劉淑慧，周宋霞，謝澳斯，黃燕鵬，陳廣燦**

(1.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室，廣東 汕頭 515041 2.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胃腸外科，廣東 汕頭 515041)

高發(fā)區(qū)賁門癌KAI1/ CD82的表達(dá)及意義*

劉淑慧1，周宋霞1，謝澳斯2，黃燕鵬2，陳廣燦2**

(1.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室，廣東 汕頭 515041 2.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胃腸外科，廣東 汕頭 515041)

摘 要:目的:探討KAI1/ CD82蛋白在賁門癌組織中的表達(dá)及其與賁門癌臨床病理特征的關(guān)系。方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測46例賁門癌組織和相應(yīng)標(biāo)本的46例非腫瘤性粘膜組織KAI1/ CD82蛋白的表達(dá)。結(jié)果:KAI1/ CD82蛋白在癌組織中表達(dá)較非腫瘤性粘膜明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。KAI1/ CD82蛋白表達(dá)與賁門癌患者的年齡顯著性相關(guān)(P＜0.05)，與其它臨床病理特征沒有顯著性關(guān)系(P＞0.05)。結(jié)論:KAI1/ CD82蛋白的表達(dá)可能參與了賁門癌的發(fā)生發(fā)展。檢測KAI1/ CD82表達(dá)有助于進(jìn)一步了解賁門癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。

關(guān)鍵詞:賁門癌； 免疫組織化學(xué)法； 非腫瘤性粘膜

**通訊作者

Key words: Gastric cardia cancer； Immunohistochemistry； Non-tumor gastric tissue

我國食管癌賁門癌高發(fā)區(qū)存在著以華北太行山、陜豫秦嶺、鄂豫皖大別山、川北、閩粵、蘇北為主的六大地理分布區(qū)域。近15年來的流行病學(xué)資料調(diào)查顯示在傳統(tǒng)的食管癌高發(fā)區(qū)食管癌的發(fā)病呈現(xiàn)下降趨勢，而與食管癌地域分布一致的賁門癌發(fā)病率則呈顯上升趨勢[1]。地處閩粵交界的廣東潮汕地區(qū)是我國南方沿海的食管癌、賁門癌高發(fā)區(qū)，流行病學(xué)資料調(diào)查顯示1995年至2004年賁門癌的發(fā)病率僅次于食管癌居第二位[2]。KAI1/ CD82表達(dá)與高發(fā)區(qū)賁門癌的關(guān)系報道較少。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測潮汕高發(fā)區(qū)賁門癌組織和相應(yīng)標(biāo)本非腫瘤性粘膜KAI1/ CD82的表達(dá)情況，探討其表達(dá)與賁門癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1臨床資料:收集汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2011 年9月至2013年1月收治進(jìn)行外科手術(shù)治療的賁門癌病例46例，分別取癌組織和距離癌組織5cm以上非腫瘤性粘膜標(biāo)本。建立患者臨床病理資料數(shù)據(jù)庫，包括年齡、性別、腫塊大小、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。

1.2方 法

1.2.1試劑:鼠抗人KAI1/ CD82單克隆抗體(Senta Cruze)及免疫組化二步法試劑盒(福州邁新試劑公司)，AEC顯色，抗體均用PBS稀釋。

1.2.2免疫組化染色:采用EnVision二步法進(jìn)行免疫組化染色。高壓修復(fù)，一抗(工作濃度1∶100)4℃冰箱過夜，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(Ig-HRP)，室溫孵育30min，PBS沖洗后AEC顯色，蘇木素復(fù)染。以切片中淋巴細(xì)胞胞膜著色為陽性內(nèi)對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3結(jié)果判定:顯微鏡下觀察，KAI1/ CD82表達(dá)定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿，陽性細(xì)胞染色呈棕黃或棕褐色。陽性染色細(xì)胞數(shù)評分標(biāo)準(zhǔn):0分為陰性，1分為陽性細(xì)胞數(shù)≤25%，2分為26%～50%，3分為51%～75%，4分為＞75%；陽性細(xì)胞的染色強(qiáng)度評分:0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。兩項得分的乘積0為陰性(-)，≤2分為弱陽性(+)，4～8分為陽性(++)，≥8分為強(qiáng)陽性(+++)。在統(tǒng)計學(xué)分析時，為避免不同病理醫(yī)生之間結(jié)果判定的差異，將染色結(jié)果分成兩組進(jìn)行統(tǒng)計，分別是低表達(dá)組(陰性和1+)以及高表達(dá)組(2+和3+)[3]。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理:采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件(SPSS for Windows 16.0)對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。組間定性資料比較采用X2檢驗(yàn)。繪制患者的年齡和腫瘤最長徑ROC曲線以確定年齡和腫瘤最長徑分組的界值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1免疫組化檢測:KAI1/ CD82蛋白在不同賁門組織中的表達(dá):KAI1/ CD82蛋白主要在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中表達(dá)。KAI1/ CD82蛋白在非腫瘤性粘膜中陽性表達(dá)率65.22%(1+以上)，其中高表達(dá)率為17.39%(2+和3 +)，在賁門癌組織中的陽性表達(dá)率為63.04%，其中高表達(dá)率為36.96%。KAI1/ CD82在非腫瘤性粘膜和賁門癌中的陽性率相近，但是在非腫瘤性粘膜中多數(shù)為低表達(dá)，而在賁門癌中的高表達(dá)率明顯升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P =0.035)(表1，圖1，2)。

圖1　非腫瘤性粘膜KAI1/ CD82的表達(dá)(400×)

圖2　賁門癌組織KAI1/ CD82的表達(dá)(400×)

表1　非腫瘤性粘膜和賁門癌組織KAI1/ CD82表達(dá)比較

2.2年齡與腫瘤最長直徑ROC曲線繪制:利用Youden index法繪制患者的年齡和腫瘤最長徑ROC曲線( receiver operating characteristic curve，ROC curve)，結(jié)果顯示當(dāng)年齡＞56歲、最長徑≤5cm時，尤登指數(shù)分別是0.24和0.17為最大值，表明該點(diǎn)的敏感性和特異性均較好，故確定年齡和最長徑的切點(diǎn)值分別為56歲和5cm，利用這兩個切點(diǎn)值分組進(jìn)行卡方檢驗(yàn)(圖3，4)。

圖3　年齡ROC曲線

圖4　腫瘤最長徑ROC曲線

2.3KAI1/ CD82在賁門癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析:KAI1/ CD82的表達(dá)與患者的年齡相關(guān)(p = 0.028)，患者的年齡越大癌組織中KAI1/ CD82的表達(dá)越強(qiáng)，而與患者的性別、瘤體最長徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度等其它臨床病理因素?zé)o關(guān)(P＞0. 05)，見表2。

表2　KAI1/ CD82蛋白表達(dá)與賁門癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

瘤體最長徑　2.78　0.095 ≤5cm　17　13 ＞5cm　13　3分化程度　0.069　0.793高中分化　12　6低分化　19　8淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況　0.065　0.798 無14　5 有14　6

3 討 論

KAI1/ CD82基因最早由美國國立環(huán)境健康研究院(NIEHS) Dong等從人類染色體上分離，并將其命名為KAI1，該基因定位于人類染色體11P11.2上，其編碼蛋白由267氨基酸殘基組成，因該蛋白和已發(fā)現(xiàn)的CD82結(jié)構(gòu)相同，故kai-1基因又稱為KAI1/ CD82基因[4]。起初發(fā)現(xiàn)該基因的表達(dá)能抑制人前列腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，認(rèn)為該段基因具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的功能。后來的研究發(fā)現(xiàn)其他惡性腫瘤如:黑色素瘤、肺小細(xì)胞癌、膀胱癌、胃癌、大腸癌等均存在該基因失活或表達(dá)異常，且與腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。近年來胃癌與KAI1/ CD82表達(dá)關(guān)系的研究報道相對較多，但尚存在爭論[5]，將賁門癌作為獨(dú)立疾病研究KAI1/ CD82表達(dá)的報道較少。

本研究結(jié)果示KAI1/ CD82蛋白在賁門癌組織中的陽性表達(dá)率為63.04%(29/46)，在非腫瘤性粘膜中的陽性表達(dá)率為65.22%(30/46)，兩者的陽性率接近。但是賁門癌組織中kai-1/ cd82的表達(dá)較非腫瘤性粘膜明顯增強(qiáng)，兩者的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。該結(jié)果與在結(jié)腸癌和皮膚黑色素瘤中的研究結(jié)果相似。但是還有一些研究則得出與本結(jié)果相反的結(jié)論，認(rèn)為癌組織KAI1/ CD82蛋白的表達(dá)較正常組織下降。造成這種不同結(jié)果的原因尚不太清楚，可能與不同腫瘤細(xì)胞基因表達(dá)不同或標(biāo)本來源的人群差異等有關(guān)。

在本研究中我們采用ROC曲線法為患者的年齡和腫瘤的最長徑分組確定界值，使分界值同時具備較好的敏感性和特異性。我們發(fā)現(xiàn)KAI1/ CD82蛋白的表達(dá)與患者的年齡相關(guān)，較年輕的患者KAI1/ CD82蛋白的表達(dá)較弱。有研究認(rèn)為較年輕的賁門癌患者腫瘤生長速度較快，轉(zhuǎn)移發(fā)生較早，這是否與較年輕的患者KAI1/ CD82蛋白表達(dá)減弱有關(guān)還需進(jìn)一步的研究。我們還發(fā)現(xiàn)腫塊大、分化差的賁門癌KAI1/ CD82蛋白的表達(dá)弱，與胃癌研究結(jié)論相似，該結(jié)果僅表現(xiàn)為百分率的差異，今后應(yīng)擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證KAI1/ CD82蛋白的表達(dá)與賁門癌的演進(jìn)的關(guān)系。

參考文獻(xiàn):

[1] 陳志峰，董稚明.食管-胃交界腺癌地域發(fā)病特點(diǎn)與思考[J].中國腫瘤臨床，2011，38(1):57～60.

[2] Su M，Liu M，Tian DP，et al. Temporal trends of esophageal cancer during 1995-2004 in Nanao Island，an extremely high-risk area in China[J]. Eur Epidemiol 2007，22(1): 43～48.

[3] Chih-Hung Lin，Chia-Hsing Liu，Chien-Hui Wen，et al. Differential CD133 expression distinguishes malignant from benign papillary lesions of the breast[J]. Virchows Arch，2015，466(2):177～184.

[4] 杜興龍.Kai-1/ cd82基因在鼻咽癌組織中的表達(dá)和意義[J].2011.

[5] Knoener M，Krech T，Puls F，et al. Limited value of KAI1/ CD82 protein expression as a prognostic marker in human gastric cancer[J]. Dis Markers，2012，32(6):337～342.

Clinical Significance and Expressions of KAI1/ CD82 in Gastric Cardia Cancer

LIU Shuhui，ZHOU Songxia，et al
(Medical College of Shantou University，Guangdong Shantou 515041，China)

Abstract:Objective: To investigate the expression of KAI1/ CD82 in gastric cardia cancer tissue and its correlation with clinical pathological parameter. Method: KAI1/ CD82 expression level was detected in 46 cases of gastric cardia cancer tissue and the corresponding non-tumor gastric tissues by the immunohistochemistry. Result: The expression level of KAI1/ CD82 was significantly higher in gastric cardia cancer tissue compared with non-tumor gastric tissues(P＜0.05).The expression of KAI1/ CD82 had no relationship with histological grade.The expression of KAI1/ CD82 correlated with patient age(P＜0.05) and had no relationship with other pathological parameters. Conclusion: The expression of KAI1/ CD82 may participate in the development of gastric cardia cancer. Detecting KAI1/ CD82 will help to learn the mechanism of gastric cardia cancer development.

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

doi:10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.01.002

文章編號:1006-6233(2016)01-0004-04

*基金項目:廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項目資助，(編號:B201511)