唐漢慶　韋　祎　盧　蘭　陳　樺　李曉華　朱曉瑩　勞傳君

(右江民族醫(yī)學院，廣西　百色　533000)

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鐵皮石斛對小鼠端粒酶活性及抗衰老能力的影響

唐漢慶韋祎1盧蘭2陳樺3李曉華朱曉瑩勞傳君

(右江民族醫(yī)學院，廣西百色533000)

〔摘要〕目的探討鐵皮石斛對小鼠端粒酶活性及抗衰老能力的影響。方法清潔級雄性昆明種小鼠100只隨機分為正常對照組、模型組、鐵皮石斛低劑量組、中劑量組、高劑量組共5組。每組20只。對鐵皮石斛低劑量組、中劑量組、高劑量組按125、250、500 mg/kg分別給予鐵皮石斛灌胃，對照組灌胃相同體積的生理鹽水。每天1次，連續(xù)30 d。然后檢測活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、腦脂褐素(LF)及端粒酶活性。結果與對照組比較，模型組ROS、MDA和LF水平升高或顯著升高(P<0.05或P<0.01)，SOD、GSH-Px和端粒酶活性均顯著降低(P<0.01)。與模型組比較，各劑量組SOD、GSH-Px和端粒酶活性均升高或顯著升高(P<0.05或P<0.01)，ROS、MDA和LF水平下降或顯著下降(P<0.05或P<0.01)。結論鐵皮石斛增強抗氧化酶和端粒酶活性，提高抗氧化能力，可能是其抗衰老的機制之一。

〔關鍵詞〕鐵皮石斛；抗衰老；端粒

鐵皮石斛為蘭科石斛屬多年生草本植物，是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材，道家經(jīng)典《道藏》將其列為中華“九大仙草”之首，現(xiàn)代藥理學研究表明具有抗疲勞、提高免疫力、抗氧化、抗衰老、降血壓、抗腫瘤、防輻射性損傷等作用〔1～4〕。鐵皮石斛抗氧化和抗衰老作用是相互聯(lián)系的，關于機體的衰老機制，有研究認為與體內自由基增多及端粒酶活性的變化有關〔5,6〕，本實驗擬觀察鐵皮石斛對衰老小鼠的抗氧化和抗衰老作用及機制。

1材料與方法

1.1動物與分組清潔級雄性昆明種小鼠100只，體重(22.06±2.1)g，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2013-0005。動物在安靜環(huán)境下分籠飼養(yǎng)，室溫控制在(23±1)℃范圍內，相對濕度60%～70%，小鼠以基礎飼料常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水，小鼠適應性飼養(yǎng)1 w后，隨機數(shù)字表法分為5組：對照組、模型組、鐵皮石斛低劑量組、中劑量組、高劑量組。每組20只。

1.2主要試劑與儀器D-半乳糖(北京化學試劑公司)；鐵皮石斛膠囊(廣西浙商投資有限公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、腦脂褐素(LF)檢測試劑盒(均由南京建成生物工程研究所提供)；端粒酶活性檢測試劑盒(美國 BPB 公司)；臺式高速低溫離心機(Z360K型，德國HERMLE公司);電子天平(AE160型，瑞士Mettler公司);分光光度計(722型，上海精密科學儀器有限公司)；熒光分光光度計(F-3000型，日本日立)；電動玻璃勻漿機(DY-89型，寧波新芝公司)；PCR儀(7900HT型,ABI公司)；酶標儀(MK3型，Thermo Labsystem 公司)。

1.3動物造模與給藥參照中華人民共和國衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范(2003)》抗氧化功能檢驗方法D-半乳糖腹腔注射造模，取80只進行造模，造模后分為模型組、鐵皮石斛低劑量組、中劑量組、高劑量組4組，余下為對照組。鐵皮石斛膠囊用蒸餾水溶解，配成濃度為50 mg/ml的溶液。根據(jù)人體推薦用量25mg/ml設立相當于人體推薦用量的 5、10、20倍3個劑量即鐵皮石斛低劑量組、中劑量組、高劑量組(劑量分別為125、250、500 mg/kg)。低、中、高劑量組分別以上述3個相應劑量標準折合成給藥體積數(shù)，模型組和對照組給予等體積的生理鹽水。每天灌胃1次，連續(xù)30 d。

1.4指標檢測取靜脈血2 ml，離心(4℃，1 000 r/min,10 min),分離血清,-70℃凍存。采用比色法測定血清ROS，二硫代二硝基苯甲酸法測定GSH-Px活性 ，黃嘌呤氧化酶法測定血清SOD活性；硫代巴比妥酸法測定MDA；PCR-ELISA 法檢測血清端粒酶活性。另取大鼠腦組織液氮中凍存，檢測前用生理鹽水制備成10% 勻漿，離心(4℃，3 000 r/min,15 min)，取上清熒光法測定LF含量。均嚴格按說明書操作進行檢測。

1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS13.0軟件行單因素方差分析及t檢驗。

2結果

2.1SOD和GSH-Px活性檢測結果與對照組比較，模型組SOD和GSH-Px活性均顯著下降(P<0.01)。與模型組比較，低劑量組SOD和GSH-Px活性有升高趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學意義(P均>0.05)；中劑量組SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05)；高劑量組SOD和GSH-Px活性顯著升高(P<0.01)。見表1。

2.2ROS、MDA和LF檢測結果與對照組比較，模型組ROS、MDA和LF水平升高或顯著升高(P<0.05或P<0.01)；與模型組比較，低劑量組ROS、MDA和LF水平有下降趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學意義(P均>0.05)；中劑量組ROS、MDA和LF水平下降(P<0.05)；高劑量組ROS、MDA和LF水平下降或顯著下降(P<0.05或P<0.01)。見表1。

2.3端粒酶活性檢測結果與對照組端粒酶活性(78.68± 6.24)比較，模型組顯著降低(42.56± 3.21，P<0.01)。與模型組比較，低劑量組端粒酶活性升高(56.65± 5.65，P<0.05)，中劑量組(70.24± 5.38)和高劑量組顯著升高(72.35±6.12，P<0.01)。

表1各組SOD、GSH-Px活性、ROS、MOA和LF結果比較(x±s，n=20)

組別SOD(U/ml)GSH-Px(U/ml)ROS(ng/L)MDA(mol/L)LF(μg/g)對照組185.25±14.2196.21±7.8621.31±5.965.62±1.1248.36±7.22模型組92.16±7.152)34.22±4.222)50.25±8.652)20.32±2.022)68.21±8.861)低劑量121.11±9.2453.68±4.9634.22±7.5615.22±1.6862.26±8.23中劑量163.74±10.813)75.22±5.843)26.11±6.363)8.06±1.523)52.38±7.983)高劑量172.42±11.954)91.24±7.234)20.35±6.144)5.66±1.064)50.54±7.623)

與對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較：3)P<0.05，4)P<0.01

3討論

D-半乳糖注射造模是常用的制備衰老模型的方法，其機制是D-半乳糖通過半乳糖氧化酶催化生成醛糖和過氧化氫，產(chǎn)生大量ROS和超氧自由基，大量超氧自由基使體內脂質過氧化反應加強〔7〕，脂質過氧化可以產(chǎn)生大量MDA，MDA能交聯(lián)蛋白和 DNA,促使LF的大量形成，加重過氧化損傷〔8,9〕，氧化損傷可引起機體細胞功能損害及抗氧化酶如SOD、GSH-Px活性降低，導致衰老的發(fā)生。

SOD和GSH-Px是人體內主要的抗氧化酶。SOD能特異性地清除體內氧自由基，把氧自由基歧化生成過氧化氫〔10〕，然后通過GSH-Px將過氧化氫轉化為水從而發(fā)揮抗氧化作用。本實驗結果表明D-半乳糖注射造模，已引起模型動物體內氧化損傷，這是衰老發(fā)生的重要環(huán)節(jié)，本文提示鐵皮石斛可從提高抗氧化能力、減少氧化產(chǎn)物生成以及增強抗氧化酶活性方面發(fā)揮延緩衰老作用。

由于氧化損傷可引起機體細胞功能的損害，導致細胞凋亡，從而使機體表現(xiàn)出衰老的特征。近年相關研究〔11〕結果表明端粒酶使細胞壽命延長，顯示其在抗衰老方面的良好前景。端粒酶活性的高低在一定程度上反映了機體抗衰老能力的高低〔12〕，本實驗結果提示鐵皮石斛除了提高抗氧化能力、增強抗氧化酶活性外，還可以增強端粒酶活性，對鐵皮石斛抗衰老的機制值得繼續(xù)研究。

4參考文獻

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〔2014-12-30修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)

〔中圖分類號〕R-331

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)08-1809-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.08.008

通訊作者：勞傳君(1981-)，男，講師，主要從事人體結構與功能研究。

基金項目：廣西高校科學技術研究項目(2013YB182)

1海南醫(yī)學院2惠州市第四人民醫(yī)院

3惠州衛(wèi)生職業(yè)技術學院

第一作者：唐漢慶(1976-)，男，副教授，博士，主要從事尼族醫(yī)藥和疾病中西醫(yī)結合基礎研究。