楊志宏　李經(jīng)渭　袁有才　 李天浩　朱曉娜　曹　旸　問麗娜　郭　珍

陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院(咸陽712000)

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調(diào)脂柔脈顆粒對高脂血癥大鼠動脈壁ICAM-1基因表達(dá)的影響*

楊志宏李經(jīng)渭△袁有才▲李天浩◇朱曉娜曹旸問麗娜郭珍

陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院(咸陽712000)

摘要目的:研究調(diào)脂柔脈顆粒對高脂血癥大鼠動脈壁中細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)影響。方法:將健康雄性SD大鼠72只按體質(zhì)量隨機分為6組,每組12只:空白組、模型組、西藥組、調(diào)脂柔脈顆粒高劑量組、調(diào)脂柔脈顆粒中劑量組、調(diào)脂柔脈顆粒低劑量組。采用高脂飲食建立大鼠高脂血癥模型,采用RT-PCR的方法檢測各組大鼠動脈壁勻漿中ICAM-1基因的表達(dá)。結(jié)果:與空白對照組相比,模型組ICAM-1基因的表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與模型組相比各治療組ICAM-1基因的表達(dá)有不同程度的下降，調(diào)脂柔脈顆粒大劑量組效果顯著，差異有顯著性(P<0.05)。結(jié)論:調(diào)脂柔脈顆粒能下調(diào)實驗性高脂血癥大鼠動脈壁ICAM-1基因的表達(dá),與降血脂、預(yù)防動脈粥樣硬化正相關(guān)。

主題詞高脂血癥/中醫(yī)藥療法動物實驗 @調(diào)脂柔脈顆粒

高脂血癥是心腦血管病的最主要發(fā)病因素，脂質(zhì)異常對動脈粥樣硬化有促進(jìn)作用。筆者在臨床中總結(jié)研發(fā)的調(diào)脂柔脈顆粒有較好的降脂效果。為進(jìn)一步研究其對高脂血癥致動脈粥樣硬化的作用， 擬通過高脂血癥大鼠模型觀測胸主動脈ICAM-1(Intercellular cell adhesion molecule-1 即細(xì)胞間黏附分子-1)基因的表達(dá)。

1材料1.1實驗動物從第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心購入72只SD大鼠, 雄性清潔級，體重200±20g。

1.2藥物和試劑調(diào)脂柔脈顆粒：由天花粉、黃芪、葛根、制首烏、決明子、丹參、大黃、蒼術(shù)、生山楂、槐角等藥物組成，陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑中心提供，10g/袋。辛伐他汀,杭州默沙東制藥有限公司。高脂飼料：按85%的基礎(chǔ)飼料、1.7%的膽固醇、4.3%豬油、8.6%蛋黃粉,0.4%的豬膽 鹽的比例由第四軍醫(yī)大學(xué)動物實驗中心配制。10%水合氯醛, 國產(chǎn)分析純，陜西中醫(yī)學(xué)院附屬 醫(yī)院制劑中心配制；TaqDNA聚合酶,天津強微生物科技有限公司；Trizol reagent, 北京瑞達(dá)恒輝生物技術(shù)發(fā)展公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Reverse Transcription System),美國Promega公司；上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成ICAM-1、β-actin引物。實時定量PCR儀：BIO-RAD公司,RNA定量儀：美國Nano Drop ND-1000 spectrophotometer。

2方法2.1分組和造模將72只SD大鼠按體重質(zhì)量隨機分為6組,每組12只:模型組、空白組、對照辛伐他汀組、調(diào)脂柔脈顆粒低劑量組、調(diào)脂柔脈顆粒中劑量組、調(diào)脂柔脈顆粒高劑量組?？瞻捉M給予普通飼料飼養(yǎng)；其余各組動物給予高脂飼料。

2.2給藥各組大鼠按1mL/(kg·d)灌胃，空白組、模型組給予純凈水灌胃,調(diào)脂柔脈顆粒低劑量組(0.125g/mL)、調(diào)脂柔脈顆粒中劑量組(0.25g/mL)、調(diào)脂柔脈顆粒高劑量組(0.5g/mL)混懸液灌胃；辛伐他汀(0.2mg/mL)混懸液灌胃，連續(xù)8周。

2.3主動脈取材造模及干預(yù)8周后采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,頸總動脈采血后，迅速取出主動脈和胸主動脈,剪碎置于凍存管,液氮冷凍，標(biāo)本采集結(jié)束后轉(zhuǎn)-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

2.4實時RT-PCR按照TRIZOL試劑說明書提取總RNA,采用Ta KaRa公司 Prime Script? RT reagent Kit Perfect Real Time(DRR037A)反轉(zhuǎn)錄試劑盒冰上加樣。取上述逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物PCR擴增ICAM-1：正義: 5′AGGTATCCATCCATCCCACA 3′，反義: 5′AGT-GTCTCATTCCCACGGA 3′,擴增產(chǎn)物長度388 bp。內(nèi)參照β-actin引物序列: 正義: 5′CGTTGACATCCGTAAAGA 3′，反義 5′AGCCACCAATC-CACACAG3′,擴增產(chǎn)物長度173 bp。采用Ta KaRa Biotechology公司的 SYBY Premix Ex TaqTMⅡ(Perfect Real Time(DRR081A)試劑盒，依次加入以下試劑,構(gòu)建PCR反應(yīng)體系，變性95℃,30s,退火95℃,30s ,延伸60℃,30s,反應(yīng)進(jìn)行40個循環(huán),PCR反應(yīng)結(jié)束后，將PCR反應(yīng)液從60℃緩慢升溫到95℃，以獲取融解曲線。

3結(jié)果3.1調(diào)脂柔脈顆粒對高血脂大鼠一般情況的影響模型組大鼠經(jīng)8周高脂喂養(yǎng)，體重較空白組明顯增加(P<0.01)，大鼠活動減少，懶動，毛發(fā)略黃。各治療組大鼠精神狀態(tài)較模型組明顯好轉(zhuǎn)，體重增加減緩(見表1)，活動靈活。

3.2調(diào)脂柔脈顆粒對高血脂癥大鼠主動脈ICAM-1mRNA表達(dá)的影響與空白組比較，模型組主動脈ICAM-1基因的表達(dá)明顯增加(P<0.01)；與模型組相比，對照組組及調(diào)脂柔脈顆粒低中高劑量組組均能減少動脈壁ICAM-1基因的表達(dá)(P< 0.01～0.05 )，且大劑量組明顯優(yōu)于小劑量與對照組 (P< 0.01)。見下表。

表1各組體重、ICAM-1mRNA表達(dá)

注：與模型組比較△P<0.05，與模型組比較▲P<0.01，與大劑量組比較◇P<0.05，與大劑量組比較◆P<0.01，與空白組比較□P<0.05，與空白組比較■P<0.01

4討論高脂血癥與動脈粥樣硬化的發(fā)生有密切關(guān)系，已經(jīng)被認(rèn)為冠心病、腦卒中的疾病發(fā)生的關(guān)鍵誘發(fā)因素[1]，血脂的調(diào)控已經(jīng)成為臨床預(yù)防心腦血管病的主要方法之一。研究顯示高脂血癥能引起的炎癥反應(yīng)貫穿于動脈粥樣硬化的始終及斑塊破裂、血栓形成的全過程[2]，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂,而ICAM-1是內(nèi)皮細(xì)胞活化標(biāo)志之一。ICAM-1是白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的共同跨膜蛋白，研究顯示在血管內(nèi)皮功能損傷時能產(chǎn)生許多的細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)等物質(zhì)能誘導(dǎo)ICAM-1mRNA的表達(dá)，促進(jìn)單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，促進(jìn)或加劇動脈粥樣硬化發(fā)生[3]。

中醫(yī)藥在高脂血癥防治中有豐富的經(jīng)驗，屬“膏脂”范疇[4]。經(jīng)系統(tǒng)文獻(xiàn)分析[5]病位在肝、脾、腎、心、胃、膽，其中與“肝”相關(guān)的證型最多，同時伴有“瘀”的病機。這與筆者臨床總結(jié)高脂血癥病機為“肝郁血瘀濁阻”相吻合，筆者經(jīng)驗方調(diào)脂柔脈顆粒由決明子、制首烏、天花粉、黃芪、葛根、丹參、大黃、蒼術(shù)、生山楂、槐角等組成，疏肝解郁，祛濁活血，臨床應(yīng)用有較好效果。本實驗研究顯示調(diào)脂柔脈顆?？娠@著改善高脂血癥大鼠一般狀態(tài)，能較好的控制體重，改善動脈粥樣硬化，其機理與降低ICAM-1表達(dá)正相關(guān)，且大劑量療效最著。

參考文獻(xiàn)

[1]阮曉楓，陳思韻，胡澤濤.高脂血癥致動脈粥樣硬化的防治與腸道微生態(tài)機制[J].世界最新醫(yī)學(xué)，2015，15(44):35-36.

[2]謝健，童曉云，沈超，等.活血通脈顆粒對頸動脈粥樣硬化家兔ICAIVI-1、IL-6表達(dá)的影響[J].中國中醫(yī)急癥，2015,24(3)：396-398.

[3]Niu N,Sun SZ,Han B,et al. Relationship of ox-LDL/LOX-1 and vascular endothelial dysfunction of diet induced obese immature rats and nicotinic acids intervention outcomes [J].Zhonghua Yixue Zazhi，2013,93(42):388-393.

[4]張蕾，張琪，游云，等. 基于代謝組學(xué)技術(shù)探討高脂血癥及動脈粥樣硬化痰瘀證候的演變規(guī)律[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2015,35(7):823-833.

[5]郭姣，樸勝華，石忠峰，等.高脂血癥中醫(yī)證候分布規(guī)律文獻(xiàn)研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013,30(5):609-632.

(收稿2015-12-14；修回2016-01-11)

Effect of Tiaozhi Roumai granule on the expression of ICAM-1 in arterial wall gene in rats with hyperlipidemia

The Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine( Xianyang 712000)

Yang Zhihong Li Jingwei Yuan Youcaietal

ABSTRACTObjective: To study the effect of Tiaozhi Roumai granule on intercellular adhesion molecule -1 (ICAM-1) expression of aorta in rats with hyperlipemia . Methods: 72 male SD rats were randomly divided into 6 groups: control group(n=12), model group,Tiaozhi Roumai granules in high ,middle,low dose group and Western medicine group. Blank group was assigned to receive normal diet. Model group was given high fat .the expression of ICAM-1 ineach group rats’ arterial were detected by the method of RT-PCR . Results: Compared with the blank group,the expression of ICAM-1 gene was significantly increased in model group, the difference was statistically significant(P< 0.01); compared with the model group ,the expression of ICAM-1 gene in each group have different degrees of decline, effect of Tiaozhi Roumai granule high,meddle dose group have significant difference (P< 0.01). Conclusion:Tiaozhi Roumai granule can decline the expression of ICAM-1 in experimental hyperlipidemia rats’ artery,it may be one of the mechanism of its prevention and treatment of atherosclerosis.

KEY WORDSHyperlipidemias/traditional Chinese medicine therapyAnimal experimentation @Tiaozhi Roumai granule

【中圖分類號】R589.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.05.048

*陜西省自然科學(xué)基金資助項目(2009JM4012)

△陜西省渭河發(fā)電廠醫(yī)院(咸陽712000)

▲陜西中醫(yī)藥大學(xué)( 咸陽712046)

◇陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(咸陽 712000)