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        共振瑞利散射法測定硫酸卡那霉素

        2016-06-12 06:59:44蔡雪語
        化學(xué)與生物工程 2016年5期

        劉 紅,徐 紅,徐 科,蔡雪語

        (1.貴州醫(yī)科大學(xué),貴州 貴陽 550000;2.貴州師范學(xué)院,貴州 貴陽 550004)

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        共振瑞利散射法測定硫酸卡那霉素

        劉紅1,徐紅1,徐科2,蔡雪語1

        (1.貴州醫(yī)科大學(xué),貴州 貴陽 550000;2.貴州師范學(xué)院,貴州 貴陽 550004)

        摘要:基于在pH值3.78~6.59的B-R緩沖溶液中,四碘熒光素鈉(ST)與硫酸卡那霉素(KANA)結(jié)合生成離子締合物使溶液共振瑞利散射(RRS)增強(qiáng)的原理,建立了共振瑞利散射法測定KANA的新方法。在其最大共振散射波長576 nm處測定共振瑞利散射強(qiáng)度(IRRS),并研究了表面活性劑和共存物質(zhì)對KANA測定的影響。結(jié)果表明:KANA濃度在0.04~1.60 mg·L-1范圍內(nèi)與ΔIRRS(樣品與空白溶液的IRRS值之差)呈線性關(guān)系,方法的檢出限為0.018 mg·L-1。用于KANA注射液的測定,回收率為92.5%~96.5%。

        關(guān)鍵詞:共振瑞利散射法;硫酸卡那霉素(KANA);四碘熒光素鈉(ST)

        硫酸卡那霉素(kanamycinsulfate,KANA)屬氨基糖苷類抗生素,是臨床上重要的抗感染藥物[1]。但KANA有一定程度的耳毒性和腎毒性,這往往與使用劑量有關(guān),臨床使用時有時還需監(jiān)測血藥濃度,因此建立一種快速、準(zhǔn)確的KANA定量測定方法一直是分析工作者研究的熱點(diǎn)。KANA的測定方法有微生物法[2]、分光光度法[3]、熒光光度法[4]、電化學(xué)法[5]、化學(xué)發(fā)光法[6]、高效液相色譜法[7]、共振瑞利散射法[8-9]等。

        共振瑞利散射(RRS)作為一種高靈敏和簡便的光譜技術(shù)已用于蛋白質(zhì)[10]、核酸[11]、藥物[12]、金屬離子[13]、表面活性劑[14]等的分析,但用四碘熒光素鈉(ST)作探針檢測KANA的共振瑞利散射法目前未見報道。在B-R緩沖溶液中,試驗了氨基糖苷類抗生素(KANA、硫酸慶大霉素、鏈霉素)與ST反應(yīng),發(fā)現(xiàn)只有KANA-ST體系能產(chǎn)生明顯的RRS增強(qiáng)效應(yīng),從而建立了一種測定KANA的新方法。

        1實驗

        1.1試劑與儀器

        ST,上?;瘜W(xué)試劑廠;KANA標(biāo)準(zhǔn)品,生化試劑,Solarbio公司;其余試劑均為分析純,實驗用水為二次蒸餾水。

        Caryeclipse型熒光分光光度計,美國瓦里安公司。

        1.2方法

        1.2.1KANA標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

        稱取0.1000gKANA,用二次蒸餾水溶解,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中定容,于冰箱中4 ℃保存,備用。

        1.2.2KANA含量的測定

        2結(jié)果與討論

        2.1KANA-ST體系的RRS光譜(圖1)

        圖1 KANA-ST體系的RRS光譜

        由圖1可知,KANA、ST的RRS峰均較弱,但KANA與ST結(jié)合后,引起溶液在250~700 nm范圍內(nèi)RRS增強(qiáng),并且在一定范圍內(nèi),隨著KANA加量的增大,576 nm、370 nm處散射峰的RRS強(qiáng)度也隨之增強(qiáng)。最大散射峰位于576 nm處,故在576 nm處測定ΔIRRS,體系的靈敏度最高。

        2.2反應(yīng)條件的選擇

        2.2.1緩沖溶液pH值

        2.2.2ST溶液用量

        實驗表明,在KANA濃度為1.2 mg·L-1、2.5×10-4mol·L-1ST溶液用量為0.80~2.00 mL時,ΔIRRS最大。故選擇ST溶液用量為1.50 mL。

        2.2.3穩(wěn)定性實驗

        在反應(yīng)體系溫度分別為5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃下進(jìn)行測定,ΔIRRS基本不變,但進(jìn)一步升高溫度,ΔIRRS降低。故實驗選擇在室溫(20 ℃)下進(jìn)行。

        室溫下按1.2.2方法加入溶液,計時測定,每間隔2 min記錄一次RRS強(qiáng)度。結(jié)果表明,在10~82 min內(nèi),ΔIRRS基本不變。故實驗選擇在反應(yīng)16 min時進(jìn)行測定。

        2.2.4電解質(zhì)NaCl的影響

        固定KANA濃度為1.2 mg·L-1,加入不同體積的0.50 mol·L-1NaCl溶液后進(jìn)行測定。結(jié)果表明:ΔIRRS受NaCl的影響較小。當(dāng)加入NaCl溶液0~2.0 mL時, ΔIRRS基本不變;加入NaCl溶液超過2.0 mL時,ΔIRRS降低。

        2.3干擾實驗

        2.3.1表面活性劑對KANA測定的影響(圖2)

        圖2 表面活性劑對KANA測定的影響

        由圖2可知,在KANA-ST體系加入不同濃度的聚乙烯醇、CTMAB、SDS后,均使ΔIRRS下降,表明表面活性劑對該體系無增敏作用。

        2.3.2共存物質(zhì)對KANA測定的影響

        2.4工作曲線及檢出限

        按1.2.2方法,分別在576 nm、370 nm下測定ΔIRRS,以ΔIRRS對KANA濃度作圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,擬合回歸方程,結(jié)果見表1。

        表1KANA的標(biāo)準(zhǔn)曲線

        Tab.1 Standard curves of KANA

        2.5樣品分析

        取一定量的KANA注射液(規(guī)格:2 mL∶0.5 g,西南藥業(yè)股份有限公司)稀釋后,按1.2.2方法測定KANA含量,并進(jìn)行加標(biāo)回收實驗,結(jié)果見表2。

        表2樣品中KANA的測定結(jié)果(n=7)

        Tab.2Determination results of KANA in the samples(n=7)

        樣品含量/gRSD/%加入量/g檢出量/g回收率/%0.4721.540.2000.66596.50.4641.320.2000.64992.5

        3結(jié)論

        基于在pH值3.78~6.59的B-R緩沖溶液中,四碘熒光素鈉與硫酸卡那霉素結(jié)合生成離子締合物使溶液共振瑞利散射增強(qiáng)的原理,建立了共振瑞利散射法測定硫酸卡那霉素的新方法。硫酸卡那霉素濃度在0.04~1.60 mg·L-1范圍內(nèi)與ΔIRRS(樣品與空白溶液的IRRS值之差)呈線性關(guān)系,方法的檢出限為0.018 mg·L-1。用于硫酸卡那霉素注射液的測定,回收率為92.5%~96.5%。

        參考文獻(xiàn):

        [1]趙敏.氨基糖苷類抗生素的發(fā)展現(xiàn)狀和展望[J].中國抗生素雜志,1999,24(4):319-320.

        [2]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中國藥典(第二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000:312.

        [3]徐紅,劉紹璞,羅紅群.偶氮藍(lán)分光光度法測定卡那霉素[J].理化檢驗-化學(xué)分冊,2007,43(9):729-731.

        [4]陳培珍,林旭聰,馬春華,等.熒光素二聚體熒光探針測定卡那霉素的研究[J].分析測試學(xué)報,2008,27(12):1367-1370.

        [5]王學(xué)亮,趙杰.卡那霉素與苯胺藍(lán)反應(yīng)的電化學(xué)研究及其應(yīng)用[J].理化檢驗-化學(xué)分冊,2009,45(2):207-209.

        [6]陳曉惠,杜建修.硫酸卡那霉素化學(xué)發(fā)光新方法的研究[J].分析試驗室,2010,29(8):75-78.

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        [8]馬璐,溫桂清,劉慶業(yè),等.適配體修飾納米金做共振瑞利散射光譜探針檢測妥布霉素[J].光譜學(xué)與光譜分析,2014,34(9):2481-2484.

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        [11]徐紅,劉紹璞,羅紅群.鹽酸吖啶黃-脫氧核糖核酸反應(yīng)體系的共振瑞利散射及其應(yīng)用[J].理化檢驗-化學(xué)分冊,2010,46(1):5-8.

        [12]譚建紅,陳杰,江虹.橙黃(Ⅳ)探針共振瑞利散射光譜法測定大觀霉素[J].分析科學(xué)學(xué)報,2014,30(4):557-559.

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        [14]涂波,徐紅,劉紅.十二烷基苯磺酸鈉-硫酸耐而藍(lán)體系的共振瑞利散射光譜及其分析應(yīng)用[J].化學(xué)研究與應(yīng)用,2012,24(3):418-421.

        Determination of Kanamycin Sulfate by Resonance Rayleigh Scattering Method

        LIU Hong1,XU Hong1,XU Ke2,CAI Xue-yue1

        (1.GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550000,China;2.GuizhouEducationUniversity,Guiyang550004,China)

        Abstract:Based on sodium tetraiodofluorescein(ST) reacting with kanamycin sulfate(KANA) to form an ion association complex,which can enhance the intensity of resonance Rayleigh scattering(RRS),in a B-R buffer solution with pH value of 3.78~6.59,a new resonance Rayleigh scattering method for determination of KANA was developed.The intensity of resonance Rayleigh scattering(IRRS) was measured at the wavelength of 576 nm.The effects of surfactant and coexistent substances on determination of KANA were studied.Results showed that,there was a linear relationship between ΔIRRS(difference between IRRSvalues of sample and blank) and KANA concentration in the ranges of 0.04~1.60 mg·L-1,with limits of detection of 0.018 mg·L-1.The proposed method was applied to the determination of KANA in the sodium injection solution.The recoveries were 92.5%~96.5%.

        Keywords:resonance Rayleigh scattering(RRS);kanamycin sulfate(KANA);sodium tetraiodofluorescein(ST)

        基金項目:貴州省科技廳聯(lián)合基金資助項目(黔科合LG[2012]032號)

        收稿日期:2016-01-13

        作者簡介:劉紅(1961-),女,高級實驗師,從事化學(xué)實驗教學(xué),E-mail:san.san.liu@163.com。

        doi:10.3969/j.issn.1672-5425.2016.05.017

        中圖分類號:O 657.31

        文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

        文章編號:1672-5425(2016)05-0065-03

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