朱 剛王 林王恒昌王立蘭陳士九唐志中樸聰雁

（1.灌南縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇連云港 222500；2.灌南縣海洋與漁業(yè)局，江蘇連云港 222500；3.灌南縣田樓動物防疫檢疫所，江蘇連云港 222500；4.灌南縣李集動物防疫檢疫所，江蘇連云港 222500）

豬口蹄疫、豬瘟與高致病性豬藍耳病疫苗不同免疫方案對其免疫效果的影響

朱 剛1王 林2王恒昌1王立蘭1陳士九3唐志中4樸聰雁1

（1.灌南縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇連云港 222500；2.灌南縣海洋與漁業(yè)局，江蘇連云港 222500；3.灌南縣田樓動物防疫檢疫所，江蘇連云港 222500；4.灌南縣李集動物防疫檢疫所，江蘇連云港 222500）

為確定合理有效的免疫程序來減少生豬的疫苗接種次數(shù)和應激反應，我們設計了相關試驗，以驗證多重免疫同時進行的可行性。本研究采用這3種疫苗的不同組合進行免疫，觀察各組免疫后的副反應以及測定不同時期抗體水平。根據(jù)各組的綜合分析，在免疫效果和免疫副反應的情況看，可選用D組免疫程序作為實際工作中的首選免疫程序。

疫苗；不同組合；免疫效果

豬口蹄疫、豬瘟與豬高致病性藍耳是一類動物疫病，給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來不可估計的損失，也只有通過疫苗注射是防控這三種重大動物疫病的首選方法，每年的春防、秋防等，農(nóng)業(yè)部及省市農(nóng)委給出的重大動物疫病的免疫實施方案是防控重大動物疫病的重要免疫依據(jù)，但對各個重大動物疫病的免疫方案是分別給出，而不是多種重大動物疫病聯(lián)合分階段給出的免疫方案（程序），雖然分別免疫產(chǎn)生的抗體效價高，但不省工，增加動物的保定次數(shù)，同時也加大了動物的應激，并且個別的重大動物疫病的免疫方案在時間上有沖突。為此，我市基層防疫員除按省市農(nóng)委給予的免疫方案進行免疫外，有的各自為政，免疫后產(chǎn)生的抗體或高或低，紛繁雜亂，為此我們灌南縣畜牧獸醫(yī)站展開了對高致病性豬高致病性藍耳病、豬瘟、豬O型口蹄疫疫苗聯(lián)合免疫的效果進行評價的研究，通過多種免疫方案（程序）分別對豬群進行實驗，一個豬群只能選擇一個免疫方案（程序），并嚴格按該免疫方案（程序）實施免疫，后通過抗體檢測，從而對所產(chǎn)生免疫抗體進行分析，找出最佳的免疫方案（程序），利用這個免疫方案（程序）才能達到最佳的免疫效果，有效的免疫組合既可減少豬只的保定與應激，又省功省時，這樣的科學免疫方案（程序）才是生豬防疫工作要遴選應用的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗地點及實驗動物

我們灌南縣李集鄉(xiāng)大楊村王中才家養(yǎng)豬場，從中選出5窩剛出生的豬只，在日齡上相近、母豬免疫用同一程序與用量、母源抗體相近，并且用同一品種的仔豬。每窩頭數(shù)分別為14頭、12頭、10頭、9頭、11頭。確保每次采樣7～10頭（中途可能有死亡的）。之后對每窩豬按規(guī)定的免疫方案（程序）進行免疫注射，在所選用的疫苗都作了事先的規(guī)定，如疫苗的生產(chǎn)廠家，批號乃至批次，用法，用量等都作統(tǒng)一安排，每窩豬選定一個免疫方案（程序）后，不作任何改動，直到各種疫苗按免疫方案（程序）注射完畢，并做好檔案，登記好豬只耳標號。

1.1.2 試驗疫苗

（1）口蹄疫為上海申聯(lián)生產(chǎn)的合成肽疫苗，批號：20140611，有效期：20150627。

（2）高致病性藍耳病疫苗為吉林和元生物工程有限公司生產(chǎn)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗，批號：20140605，有效期：20151223。

（3）豬瘟疫苗為北京華都詩華生物制藥有限公司的豬瘟耐熱保護劑活疫苗（細胞源），批號：135542，有效期至201512。

1.1.3 診斷試劑

豬瘟抗體ELISA試驗盒（BIONOTE韓國安捷公司，批號4413PO003）；藍耳抗體檢測試劑盒（BIONOTE韓國安捷公司，批號4404081）；豬口蹄疫病毒VPI結構蛋白ELISA抗體檢測試劑盒（上海申聯(lián)生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，批號20141101）。

1.2 方法

1.2.1 免疫方案（程序）

A、試驗動物選14頭仔豬的一窩

35日齡用口蹄疫、高致病性藍耳病疫苗、豬瘟疫苗耳后分點注射三種疫苗，劑量：口蹄疫1.2ml，高致病性藍耳病1.2頭份，豬瘟1.2頭份。

B、試驗動物選12頭仔豬的一窩

（1）高致病性藍耳病疫苗28日齡1.2頭份免疫一次

（2）豬瘟疫苗35日齡1.2頭份免疫一次

（3）口蹄疫疫苗42日齡1.2ml免疫一次

C、試驗動物選10頭仔豬的一窩

（1）高致病性藍耳病疫苗28日齡1.2頭份免疫一次

（2）口蹄疫疫苗、豬瘟疫苗35日齡分別用1.2ml與1.2頭份免疫一次

D、試驗動物選9頭仔豬的一窩

（1）高致病性藍耳病疫苗、豬瘟疫苗28日齡1.2頭份免疫一次

（2）口蹄疫疫苗35日齡用1.2ml與1.2頭份免疫一次

E、試驗動物選11頭仔豬的一窩

（1）口蹄疫疫苗、高致病性藍耳病疫苗28日齡用1.2ml與1.2頭份免疫一次

（2）豬瘟疫苗35日齡用1.2頭份免疫一次

五個免疫方案（程序）都實行耳后肌肉注射。豬瘟和高致病性藍耳病都用專門稀釋液。三種疫苗均為政府統(tǒng)一采購的疫苗。

1.2.2 免疫副反應觀察與分析

每次免疫后72h內，對各組試驗豬逐個觀察并記錄精神狀況、采食、發(fā)病、死亡等情況，統(tǒng)計免疫副反應。

1.2.3 采樣

對參加試驗的動物實行抽血采樣，分為三次，第一次采樣在最后一次免疫后14d抽血，第二次采樣在最后一次免疫后28d抽血，第三次采樣在最后一次免疫后42d抽血。

1.2.4 抗體監(jiān)測

豬瘟免疫抗體采用阻斷ELISA試驗檢測（BIONOTE），判定標準：豬瘟抗體ELISA試驗成立條件是：陰性對照的平均OD450值＞0.5，陽性對照的平均OD450值＜0.2。判斷標準：阻斷率＜40%為陰性；阻斷率≥40%判定為陽性。藍耳抗體檢測（BIONOTE）

ELISA 的S/P比例：S/P ＜ 0.4 陰性；S/P≥0.4判定為陽性。豬口蹄疫免疫抗體采用ELISA方法檢測。合成肽苗血清樣品用VPI結構蛋白ELISA抗體檢測試劑盒檢測（上海申聯(lián)）陰性對照的平均OD450值≤0.2，陽性對照的阻斷率≥0.5，且≤2.0試驗成立；判斷標準S/ P ＜ 0.3陰性；S/P≥0.3判定為陽性。

表1 A組試驗結果

表2 B組試驗結果

表3 C組試驗結果

表4 D組試驗結果

表5 E組試驗結果

2 結果

2.1 免疫副反應觀察結果

本實驗中共有56頭豬，分為5組，僅A組中有3頭出現(xiàn)不同程度精神不振、食欲下降的免疫副反應。

2.2 抗體監(jiān)測結果

由表1可見，A組中高致病性豬藍耳病與口蹄疫的免疫抗體合格率都為100%，超過國家規(guī)定標準80%，豬瘟第一次檢測合格，后兩次檢測僅為33.33%，沒有達到國家規(guī)定標準，且變異系數(shù)大。

由表2可見，B組三種病的免疫合格率都超過了80%國家規(guī)定標準，但僅高致病性藍耳病的變異系數(shù)大。

由表3可見，C組豬瘟的免疫合格率有兩次沒有超過80%國家規(guī)定標準，且變異系數(shù)大。高致病性豬藍耳病與口蹄疫的合格率為100%，變異系數(shù)比較平穩(wěn)。

由表4可見，D組中高致病性豬藍耳病與口蹄疫的免疫抗體合格率都為100%，超過國家規(guī)定標準80%，豬瘟開始合格，后一次檢測為40.00%，沒有達到國家規(guī)定標準。

由表5可見，E組由于豬生病少采樣一次，但從另外兩次采樣的檢測結果看，豬瘟的抗體合格率都沒達標，藍耳病與口蹄疫雖達到80%的國家規(guī)定標準，但存在免疫率下降的趨勢，且變異系數(shù)大。

3 小結與討論

（1）根據(jù)對A、B、C、D、E組的綜合分析，在免疫合格率，變異系數(shù)及免疫副反應的情況看，可選用D組免疫程序，可作為實際工作中的首選免疫程序。

（2）試驗結果可以看出，A組省功省時，但3頭有免疫副反應，豬瘟免疫效果差。B組各項指標都合格，也是省市免疫實施方案的使用方法，但費時費力，保定次數(shù)多，應激反應重。當然小型的規(guī)模場可以使用。C組減少了保定次數(shù)，但在豬瘟免疫上效果不佳，如果加強豬瘟的二免，C組可用作養(yǎng)殖戶的免疫程序。E組總體免疫效果較差，不作為免疫程序使用。

（3）從A、B、C、D、E組總體免疫效果的情況分析，無論哪組試驗，高致病性豬藍耳病都有很高的合格率，可以不需要二次免疫。豬瘟的免疫效果總體保護率差，且變異系數(shù)大，需要二次免疫。口蹄疫總體抗體水平較好，結合口蹄疫的使用說明書，口蹄疫也應加強二免工作。

[1]董保豫，猶銀俊，周啟澤，等.豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍耳病疫苗不同組合免疫效果觀察[J].貴州畜牧獸醫(yī)，2011，35（5）：16-18.

[2]黃文忠，徐志斌，呂粵，等.豬瘟、豬O型口蹄疫、高致病性豬藍耳病疫苗聯(lián)合免疫效果評價[J].云南畜牧獸醫(yī)，2011，（2）：5-7.