% in early stage(P<0.05).There was no statistically significant difference in positive expression rate of Pax5 between different tumor size (P=0.78). Conclusion: There is a certain degree of expression of Pax5 in NENs, which is related to the proliferation activity of the tumor (Ki67 expression rate) and the TNM stage.

[Key words]B cell-specific activator protein; neuroendocrine; neoplasm; immunohistochemistry; staining method，SP

*[基金項(xiàng)目]國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81100299)

[中圖分類號(hào)]R736

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1000-2707(2016)05-0567-03

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.05.018

**貴州醫(yī)科大學(xué)2012級(jí)碩士同等學(xué)歷研究生，現(xiàn)在安順市人民醫(yī)院工作

***通信作者 E-mail:ypq1964@163.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-05-13網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160513.2059.028.html