龔由之，曾 智，江應(yīng)安

武漢大學(xué)人民醫(yī)院 1.感染科； 2.病理科，湖北 武漢 430060

CYP39A1基因在肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義

龔由之1，曾 智2，江應(yīng)安1

武漢大學(xué)人民醫(yī)院 1.感染科； 2.病理科，湖北 武漢 430060

目的 檢測人肝癌組織中CYP39A1基因的表達(dá)，探討其與人肝癌臨床病理特征的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組化SP法檢測32例肝癌組織及其相應(yīng)的癌旁正常組織中CYP39A1基因的表達(dá)。 結(jié)果 32例肝癌組織中CYP39A1基因陽性及強陽性表達(dá)率(25.00%)顯著低于其相應(yīng)的癌旁正常組織(93.75%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。32例肝癌組織中，CYP39A1基因表達(dá)程度與患者的性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、T分期(T1期+T2期,T3期+T4期)無關(guān)(P>0.05)，與患者年齡及腫瘤分化程度有關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 CYP39A1基因在肝癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，可能成為肝癌靶向治療的一個新靶點。

肝癌；癌旁正常組織；CYP39A1基因；免疫組化

原發(fā)性肝癌是世界上第五大常見腫瘤和第三大腫瘤死亡相關(guān)因素，起病隱匿，預(yù)后差。手術(shù)切除和肝移植等被認(rèn)為是肝癌根治性治療的手段，但大多數(shù)患者在初次診斷時，便已進(jìn)入肝癌晚期，因而失去了根治性治療的機會。細(xì)胞色素P450(CYP)是一種單加氧酶超家族，參與包括甾類激素、膽汁酸、膽固醇、藥物、毒素等物質(zhì)在內(nèi)的新陳代謝[1]。CYP39A1基因編碼7α甾類羥化酶，這種酶參與24-羥化膽固醇的代謝。有報道[2-3]CYP39A1在卵巢癌中高甲基化，并可作為膽管細(xì)胞癌判斷預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志。本研究通過檢測CYP39A1在肝癌組織中的表達(dá)，探討其與人肝癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 試劑、標(biāo)本來源及臨床、病理資料 免疫組化試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，兔抗CYP39A1多克隆抗體(ab129334)購自Abcam上海貿(mào)易有限公司。

收集2012年12月-2014年12月在武漢大學(xué)人民醫(yī)院手術(shù)切除的肝癌標(biāo)本32例，手術(shù)同時取距腫瘤邊緣2 cm的正常肝臟組織。術(shù)前均未做任何放、化療。

腫瘤分期根據(jù)UICC及AJCC 2002版進(jìn)行，所有標(biāo)本均經(jīng)病理診斷證實。每份標(biāo)本離體后立即以10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚4 μm，65 ℃烘烤備用。

1.2 免疫組化 采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶SP法檢測32例肝癌組織及其相應(yīng)的癌旁正常組織中CYP39A1基因的表達(dá)，一抗工作濃度1∶400，DAB顯色，操作嚴(yán)格按免疫組化試劑使用說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 隨機選取3個高倍鏡(40×)視野，根據(jù)陽性細(xì)胞染色強度綜合判定實驗結(jié)果：無陽性染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。判斷0分為陰性，1分為弱陽性，2分為陽性，3分為強陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 CYP39A1基因在肝癌組織及癌旁正常組織表達(dá)，及與肝癌臨床病理特征關(guān)系比較均采用χ2檢驗，統(tǒng)計分析由SPSS 19.0軟件完成，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CYP39A1基因在肝癌及其癌旁正常組織中的表達(dá) 32例肝癌組織中，CYP39A1陽性表達(dá)8例(25.00%)，其中強陽性0例；陰性及弱陽性表達(dá)24例(75.00%)，在其相應(yīng)的癌旁正常組織中，CYP39A1基因陽性表達(dá)30例(93.75%)，其中強陽性15例(46.88%)；CYP39A1基因陰性及弱陽性表達(dá)2例(6.25%)。32例肝癌組織中CYP39A1基因陽性、強陽性表達(dá)率顯著低于其相應(yīng)的癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在癌旁正常組織中CYP39A1表達(dá)時表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核膜均出現(xiàn)明顯棕褐色顆粒，陽性細(xì)胞占滿視野(見圖1)，CYP39A1基因在肝癌組織中表達(dá)時細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核均未出現(xiàn)明顯的棕黃色或棕褐色顆粒，鏡下視野呈陰性表達(dá)(見圖2)。在同一張組織切片中，肝癌及其癌旁正常組織中CYP39A1基因表達(dá)存在明顯差異(見圖3)。

圖1 癌旁正常組織免疫組化染色示CYP39A1表達(dá)陽性(40×)；圖2 肝癌組織免疫組化染色示CYP39A1表達(dá)陰性(40×)；圖3 同一份樣本中CYP39A1在肝癌組織及其癌旁正常組織中的表達(dá)(IHC 40×)

Fig 1 Immunohistochemical staining showed CYP39A1 (+) in the adjacent normal tissue (40×); Fig 2 Immunohistochemical staining showed CYP39A1 (-) in hepatocellular carcinoma tissue (40×); Fig 3 The expression of CYP39A1 in hepatocellular carcinoma tissue and adjacent normal tissue in the same sample (IHC 40×)

2.2 CYP39A1基因表達(dá)與肝癌臨床病理特征的關(guān)系 32例肝癌組織標(biāo)本中CYP39A1表達(dá)與患者性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及T分期無明顯相關(guān)性(P>0.05)，與患者年齡及病理分化程度有關(guān)(P<0.05，見表1)。

表1 CYP39A1基因的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

Tab 1 The relationship between the expression of CYP39A1 and the clinicopathological features

臨床病理因素CYP39A1基因的表達(dá)陽性陰性P值性別 男25817>0．05 女707年齡(歲) ≤551468<0．05 >5518216分化程度 高、中分化型23815<0．05 低分化型909淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有101>0．05 無31823

續(xù)表1

臨床病理因素CYP39A1基因的表達(dá)陽性陰性P值遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 有615>0．05 無26719T分期 T1?T219613>0．05 T3?T413211

3 討論

CYP39A1是細(xì)胞色素P450超家族成員，位于人類6號染色體上，含14個編碼外顯子，翻譯表達(dá)7α甾類羥化酶，參與24-羥化膽固醇的代謝[4]。研究者[5]通過對42例卵巢癌及子宮內(nèi)膜癌化療患者研究發(fā)現(xiàn)，CYP39A1單核酸多態(tài)性(rs7761731)與紫杉醇引起的嚴(yán)重中性粒細(xì)胞減少癥有關(guān)。相繼有學(xué)者[6]在對頭頸部腫瘤化療患者研究中也得出，CYP39A1(rs7761731)多態(tài)性與化療誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞減少癥及感染死亡關(guān)系密切。CYP39A1在腫瘤中的作用也逐漸被研究者們探討，Huang等[2]研究發(fā)現(xiàn)CYP39A1在卵巢癌中高甲基化，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)錄失調(diào)，從而使膽固醇、喹啉酸代謝失調(diào)，促進(jìn)了卵巢癌的發(fā)生。更有研究者[3]發(fā)現(xiàn)，CYP39A1在膽管細(xì)胞癌中低表達(dá)，并與高氧化應(yīng)激及不良預(yù)后關(guān)系密切。

本研究通過對32例肝癌及癌旁正常組織中CYP39A1表達(dá)的比較發(fā)現(xiàn)，CYP39A1在癌旁組織中的表達(dá)明顯高于其在對應(yīng)肝癌組織中的表達(dá)(P<0.01)，進(jìn)一步對32例肝癌患者臨床病理進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，該基因表達(dá)與性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及T分期無關(guān)(P>0.05)，而與患者年齡及腫瘤的分化程度有關(guān)(P<0.05)。

現(xiàn)有研究中，關(guān)于CYP39A1研究的報道甚少。通過本次研究表明，CYP39A1與肝癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，并可能成為診斷及判斷肝癌預(yù)后的潛在生物學(xué)標(biāo)志，為臨床診斷及治療肝癌提供新的思路。但其在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機制以及信號通路的傳導(dǎo)有待進(jìn)一步的研究。

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(責(zé)任編輯：王全楚)

Expression of CYP39A1 in hepatocellular carcinoma tissue and its clinical significance

GONG Youzhi1, ZENG Zhi2, JIANG Ying’an1

1.Department of Infectious Diseases; 2.Department of Pathology, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, China

Objective To detect the expression of CYP39A1 in human hepatocellular carcinoma(HCC), and to explore its relationship with clinical and pathological features of HCC.Methods The expression of CYP39A1 was detected by immunohistochemistry in 32 HCC specimens and their corresponding adjacent normal tissues.Results The rate of positive and strong positive expression of CYP39A1 in HCC tissue was significantly lower than that in adjacent normal tissue (25.00%vs93.75%,P<0.01). The expression of CYP39A1 was correlated with age and poor differentiation (P<0.05), but not correlated with gender, lymph node metastasis, distant metastasis and T stage(T3+T4)(P>0.05).Conclusion CYP39A1 gene plays an important role in the occurrence and development of HCC, and may be the novel treatment target of HCC.

Hepatocellular carcinoma; Adjacent normal tissue; CYP39A1 gene; Immunohistochemistry

龔由之，碩士研究生，研究方向：醫(yī)院感染的基礎(chǔ)和臨床研究。E-mail: 121029279@qq.com

江應(yīng)安，博士，教授，研究方向：醫(yī)院感染的基礎(chǔ)和臨床研究。E-mail: jiangya_cn@aliyun.com

10.3969/j.issn.1006-5709.2016.08.006

R735.7

A

1006-5709(2016)08-0865-03

2016-01-13