顏王鑫，　宋　冬，　項冰倩，　羅梓垠，　石　璐，　應(yīng)　磊，　WU Yi-ming，　陳大慶，　王萬鐵△

(1溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院, 2溫州市人民醫(yī)院，浙江 溫州 325000； 3溫州醫(yī)科大學(xué)缺血/再灌注損傷研究所，浙江 溫州 325035； 4宜賓衛(wèi)生學(xué)校生理教研室，四川 宜賓 644000； 5Division of Cardiovascular Medicine University of Iowa Carver College of Medicine, Iowa City 52242, USA)

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益氣活血通絡(luò)解毒方通過抑制caspase-12減輕小鼠肺缺血/再灌注損傷*

顏王鑫1,2▲，宋冬3▲，項冰倩3，羅梓垠3，石璐4，應(yīng)磊3，WU Yi-ming5，陳大慶1△，王萬鐵3△

(1溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院,2溫州市人民醫(yī)院，浙江 溫州 325000；3溫州醫(yī)科大學(xué)缺血/再灌注損傷研究所，浙江 溫州 325035；4宜賓衛(wèi)生學(xué)校生理教研室，四川 宜賓 644000；5Division of Cardiovascular Medicine University of Iowa Carver College of Medicine, Iowa City 52242, USA)

[摘要]目的： 探討益氣活血通絡(luò)解毒方(Yiqi Huoxue Tongluo Jiedu Fang, YHTJF)對小鼠肺部缺血/再灌注損傷及caspase-12表達的影響。方法: 選取雄性10～12周齡C57BL/6J小鼠70只，體重21～25g，復(fù)制在體左肺缺血/再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)損傷模型。隨機分為7組：正常對照(control)組，羧甲基纖維素鈉(carboxyl methyl cellulose-Na，CMC-Na)組，假手術(shù)(sham)組，I/R模型組，YHTJF低(low,L)、中(meddle,M)、高(high,H)濃度干預(yù)組。CMC-Na、sham和I/R組術(shù)前連續(xù)7 d腹腔注射CMC-Na溶液，YHTJF-L、YHTJF-M和YHTJF-H組術(shù)前連續(xù)7 d腹腔注射低、中、高濃度的YHTJF溶液。術(shù)畢，取左肺測定肺組織濕/干比值(W/D)及總肺含水量(TLW)，行肺泡損傷評估(IQA)；光、電鏡觀察肺組織形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變；原位末端標記法(TUNEL)測組織細胞凋亡指數(shù)(AI)；RT-PCR和Western blot分別檢測caspase-12和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)的mRNA和蛋白表達量。結(jié)果: 相比control組，I/R組的W/D、TLW、IQA和AI明顯升高(P<0.01)，肺組織形態(tài)學(xué)破壞顯著，caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表達量增加(P<0.01)，而CMC-Na組和sham組各項指標與control組無明顯差異；與I/R組比較，YHTJF-L組、YHTJF-M組和YHTJF-H組各項指標(除GRP78外)數(shù)值均下降(P<0.01)，組織損傷明顯減輕。結(jié)論: YHTJF可有效減輕小鼠缺血/再灌注性肺損傷，其機制可能與其抑制caspase-12通路所致凋亡有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]益氣活血通絡(luò)解毒方； Caspase-12； 肺缺血/再灌注損傷； 細胞凋亡

肺缺血/再灌注損傷(lung ischemia-reperfusion injury，LIRI)是導(dǎo)致急性肺損傷的主要原因之一，其多發(fā)生于肺部手術(shù)、心肺移植或休克等過程中，嚴重影響病人的預(yù)后。先前有研究者認為，快速恢復(fù)血氧供應(yīng)是在缺血后保護器官最有效的途徑，但近年來研究顯示，這種做法可能導(dǎo)致再灌注損傷[1]。目前已有大量報道，具有益氣、活血、通絡(luò)等功效的中藥對心、腦、腎等臟器在缺血/再灌注過程中的損傷有明顯的減輕作用[2-6]，但對這些中藥在肺臟缺血/再灌注方面的作用研究卻極少，故本實驗通過北京中醫(yī)藥大學(xué)組方的益氣活血通絡(luò)解毒方(Yiqi Huoxue Tongluo Jiedu Fang，YHTJF)來對小鼠肺缺血/再灌注模型進行干預(yù)，以明確治療效果，并闡明藥物作用機制。

根據(jù)報道，LIRI過程中肺組織細胞大量凋亡，進而導(dǎo)致繼發(fā)性肺損傷，但對肺細胞凋亡具體機制的研究還不充分。目前認為，誘導(dǎo)細胞過量凋亡的因素主要有自由基增多、細胞內(nèi)鈣超載、白細胞的聚集等，凋亡機制與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmic reticulum，ER)過度應(yīng)激導(dǎo)致的未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein reaction，UPR)有關(guān)。Caspase-12 是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外膜上特異定位的促凋亡分子，其活化在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress，ERS)介導(dǎo)的細胞凋亡過程中起關(guān)鍵性作用[7]；葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78, GRP78)作為經(jīng)典的伴侶蛋白，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)調(diào)節(jié)和ERS發(fā)生時其變化較為明顯，一般起到保護機體的作用。本實驗建立C57BL/6J小鼠左肺缺血/再灌注模型，通過腹腔注射不同濃度YHTJF預(yù)處理，研究YHTJF對LIRI的影響及與caspase-12通路的關(guān)系。

材料和方法

1動物和主要試劑

SPF級C57BL/6J成年雄性小鼠，體重21～25 g，由溫州醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，動物使用許可證號為SYXK(浙)2012-075。

YHTJF(北京中醫(yī)藥大學(xué)組方，黃芪甲苷和虎杖苷購于成都思科華生物技術(shù)有限公司，三七總皂苷購于廣西梧州制藥集團股份有限公司，混合后呈黃白色狀粉末，純度>98%)，經(jīng)蒸發(fā)散射檢測儀及高效液相色譜儀分析[8-11]，將3種單體按低(0.8 g/L 黃芪甲苷+3 g/L 三七總皂苷+0.8 g/L 虎杖苷)、中(1.6 g/L 黃芪甲苷+ 6 g/L 三七總皂苷 +1.6 g/L 虎杖苷)、高(3.2 g/L 黃芪甲苷+ 12 g/L 三七總皂苷 +3.2 g/L 虎杖苷)配比溶于含3%羧甲基纖維素鈉(carboxyl methyl cellulose-Na，CMC-Na)的PBS無菌溶液中，超聲振蕩使之完全溶解；RNA試劑盒及Reverse Transcription System (Thermo)；PCR引物試劑盒(英濰捷基公司)；caspase-12及GRP78Ⅰ抗(CST)；兔抗GAPDH多克隆抗體(杭州賢至生物科技有限公司)；BCA蛋白定量試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所)；原位末端標記法試劑盒(Roche)。

2方法

2.1動物模型制備隨機分為7組：正常對照(control)組，CMC-Na組，假手術(shù)(sham)組，I/R模型組，YHTJF低(low, L)、中(middle, M)、高(high, H)濃度干預(yù)組(YHTJF-L、YHTJF-M和YHTJF-H組)。術(shù)前，control組不做任何處理，CMC-Na、sham和I/R各組術(shù)前7 d連續(xù)腹腔注射CMC-Na溶液，YHTJF-L、YHTJF-M和YHTJF-H各組術(shù)前7 d連續(xù)每日分別腹腔注射低、中、高濃度的YHTJF溶液(每10 g 0.2 mL)。手術(shù)當日，control和CMC-Na組直接安樂死處死小鼠取標本；sham組只開胸，不夾閉肺門，3.5 h后安樂死處死小鼠取標本；其余4組均開胸夾閉肺門30 min，再松開動脈夾使得左肺再灌注3 h，術(shù)畢均安樂死處死小鼠留取肺組織。

2.2肺濕/干比值及總肺水含量(total lung water content，TLW)測定術(shù)畢，取小鼠左肺上葉經(jīng)漂洗、吸除表面血液和水分、稱重，記為濕重(wet weight，W)，置于70 ℃恒溫烤箱48 h, 稱重，記為干重(dry weight，D)。W/D比值表示肺濕干比，計算(W-D)/D得TLW。

2.3光鏡觀察及肺泡損傷定量指標的評估取約0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm小鼠左肺下葉組織，漂洗并固定。石蠟包埋、切片，經(jīng)HE染色后封片，光鏡(×200)下觀察肺組織的形態(tài)學(xué)變化。隨機取50個視野觀察，將肺泡內(nèi)紅細胞和(或)白細胞數(shù)目大于2個或肺泡內(nèi)水腫有液滲出者視為損傷細胞，每視野內(nèi)損傷肺泡數(shù)在總肺泡數(shù)中的百分比記作肺泡損傷定量指標(index of quantitative evaluation，IQA)。

2.4肺組織的電鏡觀察取1 mm×1 mm×1 mm小鼠左肺尖處組織，2.5%戊二醛固定48 h，塊染、乙醇梯度脫水，丙酮浸泡，包埋聚合，切取半薄切片，修塊后切超薄切片，硝酸鉛、醋酸鈾雙染，透射電鏡讀片。

2.5Western blot檢測肺組織caspase-12和GRP78蛋白水平低溫下充分研磨40 mg肺組織，以400 μL RIPA裂解液(含4 μL 苯甲基磺酰氟)裂解組織，混勻后吸取勻漿液4 ℃離心，取上清，以BCA法測蛋白濃度并繪標準曲線，樣品蛋白定量成2 g/L, 變性煮沸10 min。配膠進行電泳，上樣量20 μg，濕轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，TBST漂洗，I 抗4 ℃孵育過夜，TBST洗滌7 min 3次，孵育 HRP標記II 抗室溫1 h。TBST洗滌5 min 3次，加ECL工作液，反應(yīng)2 min，暗室曝光，顯影、定影后，凝膠分析軟件分析蛋白吸光度值。

2.6RT-PCR法檢測肺組織caspase-12及GRP78的mRNA表達取100 mg小鼠肺組織，加液氮研磨，以TRIzol法提取總RNA，測定RNA濃度，按照PCR試劑盒說明書進行cDNA合成及擴增，PCR參數(shù):94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s,54 ℃(caspase-12)/58 ℃(GAPDH)/49 ℃(GRP78)30 s,72 ℃ 1 min,循環(huán)33次；72 ℃ 5 min終止延伸。所得產(chǎn)物用1.5%瓊酯糖凝膠電泳(100 V)分離。用Quantity One軟件進行分析。引物序列見表1。

表1　引物序列

2.7TUNEL法檢測肺組織的細胞凋亡情況依試劑盒說明書操作，光鏡(×400)下觀察計數(shù)，胞核棕褐色者記為凋亡細胞。每片觀察約500個細胞，計每100個細胞內(nèi)的陽性細胞數(shù)為凋亡指數(shù)(apoptotic index，AI)。

3統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS 13.0軟件分析，計量資料行正態(tài)性檢驗，以均數(shù)±標準差(mean±SD)表示，多組樣本均數(shù)組間采用單因素方差分析，兩兩比較使用Bonferroni校正的t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1各組肺W/D、TLW及IQA的變化

CMC-Na組和sham組各項指標與control組比較無明顯差異，而I/R組肺W/D、TLW、IQA的值明顯升高(P<0.01)；YHTJF-L組、YHTJF-M組和YHTJF-H組的W/D、TLW及IQA值較I/R組下降，其中YHTJF-M組下降最多，差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.01)，見表2。

表2　各組小鼠肺組織W/D、TLW、IQA及AI值的變化

**P<0.01 vs sham group;##P<0.01 vs I/R group;△△P<0.01 vs YHTJF-L group;▲▲P<0.01 vs YHTJF-M group.

2光鏡下各組肺組織形態(tài)學(xué)變化

Control組、CMC-Na組和sham組的肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡細胞無腫脹，肺間質(zhì)無水腫、增厚，未見炎癥細胞浸潤。I/R組的肺泡細胞腫脹、結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡間質(zhì)水腫、增厚，肺泡腔滲出，肺泡內(nèi)水腫滲出、紅細胞漏出及炎癥細胞漏出。與I/R組相比，YHTJF-L組、YHTJF-M組和YHTJF-H組的肺泡結(jié)構(gòu)相對較完整，肺間質(zhì)水腫及炎癥細胞浸潤不同程度減輕，見表2、圖1。

Figure 1.The structure of the lung under light microscope (HE staining, ×200). A: control group; B: CMC-Na group; C: sham group; D: I/R group; E: YHTJF-L group; F: YHTJF-M group; G: YHTJF-H group.

圖1光鏡下HE染色的肺組織形態(tài)學(xué)改變

3各組肺組織超微結(jié)構(gòu)改變

Control組、CMC-Na組和sham組毛細血管內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)正常，基底膜完整，肺泡II型上皮細胞結(jié)構(gòu)完整，線粒體嵴清楚，板層小體數(shù)量較多，微絨毛無減少。I/R組的細胞核固縮并邊集在核膜下，胞漿濃縮，板層體減少、排空增多，細胞膜上微絨毛減少或消失，線粒體腫脹，肺泡隔及毛細血管內(nèi)炎癥細胞附壁增多。與I/R組相比，YHTJF-L組、YHTJF-M組和YHTJF-H組的肺組織超微結(jié)構(gòu)損傷減輕，肺泡超微結(jié)構(gòu)清晰可辨，核染色質(zhì)較均勻，胞漿增多，肺泡Ⅱ型上皮細胞表面微絨毛較多，板層小體數(shù)量增多，線粒體腫脹減輕，見圖2。

Figure 2.The structure of the lung under electron microscope. A: control group; B: CMC-Na group; C: sham group; D: I/R group; E: YHTJF-L group; F: YHTJF-M group; G: YHTJF-H group.

圖2電鏡下肺組織形態(tài)學(xué)改變

4各組caspase-12和GRP78 mRNA水平表達的變化

GRP78的mRNA在control組、CMC-Na組和sham組中低表達，在其余所有組中均明顯表達(P<0.01)；caspase-12的mRNA在sham組、CMC-Na組和control組中低表達，在I/R組明顯表達(P<0.01)。經(jīng)YHTJF干預(yù)后，與I/R組相比，caspase-12的mRNA在YHTJF-L組、YHTJF-M組和YHTJF-H組中則表達量均下降(P<0.01)，以YHTJF-M組下降最為顯著，見圖3。

Figure 3.The mRNA expression of caspase-12 and GRP78 detected by RT-PCR. Mean±SD. n=10.**P<0.01 vs sham group;##P<0.01 vs I/R group;△△P<0.01 vs YHTJF-L group;▲▲P<0.01 vs YHTJF-M group.

圖33種濃度的YHTJF對caspase-12和GRP78 mRNA表達的影響

5各組caspase-12和GRP78 蛋白水平表達的變化

Caspase-12蛋白在control組、CMC-Na組和sham組中低表達，在I/R組中表達明顯(P<0.01)。但caspase-12蛋白含量在YHTJF-L組、YHTJF-M組和YHTJF-H組中表達均較I/R組下降(P<0.01)，以YHTJF-M組下降最為顯著。GRP78 蛋白在control組、CMC-Na組和sham組中低表達，在其余所有組中均明顯表達(P<0.01)，見圖4。

Figure 4.The protein levels of caspase-12 and GRP78 detected by Western blot. Mean±SD. n=10.**P<0.01 vs sham group;##P<0.01 vs I/R group;△△P<0.01 vs YHTJF-L group;▲▲P<0.01 vs YHTJF-M group.

圖43種濃度的YHTJF對caspase-12和GRP78蛋白表達的影響

6各組肺組織AI的改變

Control組、CMC-Na組和sham組細胞凋亡數(shù)量較少，與之相比，I/R組細胞凋亡數(shù)量明顯增多，細胞凋亡以肺血管內(nèi)皮細胞、肺泡上皮細胞為主，AI亦均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.01)；與I/R組相比，YHTJF-L組、YHTJF-M組和YHTJF-H組細胞凋亡減少，AI均降低，以YHTJF-M組下降明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P<0.01)，見圖5、表2。

Figure 5.The apoptosis of the lung tissues observed under light microscope (TUNEL, ×400). A: control group; B: CMC-Na group; C: sham group; D: I/R group; E: YHTJF-L group; F: YHTJF-M group; G: YHTJF-H group.

圖5光鏡下肺組織的凋亡情況

討論

研究證明，缺血/再灌注損傷是一個多因素影響的復(fù)雜過程，ERS在其過程中起到至關(guān)重要的作用[12]。炎癥因子刺激、細胞膜功能受損、活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)急速增多及鈣穩(wěn)態(tài)被破壞等因素均可使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白異常折疊，異常折疊蛋白聚集于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)，誘發(fā)ERS，進而發(fā)生恢復(fù)細胞功能的UPR。大量腦、心、腎方面的研究表明caspase-12 和GRP78在ERS調(diào)控的凋亡通路中有重要作用[13]，但現(xiàn)今對于其在LIRI過程中的作用尚未明確。有研究稱，ERS介導(dǎo)的凋亡在caspase-12 缺陷鼠體內(nèi)表現(xiàn)不顯著，而其它死亡因素刺激卻可誘發(fā)凋亡，進一步說明caspase-12途徑可能是ERS介導(dǎo)凋亡的關(guān)鍵通路[13]。Caspase-12在正常情況下的呈低表達狀態(tài)，而發(fā)生ERS時，其表達量將迅速上調(diào)，并激活凋亡通路，對組織和器官造成嚴重損傷；抑制細胞內(nèi)caspase-12蛋白的應(yīng)激性活化和表達，可有效減輕機體細胞凋亡情況，有利于疾病的防治。伴侶蛋白GRP78是一種經(jīng)典的抗凋亡標志物，當發(fā)生UPR時GRP78表達量快速上調(diào)，在一定程度上有利于恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)以及細胞的功能和結(jié)構(gòu)。本課題組將caspase-12、GRP78和AI進行相關(guān)性分析，實驗結(jié)果表明，缺血/再灌注后肺的細胞凋亡程度和caspase-12、GRP78表達的上調(diào)密切相關(guān)。

缺血/再灌注損傷對肺功能產(chǎn)生嚴重影響，甚至導(dǎo)致肺功能衰竭，其發(fā)生的病理生理基礎(chǔ)是缺氧、缺血，中醫(yī)表述為氣虛血瘀、氣滯血瘀、熱毒積聚、氣血虧虛、痰瘀互結(jié)、陰陽虛損等，進而致肺臟細胞凋亡，甚至壞死。故從中醫(yī)角度，欲減輕缺血/再灌注損傷，需舒脈活血、化瘀解毒。目前研究已證實，一些具有益氣、活血、通絡(luò)、解毒功效的單味中藥對心肌、腦的缺血/再灌注損傷具有保護作用，如黃芩、三七、麥冬、丹參、黃芪、虎杖、刺五加、川芎嗪、白藜蘆醇等。本課題組根據(jù)前期研究的基礎(chǔ)，結(jié)合預(yù)實驗，選用北京中醫(yī)藥大學(xué)組方的“益氣活血通絡(luò)解毒方”對小鼠左肺缺血/再灌注模型進行干預(yù)，檢測組方藥效。經(jīng)實驗表明，在W/D、TLW、組織形態(tài)和TUNEL檢測中，用藥組的損傷均明顯減輕，表明YHTJF可能在缺血/再灌注中對肺有良好的保護作用。

有研究者認為，ERS 持續(xù)刺激時，細胞功能及結(jié)構(gòu)的改變將無法恢復(fù)，甚至引起細胞死亡蛋白的表達持續(xù)上調(diào)，加重細胞凋亡和組織、器官的損傷。通過實驗結(jié)果可知，就GRP78的表達水平，藥物組與I/R組相比一直較高，我們認為在過度的UPR時，GRP78表達的上調(diào)可能對機體發(fā)揮著積極的保護作用[14]。

本研究結(jié)果表明，caspase-12在對肺缺血/再灌注的凋亡機制中起著關(guān)鍵作用；在對LIRI中肺的保護治療方面，中藥YHTJF發(fā)揮著良好的保護作用；其保護機制可能和抑制過度ERS過程中caspase-12通路的活化相關(guān)。

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(責任編輯： 盧萍， 余小慧)

EPPS能降解APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬中的Aβ并

改善其認知功能障礙

阿爾茨海默病(Alzheimer disease, AD)的一個病理特征就是腦中β-淀粉樣蛋白(amyloid-β, Aβ)單體轉(zhuǎn)變成有毒的寡聚體和斑塊。鑒于Aβ異常生成通常先于臨床癥狀的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)可降解已生成Aβ聚集體的試劑將有利于AD的治療。Kim等的研究發(fā)現(xiàn)，小分子藥物4-羥乙基哌嗪丙磺酸(4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinepropanesulphonic acid, EPPS)可與Aβ的寡聚體結(jié)合，并將它們轉(zhuǎn)換成單體。對可以模擬嚴重AD樣癥狀的APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠模型給予EPPS治療，發(fā)現(xiàn)EPPS改善小鼠海馬依賴性行為功能障礙，并能減少腦中Aβ寡聚體和斑塊的沉積，減少γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)的釋放及炎癥引起的腦中Aβ過度表達。EPPS具有減少Aβ的聚集和改善行為功能障礙的能力，這為闡述Aβ的沉積是AD發(fā)生發(fā)展中一個重要機制的觀點提供了有力的支持。

Nat Commun, 2015, 6:8997(黃翠芹)

Traditional Chinese medicine YHTJF prevents lung ischemia-reperfusion injury via caspase-12 pathway

YAN Wang-xin1,2, SONG Dong3, XIANG Bing-qian3, LUO Zi-yin3, SHI Lu4, YING Lei3, WU Yi-ming5, CHEN Da-qing1, WANG Wan-tie3

(1TheSecondAffiliatedHospital,WenzhouMedicalUniversity,2WenzhouPeople’sHospital,Wenzhou325000,China;3Ischemia/ReperfusionInjuryResearchInstitute,WenzhouMedicalUniversity,Wenzhou325035,China;4DepartmentofPhysiology,YibinHealthSchool,Yibin644000,China;5DivisionofCardiovascularMedicine,UniversityofIowaCarverCollegeofMedicine,IowaCity52242,USA.E-mail:cdq1965@126.com;wwt@wmu.edu.cn)

[ABSTRACT]AIM: To explore whether Yiqi Huoxue Tongluo Jiedu Fang (YHTJF) decreases the injury during lung ischemia-reperfusion (I/R) in the mice though caspase-12 pathway.METHODS: C57BL/6J male mice (n=70) were randomly divided into 7 groups: control, carboxyl methyl cellulose-Na (CMC-Na), sham, I/R, YHTJF-low (L), YHTJF-middle (M) and YHTJF-high (H) groups. YHTJF was injected intraperitoneally at 46, 92 and 184 mg/kg every day in YHTJF-L, YHTJF-M and YHTJF-H groups, respectively. The carboxyl methyl cellulose-Na was administered with the same volume of YHTJF-L in control, sham and I/R groups. After 3 h-reperfusion, the left lung tissue was harvested to determine the lung wet/dry weight ratio (W/D), the total lung water content (TLW), and index of quantitative evaluation (IQA) of alveolar damage. Morphological observation and terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling (TUNEL) were applied to evaluate the structural changes and the apoptosis index (AI) of the lung tissues, respectivety. The expression of caspase-12 and glucose-regulated protein 78 (GRP78) at protein and mRNA levels in the lung tissues were detected by Western blot and RT-PCR. RESULTS: Compared with control, the W/D, TLW, IQA, AI, and the expression of caspase-12 and GRP78 at mRNA and protein levels in I/R group obviously increased (P<0.01), while no significant difference was observed between control and sham groups. Compared with I/R group, the above indexes (except GRP78) in YHTJF-L, YHTJF-M and YHTJF-H groups were all decreased (P<0.01). CONCLUSION: YHTJF may attenuate the I/R injury of the lung by inhibition of apoptosis via caspase-12 pathway.

[KEY WORDS]Yiqi Huoxue Tongluo Jiedu Fang; Caspase-12; Lung ischemia-reperfusion injury; Apoptosis

[文章編號]1000- 4718(2016)05- 0804- 07

[收稿日期]2016- 01- 26[修回日期] 2016- 04- 17

*[基金項目]浙江省中醫(yī)藥重點研究計劃(No. 2013ZZ011)；四川省宜賓市重點科技項目(No. 2015SF035)

通訊作者△Tel： 0577-86689817； E-mail： wwt@wmu.edu.cn； cdq1965@126.com

[中圖分類號]R363.2; R246.1

[文獻標志碼]A

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.05.006

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