柳帥 王振鵬 張治文 宋照營★

鼻咽癌指發(fā)生于鼻咽腔頂部和側(cè)壁的惡性腫瘤，是我國常見的惡性腫瘤之一。由于鼻咽癌病理位置隱匿，且早期表現(xiàn)無明顯特征，多數(shù)患者就診時(shí)已顯示轉(zhuǎn)移［1-2］。目前，臨床主要依靠影像學(xué)、病理活檢、細(xì)胞涂片等方式進(jìn)行檢查。研究認(rèn)為鼻咽癌腫瘤標(biāo)志物或相關(guān)指標(biāo)有助于早期診斷鼻咽癌［3］。血清細(xì)胞角蛋白19 片段（cytokeratin 19 fragment，CYFRA21-1）、惡性腫瘤特異性生長因子（tumor specific growth factors，TSGF）是臨床常見的血清腫瘤標(biāo)志物，研究顯示鼻咽癌等惡性腫瘤患者具更高的血清CYFRA21-1、TSGF 水平，兩者可作為臨床診斷早期鼻咽癌的輔助血清腫瘤標(biāo)志物［4-5］，但血清CYFRA21-1、TSGF 診斷早期鼻咽癌的特異度欠佳［6-7］。

miR-93 是具有調(diào)控作用的非編碼RNA，最新研究認(rèn)為miR-93 與鼻咽癌腫瘤生成/侵襲/轉(zhuǎn)移、細(xì)胞有絲分裂、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等緊密相關(guān)［8］。本研究將通過分析CYFRA21-1、TSG 及miR-93 檢測(cè)對(duì)早期鼻咽癌的診斷應(yīng)用價(jià)值，以期為早期鼻咽癌的臨床診治提供參考，具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年6月至2020年6月于安陽市中醫(yī)院接受診療的78 例早期鼻咽癌患者為鼻咽癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①磁共振成像（MRI）檢查、病理活檢綜合確診早期鼻咽癌；②年齡≥18 歲；③符合鼻咽癌臨床分期標(biāo)準(zhǔn)［9］，Ⅰ期48 例、Ⅱ期30 例；④臨床資料完善。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤疾??；②確診嚴(yán)重器質(zhì)性疾病；③確診神經(jīng)系統(tǒng)病變；④存在認(rèn)知障礙。另選取同期78 例鼻咽炎患者為鼻咽炎組，選取同期體檢的78 例健康成人為對(duì)照組。三組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。本研究符合《赫爾辛基宣言》原則。

表1 三組的一般資料比較［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of general data of the three groups［（±s），n（%）］

表1 三組的一般資料比較［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of general data of the three groups［（±s），n（%）］

組別鼻咽癌組鼻咽炎組對(duì)照組F/χ2值P 值性別男58（74.35）59（75.64）61（78.21）0.856 0.214女20（25.64）19（24.35）17（21.79）年齡（歲）55.16±5.09 56.91±7.12 55.57±6.28 1.689 0.187 BMI（kg/m2）24.98±2.69 24.74±2.77 24.81±3.05 0.147 0.863

1.2 方法

抽取所有受試者空腹肘部靜脈血3 mL，放入EDTA 抗凝管中，12 000 rpm（離心半徑10 cm）離心處理15 min 得血清與血漿，將血清置于-20℃保存待測(cè)。采用Elecsys1010 型電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑盒（瑞士Roche 公司）檢測(cè)CYFRA21-1；采用生化比色法檢測(cè)TSGF，試劑盒購于新大陸生物技術(shù)有限公司；采用熒光定量PCR 檢測(cè)miR-93 水平，試劑盒購自新大陸生物技術(shù)有限公司，引物序列由賽百慷（上海）生物技術(shù)股份有限公司合成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS24.0 分析整理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)）；計(jì)數(shù)資料采用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；Logistic回歸分析構(gòu)建血清CYFRA21-1、TSGF、miR-93 聯(lián)合診斷模型，模型擬合度采用Hosmer-Lemeshow 檢驗(yàn)，繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析診斷價(jià)值，曲線下面積值（area under the ROC curve，AUC）的比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清指標(biāo)比較

鼻咽癌組、鼻咽炎組CYFRA21-1、TSGF、miR-93 水平均顯著高于對(duì)照組，且鼻咽癌組CYFRA21-1、TSGF、miR-93水平顯著高于鼻咽炎組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 三組血清指標(biāo)比較（±s）Table 2 Comparison of serum indexes of the three groups（±s）

表2 三組血清指標(biāo)比較（±s）Table 2 Comparison of serum indexes of the three groups（±s）

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05；與鼻咽炎組相比，bP＜0.05。

組別鼻咽癌組鼻咽炎組對(duì)照組F 值P 值n 78 78 78 CYFRA21-1（ng/mL）2.70±0.63ab 1.99±0.49 1.58±0.35 98.93＜0.001 TSGF（U/L）79.14±15.22ab 60.49±18.24 55.11±15.15 48.88＜0.001 miR-93 17.06±5.82ab 11.58±3.03 4.05±0.95 227.13＜0.001

2.2 早期鼻咽癌患者不同臨床分期的血清指標(biāo)比較

Ⅱ期血清CYFRA21-1、TSGF、miR-93 水平高于Ⅰ期（P＜0.05）。見表3。

表3 早期鼻咽癌患者不同臨床分期的血清指標(biāo)比較（±s）Table 3 Comparison of serum indexes among patients with early nasopharyngeal carcinoma in different clinical stages（±s）

表3 早期鼻咽癌患者不同臨床分期的血清指標(biāo)比較（±s）Table 3 Comparison of serum indexes among patients with early nasopharyngeal carcinoma in different clinical stages（±s）

組別Ⅰ期Ⅱ期t 值P 值n 48 30 CYFRA21-1（ng/mL）2.43±0.65 3.13±0.62 4.709＜0.001 TSGF（U/L）75.35±14.29 85.21±16.05 2.827 0.006 miR-93 15.07±5.31 20.25±6.20 3.928＜0.001

2.3 血清CYFRA21-1、TSGF、miR-93 及其聯(lián)合診斷早期鼻咽癌的價(jià)值

ROC 曲線分析顯示CYFRA21-1、TSGF、miR-93 聯(lián)合診斷鼻咽癌AUC 為0.938，敏感度、特異度分別為91.03%、85.90%，高于單一指標(biāo)診斷（P＜0.05），見表4、圖1。

圖1 聯(lián)合診斷早期鼻咽癌的價(jià)值Figure 1 The value of combined diagnosis of early nasopharyngeal carcinoma

表4 各項(xiàng)血清指標(biāo)聯(lián)合診斷早期鼻咽癌的價(jià)值分析Table 4 Value of the combination of serum indexes in the diagnosis of early nasopharyngeal carcinoma

3 討論

鼻咽癌是我國相對(duì)高發(fā)的疾病，相關(guān)研究顯示，早期鼻咽癌患者的5年生存率可達(dá)95%，而晚期患者低于70%，因此早期診斷尤為重要［10］。目前，鼻咽癌診斷多數(shù)為存在臨床癥狀時(shí)，通過病理學(xué)檢查與多聚酶聯(lián)檢查為參考診斷。但早期鼻咽癌臨床癥狀不明顯，且病理檢查在一定程度上受采樣、病變部位等因素影響，存在漏診、誤診風(fēng)險(xiǎn)。探究可靠的血清腫瘤生物標(biāo)志物用于鼻咽癌的早期診斷一直是臨床關(guān)注的焦點(diǎn)，于高危鼻咽癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷及早治療有重要意義［11］。

血清CYFRA21-1 是指細(xì)胞角質(zhì)蛋白19 片段，其廣泛分布于鱗狀上皮和組織表面，正常狀態(tài)下以寡聚物的形式存在，含量極低。以往研究證實(shí)惡性腫瘤患者血清CYFRA21-1 水平存在異常升高現(xiàn)象［12］。本研究結(jié)果顯示，鼻咽癌患者血清CYFRA21-1 水平顯著高于鼻咽炎及健康人群，且Ⅱ期患者血清CYFRA21-1 水平明顯高于Ⅰ期患者，說明鼻咽癌分期越高，CYFRA21-1 水平越高，這與以往報(bào)道結(jié)論相符［13］。究其原因，當(dāng)鱗狀上皮組織惡變激活蛋白酶后，激活的蛋白酶可加快降解細(xì)胞速度，使細(xì)胞中大量角蛋白碎片斷釋放進(jìn)入血液，導(dǎo)致血清CYFRA21-1 水平升高。在診斷價(jià)值上，本研究ROC 曲線分析顯示CYFRA21-1 診斷鼻咽癌的靈敏度與特異度分別為85.90%、62.82%，雖AUC 高于血清TSGF、miR-93，但其特異性不甚理想，分析可能與相關(guān)上皮起源的腫瘤均可表達(dá)細(xì)胞角質(zhì)蛋白19 片段有關(guān)，由此也可見，單一血清CYFRA21-1 診斷早期鼻咽癌存在局限性。

TSGF 是腫瘤特異性生長因子，與腫瘤細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞周圍毛細(xì)血管增生密切相關(guān)，作為廣譜的腫瘤生物標(biāo)志物，其在乳腺癌、肝癌等多種惡性腫瘤疾病中均有異常高表達(dá)現(xiàn)象。本研究結(jié)果顯示，鼻咽癌組TSGF 水平顯著高于鼻咽炎及健康對(duì)照組。隨著惡性腫瘤的形成及增殖，TSGF 可逐漸被釋放至外周血，因此在惡性腫瘤形成早期TSGF便可明顯上升［14］。本研究結(jié)果還顯示，Ⅱ期患者血清TSGF 水平明顯高于I 期患者，說明鼻咽癌分期越高，TSGF 水平越高。既往研究報(bào)道，血清TSGF 可作為臨床監(jiān)測(cè)腫瘤消長的標(biāo)志物，但TSGF 監(jiān)測(cè)也存在一定局限性，其不僅可促進(jìn)腫瘤血管的增生，對(duì)非腫瘤血管同樣起到作用［15］。本研究ROC 曲線分析結(jié)果顯示，TSGF 診斷鼻咽癌的特異度相對(duì)欠佳，僅為74.36%，敏感度也僅為80.77%、74.36%，由此可見，血清TSGF 雖可作為臨床診斷早期鼻咽癌的血清標(biāo)志物，但其效能仍有提升空間。

miR-93 是臨床發(fā)現(xiàn)的一種非編碼短序小RNA，其可發(fā)揮抑制癌基因的作用，同時(shí)作為檢測(cè)早期癌癥的分子標(biāo)記，其能預(yù)測(cè)或早期診斷喉鱗癌等腫瘤疾病［16］。本研究結(jié)果顯示，鼻咽癌患者的miR-93 水平顯著高于鼻咽炎組及對(duì)照組，且伴隨腫瘤分期的增加，血清miR-93 水平顯著上升。李中華等［17］研究也顯示miR-93 在鼻咽癌組織中具有較高表達(dá)。既往研究也顯示，miR-93 參與鼻咽癌發(fā)展進(jìn)程，促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖及侵襲，且可通過靶向上調(diào)表皮生長因子與白細(xì)胞介素8 的表達(dá)促進(jìn)腫瘤血管的生成［18］。在診斷價(jià)值上，本研究ROC 曲線分析顯示，miR-93 診斷鼻咽癌的靈敏度與特異度分別為53.85%、93.59%，雖特異性較高，但敏感度不足60%?；诓煌迥[瘤生物標(biāo)志物診斷早期鼻咽癌的優(yōu)劣勢(shì)，本研究將血清CYFRA21-1、TSGF、miR-93 進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，結(jié)果顯示三者聯(lián)合診斷鼻咽癌AUC 上升至0.938，顯著高于單一指標(biāo)診斷。何平等［19］研究也聯(lián)合VCA-IgA、CEA 及CYFRA21-1 等指標(biāo)診斷早期鼻咽癌，認(rèn)為上述指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)有助于提高診斷效能，這一定程度支持了本研究結(jié)論。

綜上所述，血清CYFRA21-1、TSGF、miR-93 均可作為臨床診斷早期鼻咽癌的血清腫瘤生物標(biāo)志物，且上述三種血清指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可進(jìn)一步提升診斷效能，彌補(bǔ)單一血清指標(biāo)輔助診斷的局限性。