蘇程程，　向國(guó)安，　馬永強(qiáng)，　周　欣，　彭守春，　魏路清△，　姬文婕△

(1中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院附屬平津醫(yī)院呼吸與重癥醫(yī)學(xué)科, 2天津市心血管重塑與靶器官損傷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300162)

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ATP清除劑三磷酸腺苷雙磷酸酶對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺的干預(yù)作用*

蘇程程1▲，向國(guó)安1▲，馬永強(qiáng)2，周欣2，彭守春1，魏路清1△，姬文婕1△

(1中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院附屬平津醫(yī)院呼吸與重癥醫(yī)學(xué)科,2天津市心血管重塑與靶器官損傷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300162)

[摘要]目的： 觀察三磷酸腺苷雙磷酸酶(apyrase，Apy)對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺小鼠肺纖維化的干預(yù)作用及可能機(jī)制。方法: 160只雄性C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組、矽肺組、Apy組及溶劑組，采用經(jīng)口咽吸入法給予SiO2懸濁液(50 mg/kg)建立小鼠實(shí)驗(yàn)性矽肺模型，對(duì)照組給予等量生理鹽水。Apy組在造模的同時(shí)及造模后4 h采用經(jīng)口咽吸入法給予Apy(40 mg/kg)，溶劑組給予等體積的無菌生理鹽水。分別于術(shù)后3 h、7 d、14 d和28 d處死小鼠，計(jì)算各組小鼠肺指數(shù)，采用生物發(fā)光法檢測(cè)小鼠肺組織的ATP含量，采用HE染色和苦味酸-天狼星紅染色觀察肺組織的病理學(xué)變化，采用real-time PCR法檢測(cè)各組肺組織中Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)、Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)的mRNA表達(dá)水平，采用ELISA法測(cè)定肺泡灌洗液TGF-β1的蛋白水平。結(jié)果: 與對(duì)照組相比，模型組和溶劑對(duì)照組小鼠的肺指數(shù)和膠原含量明顯升高，證明矽肺模型制備成功。Apy組與溶劑組相比，肺組織的ATP含量下降，肺組織炎癥表現(xiàn)明顯減輕，炎癥評(píng)分顯著下降；同時(shí)肺指數(shù)、膠原容積分?jǐn)?shù)及Col Ⅰ和Col Ⅲ的 mRNA表達(dá)水平均顯著下降。Apy可以明顯下調(diào)肺組織中TGF-β1的mRNA表達(dá)水平和肺泡灌洗液中TGF-β1蛋白表達(dá)水平。結(jié)論: Apy可以明顯減輕實(shí)驗(yàn)性矽肺小鼠肺組織的炎癥反應(yīng)和纖維化，該作用可能與Apy減少肺組織ATP的濃度、下調(diào)TGF-β1的表達(dá)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]矽肺； 三磷酸腺苷雙磷酸酶； 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1

矽肺是由于長(zhǎng)期吸入含游離二氧化硅(silicon dioxide，SiO2)的粉塵引起的職業(yè)性肺疾病，通常表現(xiàn)為持續(xù)的炎癥反應(yīng)、成纖維細(xì)胞增生、過量的膠原沉積最終導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化[1]。目前，矽肺的發(fā)病機(jī)制尚未明確，且缺乏有效的治療措施。三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)是機(jī)體組織細(xì)胞所需能量的直接來源，且參與各個(gè)系統(tǒng)如神經(jīng)系統(tǒng)、血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等細(xì)胞之間的信息傳遞[2-4]。大量研究表明，胞外ATP與多種疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，如敗血癥、肺纖維化等[5-6]。新近研究發(fā)現(xiàn)，通過氣管滴注三磷酸腺苷雙磷酸酶(apyrase，Apy)可以減輕博來霉素誘導(dǎo)的急慢性肺損傷[7]，但其對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺的干預(yù)研究尚未見報(bào)道。因此，本研究使用SiO2誘導(dǎo)小鼠矽肺模型，采用ATP清除劑Apy降低肺組織局部ATP的濃度，觀察Apy對(duì)小鼠矽肺發(fā)生發(fā)展的影響，以期初步探討其在矽肺肺纖維化過程中的作用。

材料和方法

1動(dòng)物

6～8周齡雄性C57BL/6小鼠，購自中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)為SCXK-(軍)2012-0004。小鼠在12 h/12 h光照周期，通風(fēng)、溫度和濕度適宜的清潔級(jí)動(dòng)物室內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周后用于實(shí)驗(yàn)。

2試劑

三磷酸腺苷雙磷酸酶、ATP檢測(cè)試劑盒和0.5～10 μm SiO2顆粒(Sigma)；TRIzol Reagent(Invitrogen)；MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和dNTPs(Promega)；SYBR Green實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒(Roche)；TGF-β1 ELISA試劑盒(上海索來寶生物技術(shù)有限公司)；異氟烷(國(guó)藥準(zhǔn)字H19980141，河北一品制藥有限公司)；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

3方法

3.1矽肺模型的制備及標(biāo)本的采集處理將160只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、矽肺組、Apy組及溶劑組，每組40只。用MIDMARK小動(dòng)物麻醉罐、2%異氟烷輕度麻醉小鼠，將小鼠上頜中切牙懸掛于特制環(huán)形架的橡膠帶上，鑷子夾閉鼻孔，同時(shí)從一側(cè)嘴角輕輕拉出舌以暴露舌根和咽后壁，將均一的SiO2懸濁液沿咽后壁緩慢注入，確保其隨呼吸運(yùn)動(dòng)吸入肺部，結(jié)束后將小鼠置于掌心保持上體直立位，直至完全蘇醒[8]。對(duì)照組以同樣的方式給予等體積的無菌生理鹽水。Apy組在造模的同時(shí)及造模后4 h經(jīng)口咽吸入Apy溶液，溶劑組經(jīng)口咽吸入SiO2懸濁液造模，造模后4 h經(jīng)口咽吸入無菌生理鹽水作為溶劑對(duì)照。各組小鼠在造模后的3 h、7 d、14 d和28 d分為灌洗組和非灌洗組取材。將小鼠麻醉后摘眼球放血處死，灌洗組用1 mL預(yù)冷無菌生理鹽水行經(jīng)支氣管肺泡灌洗，重復(fù)3次，支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)離心后取上清儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱備用。非灌洗組開胸取肺，肉眼觀察雙肺，稱量肺臟重量，計(jì)算肺系數(shù)，肺系數(shù)=肺濕重(mg)/體重(g)；右上肺經(jīng)4%多聚甲醛固定后用Leica TP-1020半自動(dòng)臺(tái)式組織處理機(jī)脫水浸蠟，包埋后組織切片進(jìn)行HE染色、苦味酸-天狼星紅染色；左肺儲(chǔ)存于液氮中，用于肺組織RNA的提取與分析；右下肺儲(chǔ)存于液氮中用于肺組織ATP的檢測(cè)。

3.2小鼠肺組織ATP的檢測(cè)取出液氮中的右下肺部分，置于冰上并剪成小塊，加入提前預(yù)冷的10% HClO4，用KONTES微型電動(dòng)組織勻漿器勻漿；使用Biofuge stratas離心機(jī)4 ℃ 45 000 r/min離心10 min；取500 μL上清置于新的EP管，加入200 μL 2.5 mol/L 的KOH溶液充分混勻，中和HClO4；4 ℃ 45 000 r/min離心10 min后，取上清用pH 7.8的TAE緩沖液稀釋10倍，按照說明書的操作要求，用ATP檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，簡(jiǎn)述步驟如下：將儲(chǔ)存濃度為400 μmol/L的ATP標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋，分別得到2 000、1 000、500、250和100 nmol/L的標(biāo)準(zhǔn)品；避光條件下將ATP檢測(cè)混合物稀釋25倍；取100 μL工作濃度ATP檢測(cè)混合液加入不透明酶標(biāo)板，靜置2 min以耗竭環(huán)境中的本底ATP；將100 μL的ATP標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本加入酶標(biāo)板，設(shè)復(fù)孔，振蕩混勻后用PerkinElmer LS55分光光度計(jì)測(cè)定；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和吸光度值擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出相應(yīng)方程式并計(jì)算各樣本的ATP濃度。

3.3小鼠肺組織的病理學(xué)檢測(cè)肺組織在4%的多聚甲醛中固定48 h后常規(guī)石蠟包埋，切5 μm切片，進(jìn)行HE染色、苦味酸-天狼星紅染色，用NIKON E300偏振光顯微鏡觀察肺組織炎癥反應(yīng)和纖維化程度。參照Szapiel等[9]的方法，在放大100倍視野下觀察HE染色切片，每只小鼠取3個(gè)連續(xù)切片，避開大的氣管和血管后隨機(jī)選取5個(gè)視野，按以下規(guī)則進(jìn)行炎癥評(píng)分：正常組織評(píng)為0分，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)面積占肺組織面積比例<20%評(píng)為1分，比例為20%～50%評(píng)為2分，比例>50%評(píng)為3分，取其平均值作為炎癥評(píng)分，反映肺組織的炎癥程度。應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0軟件對(duì)肺間質(zhì)纖維化程度進(jìn)行分析：同一視野用暗場(chǎng)圖像分析膠原面積，明場(chǎng)圖像分析空白區(qū)域面積，計(jì)算膠原容積分?jǐn)?shù)(collagen vo-lume fraction，CVF)反映肺纖維化程度，計(jì)算公式如下：CVF(%)=膠原面積/(圖像總面積-空白區(qū)域面積)×100%。

3.4ELISA測(cè)定肺泡灌洗液TGF-β1的含量將ELISA試劑盒和待測(cè)BALF恢復(fù)室溫，按照說明書的操作要求進(jìn)行檢測(cè)，簡(jiǎn)述步驟如下：稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，將100 μL的標(biāo)準(zhǔn)品或樣本加入酶標(biāo)板，均設(shè)復(fù)孔；封板膜封板后37 ℃孵育30 min，棄去液體，洗滌液洗滌5次；加顯色A液、B液各50 μL，振蕩混勻后37 ℃孵育15 min，加中止液50 μL后，Bio-Rad xMark分光光度計(jì)測(cè)定450 nm和630 nm雙波長(zhǎng)下的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品做出濃度與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出相應(yīng)的方程，求出各樣本BALF上清TGF-β1的濃度。

3.5小鼠肺組織TGF-β1的mRNA水平檢測(cè)采用TRIzol法提取各組肺組織的總RNA，NanoDrop 2000c分光光度計(jì)對(duì)其進(jìn)行定量，用RNA甲醛變性電泳法驗(yàn)證其完整性，之后使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，SYBR Green法進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件為50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共40個(gè)循環(huán)。用2-ΔΔCt法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。所用引物序列如表1所示，引物均由北京中美泰和生物技術(shù)有限公司合成。

3.6小鼠肺組織Ⅰ型膠原(collagen typeⅠ，ColⅠ)和Ⅲ型膠原(collagen typeⅢ，Col Ⅲ)水平的檢測(cè)將3.5中提取出的mRNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，SYBR Green法進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件為50 ℃ 2 min，95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共40個(gè)循環(huán)。用2-ΔΔCt法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。所用ColⅠ、Ⅲ引物序列如表1所示，引物均由北京中美泰和生物技術(shù)有限公司合成。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPad Prism 6.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)和方差分析，多重比較使用Tukey’s法，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。

表 1　 目的基因引物序列

結(jié)果

1肺組織ATP含量的變化

如圖1所示，在矽肺造模后的3 h，矽肺組與對(duì)照組相比肺組織ATP濃度顯著升高(P<0.01)；與溶劑對(duì)照組相比，Apy組肺組織ATP的含量明顯下降(P<0.01)。

Figure 1. Apyrase (Apy) treatment reduced ATP accumulation induced by silica administration. Mean±SEM. n=5.**P<0.01 vs NS group;##P<0.01 vs silica+Apy group.

圖1 三磷酸腺苷雙磷酸酶干預(yù)3 h后小鼠肺組織ATP含量的變化

2各組小鼠肺組織的病理學(xué)變化

造模后7 d的HE染色可見，NS組肺組織結(jié)構(gòu)基本正常，而silica組表現(xiàn)為大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔增寬，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，炎癥評(píng)分顯著升高(P<0.01)；與溶劑組相比，Apy組肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等肺泡炎的癥狀明顯改善，肺組織炎癥評(píng)分顯著降低(P<0.05)，見圖2；造模后28 d肺組織天狼星紅染色表明，矽肺小鼠肺組織在偏振光下可見到呈團(tuán)塊狀分布的紅色粗大的Ⅰ型膠原及黃綠色細(xì)小的Ⅲ型膠原，而Apy干預(yù)小鼠肺組織硒結(jié)節(jié)的數(shù)量減少、規(guī)模減小，偏振光下觀察到膠原沉積明顯減輕，Image-Pro Plus 6.0軟件分析所得膠原容積分?jǐn)?shù)也顯著降低(P<0.01)，見圖3。

Figure 2. Histologic changes and inflammation score of the lung tissues from each group 7 d after oropharyngeal aspiration of silica suspension. Mean±SEM. n=5.**P<0.01 vs NS group;#P<0.05 vs silica+Apy group.

圖2三磷酸腺苷雙磷酸酶干預(yù)后小鼠肺組織炎癥的變化

3各組小鼠肺指數(shù)的變化

28 d矽肺組小鼠肺指數(shù)與溶劑組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，與對(duì)照組相比肺指數(shù)顯著升高(P<0.01)；Apy組肺指數(shù)與溶劑組相比顯著降低(P<0.01)，見圖3。

4肺組織Col Ⅰ和Col Ⅲ表達(dá)的變化

如圖3所示，與對(duì)照組相比，矽肺組肺組織ColⅠ和ColⅢ的mRNA表達(dá)水平明顯提高(P<0.05)；而Apy組肺組織ColⅠ和ColⅢ的mRNA表達(dá)水平與溶劑組相比顯著下降(P<0.05)。

5肺組織TGF-β1 mRNA的表達(dá)及肺泡灌洗液TGF-β1蛋白的表達(dá)

在矽肺造模的第7天，矽肺組和溶劑組肺組織TGF-β1的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著提高，Apy組肺組織TGF-β1的表達(dá)水平與溶劑組比較顯著降低(P<0.05)。與此一致，第7 天 Apy組肺泡灌洗液中TGF-β1蛋白的水平與溶劑組相比明顯降低(P<0.05),見圖4。

Figure 3.Changes of pulmonary fibrosis in the mice with apyrase (Apy) treatment. A: picrosirius red staining revealed that pulmonary fibrosis was attenuated by Apy treatment on day 28 after oropharyngeal aspiration of silica; B: Apy treatment reversed the rising trend of lung index and collagen volume fraction (CVF) of silicosis mice; C: the mRNA expression of collagen typeⅠ and collagen type Ⅲ in each group. Mean±SEM. n=5.**P<0.01 vs NS group;##P<0.01 vs silica+Apy group.

圖3三磷酸腺苷雙磷酸酶干預(yù)后小鼠肺組織纖維化程度的變化

6各組小鼠肺組織ATP含量和TGF-β1 mRNA表達(dá)水平的相關(guān)關(guān)系

Apy組小鼠ATP含量和TGF-β1表達(dá)水平與溶劑組相比顯著下降，為分析兩者關(guān)系，我們將小鼠肺組織ATP含量與相應(yīng)的肺組織TGF-β1的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示兩者呈明顯的正相關(guān)(r=0.908 1，P<0.01)，見圖4。

Figure 4.Changes of TGF-β1 at mRNA and protein levels in the mice with apyrase (Apy) treatment and the correlation between ATP level and TGF-β1 mRNA level. A: the expression of TGF-β1 at mRNA and protein levels in Apy treatment group were down-regulated; B: the positive correlation between ATP level and TGF-β1 mRNA expression level in the lung tissues. Mean±SEM.n=20.**P<0.01 vs NS group;#P<0.05,##P<0.01 vs silica+Apy group.

圖4三磷酸腺苷雙磷酸酶干預(yù)后小鼠TGF-β1在mRNA和蛋白水平表達(dá)的變化及其與肺組織ATP的相關(guān)關(guān)系

討論

矽肺是由于長(zhǎng)期慢性吸入游離SiO2引起免疫細(xì)胞激活、炎癥介質(zhì)釋放從而導(dǎo)致慢性炎癥遷延不愈，破壞肺的結(jié)構(gòu)并引起細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積，最終導(dǎo)致肺結(jié)構(gòu)的破壞。近年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者從免疫調(diào)節(jié)及細(xì)胞因子水平干預(yù)等方面對(duì)矽肺的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了廣泛探索，然而其確切發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。而最近的研究表明，在維持宿主穩(wěn)態(tài)的過程中，免疫系統(tǒng)不僅可以感受入侵的病原分子，還會(huì)受病理過程中產(chǎn)生的各種內(nèi)源性分子的影響[7]。ATP的積累在感染及纖維化疾病中可以通過調(diào)控炎癥通路、激活成纖維細(xì)胞等方式，參與炎癥反應(yīng)及組織重塑的過程[3, 10]。 Riteau等[7]的研究表明，使用Apy經(jīng)口咽滴入呼吸道可以明顯改善博來霉素導(dǎo)致的小鼠肺纖維化。本研究通過測(cè)定肺組織的ATP含量表明，矽肺造模后3 h小鼠肺組織有大量的ATP釋放和積累，而經(jīng)口咽吸入法給予Apy治療后，氣道中的ATP含量顯著下降，說明Apy清除肺組織局部ATP。與矽肺組相比，我們觀察到Apy組7 d小鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡間隔增寬、肺泡結(jié)構(gòu)破壞等肺泡炎的癥狀明顯減輕，炎癥評(píng)分顯著下降；28 d小鼠肺組織膠原的沉積明顯減輕，膠原容積分?jǐn)?shù)及肺系數(shù)顯著下降，而肺組織Col Ⅰ和Col Ⅲ的表達(dá)水平也明顯下降，表明Apy干預(yù)減輕了矽肺小鼠早期肺組織炎癥和晚期肺纖維化。

Harris等[11]認(rèn)為，TGF-β1是促進(jìn)肺纖維化的最直接的細(xì)胞因子，是最強(qiáng)的細(xì)胞外基質(zhì)沉淀促進(jìn)劑，在調(diào)控肺成纖維細(xì)胞增殖分裂及膠原蛋白的合成與降解過程中發(fā)揮重要作用。多項(xiàng)研究表明TGF-β1水平可作為矽肺早期檢測(cè)的指標(biāo)之一，也是治療矽肺的潛在作用靶點(diǎn)[12-13]。在Apy干預(yù)矽肺小鼠的過程中，我們觀察到Apy組TGF-β1在基因和蛋白水平表達(dá)均下調(diào)，且小鼠急性炎癥期肺泡炎的表現(xiàn)及后期纖維化的表現(xiàn)均顯著緩解。肺組織ATP含量和肺組織TGF-β1 mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性分析表明兩者呈明顯的正相關(guān)，因此Apy可能是通過降低肺組織ATP調(diào)控TGF-β1的表達(dá)從而減少膠原的沉積、成纖維細(xì)胞的增生以達(dá)到緩解矽肺的目的。

綜上所述，使用Apy可能通過局部清除呼吸道ATP而影響TGF-β1的表達(dá)，減輕矽肺的炎癥和纖維化表現(xiàn)。下一步的研究擬通過Apy清除ATP的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，探討ATP在矽肺中促炎癥、促纖維化作用的具體分子機(jī)制及其作為矽肺預(yù)防和治療靶點(diǎn)的可能性。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 羅森)

Intervention effects of apyrase on silica-induced pulmonary fibrosis in mice

SU Cheng-cheng1, XIANG Guo-an1, MA Yong-qiang2, ZHOU Xin2, PENG Shou-chun1, WEI Lu-qing1, JI Wen-jie1

(1Department of Respirology and Critical Care Medicine, Pingjin Hospital, Logistics University of Chinese People’s Armed Police Forces,2Tianjin Key Laboratory of Cardiovascular Remodeling and Target Organ Injury, Institute of Cardiovascular Disease and Heart Center, Tianjin 300162, China. E-mail: ji_wenjie@hotmail.com; wei_luqing@hotmail.com)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the effect of apyrase on the experimental silicosis. METHODS: C57BL/6 male mice were randomly divided into control group, silica treatment group, silica+apyrase group and silica+NS group. A mouse model of lung fibrosis was induced by crystalline silica particles (50 mg/kg, via oropharyngeal instillation), and were sacrificed at 3 h, 7 d, 14 d and 28 d. Apyrase was delivered by oropharyngeal aspiration at the same time and 4 h after silica challenge. The lung indexes were calculated and the concentration of ATP was detected by bioluminescent assay. The mRNA expression levels of collagen type Ⅰ(Col Ⅰ), collagen type Ⅲ (Col Ⅲ) and transforming growth factor β1 (TGF-β1) were examined by real-time PCR. The protein levels of TGF-β1 in bronchoalveolar lavage fluid were measured by ELISA. RESULTS: The elevated lung index and collagen levels showed that silicosis model was established successfully. Compared with silica group, apyrase treatment significantly alleviated silica-induced inflammation, reduced inflammation score on day 7， and decreased the lung index, collagen volume fraction and the mRNA expression of Col Ⅰand Col Ⅲ on day 28. Treatment with apyrase effectively down-regulated the mRNA levels of TGF-β1 in the lung tissues and TGF-β1 protein levels in bronchoalveolar lavage fluid on day 7.CONCLUSION: Apyrase attenuates the pulmonary inflammation and fibrosis of silicosis, which may be related with down-regulation of ATP and TGF-β1 in the lung tissues.

[KEY WORDS]Silicosis; Apyrase; Transforming growth factor β1

[文章編號(hào)]1000- 4718(2016)05- 0792- 06

[收稿日期]2016- 01- 07[修回日期] 2016- 03- 16

*[基金項(xiàng)目]國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81102088; No. 81441101)；天津市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 13JCYBJC22000; No. 15JCZDJC35000)；武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院重點(diǎn)項(xiàng)目(No. FYZ201510; No. FYZ201605)；武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院種子基金資助項(xiàng)目(No. FYM201538)

通訊作者△姬文婕 Tel: 022-60577283； E-mail: ji_wenjie@hotmail.com； 魏路清 Tel: 022-60578671； E-mail: wei_luqing@hotmail.com

[中圖分類號(hào)]R135.2; R363

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.05.004

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