蔣莉 陳春華 濮翔科

分析HBsAg與抗-HBs雙陽(yáng)患者血清模式與HBV DNA載量的臨床意義

蔣莉 陳春華 濮翔科

目的 探討乙型肝炎病毒（HBV）感染者乙型肝炎表面抗原（HBsAg）與乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）同時(shí)陽(yáng)性的血清學(xué)模式的基因變異與HBV DNA的關(guān)系并探究其原因及臨床意義。方法 乙肝HBV血清學(xué)標(biāo)志物五項(xiàng)指標(biāo)(HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb)采用時(shí)間分辨法定量測(cè)定，HBV DNA含量的檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)。結(jié)果 本研究入選的50例HBsAg與抗HBs雙陽(yáng)患者血清中共出現(xiàn)4種HBV血清學(xué)模式:(Ⅰ) HBsAg、抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc陽(yáng)性模式占42.0%，HBV DNA陽(yáng)性率占42.8%；(Ⅱ) HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBc陽(yáng)性模式占32.0%，HBV DNA陽(yáng)性率占70.5%；(Ⅲ)HBsAg、抗-HBs、抗-HBc陽(yáng)性模式占24.0%，HBV DNA陽(yáng)性率占25.0%；(Ⅳ)HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc陽(yáng)性模式占2.0%，HBV DNA陽(yáng)性率占100.0%。其中含有HBeAg陽(yáng)性的Ⅱ、Ⅳ模式與Ⅰ、Ⅲ模式的HBV DNA陽(yáng)性率分別作兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 HBsAg與抗HBs雙陽(yáng)患者血清中伴有HBeAg陽(yáng)性者血清中HBV DNA載量最高，HBsAg與抗-HBs雙陽(yáng)模式是免疫系統(tǒng)的個(gè)性化表現(xiàn)，應(yīng)引起臨床的重視。

乙肝；表面抗原；表面抗體；乙肝病毒(HBV)；基因變異

診斷HBV感染的重要標(biāo)志是患者感染了乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。感染了乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的患者，可發(fā)生急、慢性乙型肝炎。乙型肝炎經(jīng)過(guò)治療后數(shù)周有時(shí)HBsAg會(huì)轉(zhuǎn)陰，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的窗口期血清內(nèi)會(huì)出現(xiàn)乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）。無(wú)癥狀HBV攜帶者和乙型肝炎患者均有可能會(huì)發(fā)生HBsAg和抗-HBs同時(shí)陽(yáng)性的現(xiàn)象（簡(jiǎn)稱雙陽(yáng)現(xiàn)象）。經(jīng)過(guò)治療HBV感染者和無(wú)癥狀HBV如果能完全清除病毒,那么HBsAg就會(huì)逐漸消失,自體血清中會(huì)逐漸產(chǎn)生抗-HBs，或在抗-HBs逐漸升高時(shí)HBsAg接近消失前,抗-HBs陽(yáng)性意味著HBsAg可能已被清除,人體已產(chǎn)生了保護(hù)作用[1],患者均出現(xiàn)抗HBc陽(yáng)性,有的患者出現(xiàn)HBeAg或抗HBe陽(yáng)性，部分表現(xiàn)為血清中HBV DNA陽(yáng)性，本研究旨在說(shuō)明在當(dāng)臨床檢驗(yàn)測(cè)定HBV抗原-抗體標(biāo)志物出現(xiàn)HBsAg與抗HBs雙陽(yáng)性時(shí)，患者血清中伴有HBeAg陽(yáng)性者血清中HBV DNA陽(yáng)性率最高；伴有HBeAg陽(yáng)性并伴有抗HBe陽(yáng)性者HBV DNA陽(yáng)性率次高，可能在藥物、抗病毒治療中或其他因素的作用下發(fā)生了基因突變。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年1月～2014年4月江蘇省常州市第三人民醫(yī)院收治乙肝HBsAg與抗-HBs雙陽(yáng)性住院患者50例為研究對(duì)象，診斷符合標(biāo)準(zhǔn)[2],其中男20例，女30例，年齡25～78歲，平均(45.2±16.3)歲。

1.2 方法與儀器 HBV DNA熒光定量檢測(cè)儀器為美國(guó)應(yīng)用生物公司ABI 7500基因擴(kuò)增儀，由達(dá)安基因生物技術(shù)有限公司提供試劑盒，以IU/mL表示DNA的單位含量，檢測(cè)時(shí)102IU／mL作為判斷陽(yáng)性。采用儀器為AD 1235全自動(dòng)熒光免疫時(shí)間分辨儀，全自動(dòng)時(shí)間分辨法，用定量測(cè)定的方法檢測(cè)HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg、HBeAb，由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供試劑盒。

1.3 結(jié)果判斷 HBsAg≥0.6 ng/mL為陽(yáng)性；抗-HBs≥1 2 m I U/m L為陽(yáng)性；H B e A g≥0.5 P E I U/m L為陽(yáng)性；抗-HBe≥10 DRU/mL為陽(yáng)性；抗-HBc≥0.1 DRU/mL為陽(yáng)性；HBV DNA≥102IU/mL為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

其中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ模式分別占有42.0%、32.0%、24.0%、2.0%,含有HBeAg陽(yáng)性的Ⅱ模式與Ⅰ、Ⅲ模式的HBV DNA陽(yáng)性率分別作兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Ⅳ模式與Ⅰ、Ⅲ模式的HBV DNA陽(yáng)性率分別作兩兩比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 50例HBsAg和抗-HBs雙陽(yáng)性患者HBV血清學(xué)模式和HBV DNA測(cè)定結(jié)果（陽(yáng)性＋，陰性－）

3 討論

出現(xiàn)HBsAg和抗-HBs共存的現(xiàn)象是由于當(dāng)HBV基因發(fā)生突變時(shí)，其編碼的氨基酸發(fā)生改變或影響蛋白翻譯后的修飾，導(dǎo)致HBsAg抗原性發(fā)生改變，突變后的抗原無(wú)法與原先產(chǎn)生的抗體結(jié)合。HBV感染的特異性指標(biāo)就是表現(xiàn)為患者血清HBsAg陽(yáng)性，HBsAb的產(chǎn)生是由HBsAg暴露的抗原決定簇刺激機(jī)體產(chǎn)生的一種特異性保護(hù)抗體，一般在HBV感染機(jī)體使用了藥物等至HBsAg消失后或健康帶病毒者注射乙肝疫苗后出現(xiàn)陽(yáng)性，HBsAb是一種保護(hù)性抗體，是HBV感染后有免疫力及終止的標(biāo)志，它能中和HBsAg，具有防御HBV感染的作用。理論上兩者是不會(huì)同時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性，但我們?cè)谂R床實(shí)際檢測(cè)中確發(fā)現(xiàn)了有一些患者表現(xiàn)為兩者同時(shí)存在。據(jù)報(bào)道，國(guó)內(nèi)采用酶免法，HBsAg與HBsAb同時(shí)檢出的病例約占總送檢標(biāo)本的0.3%[3]，本研究顯示，在HBV感染者中，確實(shí)存在HBsAg與HBsAb同時(shí)陽(yáng)性的現(xiàn)象，而且占有HBsAg陽(yáng)性患者一定的比例。本研究中，血清學(xué)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ模式的HBV DNA陽(yáng)性率出現(xiàn)了42.8%、70.5%、25.0%和100.0%，HBsAg與抗HBs雙陽(yáng)患者血清中有HBeAg陽(yáng)性并伴有抗Hbe陽(yáng)性的Ⅱ模式血清中HBV DNA陽(yáng)性率70.5%，次于有HBeAg陽(yáng)性并伴有抗HBe陰性的Ⅳ模式(HBV DNA陽(yáng)性率100.0%)，機(jī)體感染HBV后產(chǎn)生抗-HBs，在機(jī)體的免疫壓力、藥物或其他因素的作用下HBV可發(fā)生基因突變。Ⅱ、Ⅳ模式分別與Ⅰ、Ⅲ模式相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明有病毒復(fù)制和伴有基因突變，少數(shù)慢性乙型肝炎患者可出現(xiàn)HBsAg和抗-HBs陽(yáng)性[4]；不同亞型HBV的感染,針對(duì)于免疫優(yōu)勢(shì)表位“a”表位的抗體可對(duì)所有亞型HBV的感染提供保護(hù)性免疫，但其他亞型抗體并無(wú)交叉保護(hù)性[5]；感染過(guò)HBV或接種乙型肝炎疫苗后，雖有正常的HBsAb應(yīng)答，由于機(jī)體的免疫力不同，仍能感染a決定簇變異的免疫逃逸病毒株，從而產(chǎn)生了HBsAg與HBsAb并存的現(xiàn)象；由于干擾素既能抑制病毒復(fù)制，又能調(diào)節(jié)宿主免疫，但由于s基因的變異，對(duì)于干擾素治療的慢性乙肝患者，在治療中雖出現(xiàn)會(huì)HBsAb血清轉(zhuǎn)換，也會(huì)出現(xiàn)不能將HBsAg清除[6]。本研究中有產(chǎn)生了抗HBe，使HBV DNA陽(yáng)性率有所下降，如Ⅱ模式血清中HBV DNA陽(yáng)性率70.5%，較Ⅳ模式(HBV DNA陽(yáng)性率100.0%)有下降，因此目前臨床分析和判斷乙型肝炎患者病程和傳染性的重要指標(biāo)是依靠乙型肝炎病毒血清免疫學(xué)標(biāo)志檢查，乙型肝炎病毒血清免疫學(xué)檢測(cè)實(shí)際檢測(cè)的是人體對(duì)乙型肝炎病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)[7]。檢測(cè)HBV DNA水平的臨床意義是可以反映體內(nèi)HBV復(fù)制情況，是評(píng)價(jià)藥物抑制HBV效果的有效方法[8]。因此，HBsAb和HBsAg同時(shí)陽(yáng)性，與HBV DNA載量相互關(guān)聯(lián)，是有多種原因引起的，是免疫系統(tǒng)的個(gè)性化表現(xiàn)，也是病毒基因變異、病毒復(fù)制的表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)應(yīng)盡量避免應(yīng)檢測(cè)因素引起的誤差，進(jìn)一步進(jìn)行HBV基因測(cè)序，以確定HBV的基因變異，臨床治療過(guò)程中應(yīng)注意抗病毒治療以后乙肝患者的基因突變。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.17.027

江蘇 213001 江蘇省常州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 （蔣莉 陳春華濮翔科）

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