鄭潔，曹澤標(biāo)，朱瑩

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005

基于“病證結(jié)合”理論探討潰瘍性結(jié)腸炎脾腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型建立與評(píng)價(jià)

鄭潔1，曹澤標(biāo)1，朱瑩2

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005

目前，“病證結(jié)合”理論已在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立與評(píng)價(jià)中被廣泛運(yùn)用，基于該理論，采用復(fù)合法建立的潰瘍性結(jié)腸炎脾腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型，在宏觀表征上要求突出“病”與“證”兩者的特點(diǎn)，同時(shí)結(jié)合微觀生物學(xué)指標(biāo)及以方測(cè)證對(duì)模型進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。但該病證結(jié)合模型在建立與評(píng)價(jià)過(guò)程中凸顯的病證關(guān)聯(lián)性不強(qiáng)、模型多重性、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)局限等問(wèn)題阻礙了其進(jìn)一步發(fā)展。因此，進(jìn)一步改進(jìn)該模型建立及評(píng)價(jià)體系，對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎脾腎陽(yáng)虛病證結(jié)合動(dòng)物模型的完善有著十分重要的意義。

潰瘍性結(jié)腸炎；脾腎陽(yáng)虛；病證結(jié)合；動(dòng)物模型

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種病因尚不十分清楚的直腸與結(jié)腸慢性非特異性炎癥性疾病。該病多呈反復(fù)發(fā)作，病程纏綿，治療難度大，復(fù)發(fā)率高，具有一定的癌變率，被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。中醫(yī)認(rèn)為，本病日久傷陽(yáng)，脾腎陽(yáng)虛是 UC反復(fù)發(fā)病的根本病機(jī)，且貫穿整個(gè)發(fā)病過(guò)程［1］。臨床上，中醫(yī)藥在治療UC方面具有自身的特色與優(yōu)勢(shì)，但中醫(yī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的不足使中醫(yī)證候本質(zhì)研究遭遇瓶頸。為適應(yīng)中醫(yī)辨病辨證相結(jié)合的臨床實(shí)際，建立病證結(jié)合動(dòng)物模型日益受到關(guān)注，并逐漸成為中醫(yī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型發(fā)展的新方向。為此，筆者就相關(guān)問(wèn)題探討如下。

1 “病證結(jié)合”理論在動(dòng)物模型中的運(yùn)用

“病”與“證”是不同醫(yī)學(xué)體系中的兩個(gè)概念，是分別從不同角度對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)，“辨病”是西醫(yī)特長(zhǎng)，“辨證”則是中醫(yī)的優(yōu)勢(shì)。所謂病證結(jié)合動(dòng)物模型，是指在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，適當(dāng)結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)知識(shí)，分別（或同時(shí)）采用傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)病因復(fù)制證候動(dòng)物模型和采用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病因復(fù)制疾病動(dòng)物模型，令動(dòng)物模型同時(shí)具有疾病與證候特征。病證結(jié)合的實(shí)質(zhì)是西醫(yī)的“病”和中醫(yī)的“證”相結(jié)合，由于融合了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病理學(xué)模型和中醫(yī)證候模型兩方面共同的因素和特點(diǎn)，使模型動(dòng)物同時(shí)具有西醫(yī)疾病和中醫(yī)證候特征。

目前常用的病證結(jié)合動(dòng)物模型制作方法有3種：①在中醫(yī)傳統(tǒng)病因造成相應(yīng)的證候動(dòng)物模型基礎(chǔ)上建立疾病模型；②在建立疾病動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上再施以中醫(yī)病因造成相應(yīng)的證候；③對(duì)疾病動(dòng)物模型進(jìn)行辨證建立的病證結(jié)合動(dòng)物模型［2］。結(jié)合臨床實(shí)際及科研基礎(chǔ)，無(wú)論選用哪種方法，疾病和證候的雙重特征必須在病證結(jié)合動(dòng)物模型中得以反映。陳氏［3］在采用耗氣破氣法加饑飽失常法聯(lián)合建立脾虛證小鼠動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上再施予醋酸法復(fù)制胃潰瘍動(dòng)物模型，通過(guò)該復(fù)合因素造模制成病證結(jié)合的動(dòng)物模型。楊氏等［4］先通過(guò)對(duì)大鼠進(jìn)行一次性氣管內(nèi)博來(lái)霉素滴入復(fù)制肺纖維化模型，在此基礎(chǔ)上再予每日灌胃腺嘌呤建立腎陽(yáng)虛證模型，從而建立起同時(shí)具備腎陽(yáng)虛和肺纖維化特征的腎陽(yáng)虛肺纖維化大鼠模型，并在模型建立后通過(guò)四診表現(xiàn)以及血肌酐、尿素氮、皮質(zhì)醇和肺腎病理改變等綜合評(píng)價(jià)該病證結(jié)合模型。

目前，病證結(jié)合建立的動(dòng)物模型還缺乏合理的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)價(jià)方式，大部分學(xué)者在陳氏［5］提出的證候動(dòng)物模型的診斷依據(jù)基礎(chǔ)上予以總結(jié)，普遍趨于如下認(rèn)識(shí)。①著重癥狀和體征：中醫(yī)強(qiáng)調(diào)“辨證論治”，其中“證”的判定是基于中醫(yī)“四診”資料的采集，證候模型研究同樣應(yīng)遵循中醫(yī)辨證的臨床思維程序，只有動(dòng)物被誘導(dǎo)出與人體某一特定的證候相同的特征表現(xiàn)，才能被認(rèn)為是某一證候動(dòng)物模型。如田氏等［6］認(rèn)為，局限于當(dāng)前科學(xué)技術(shù)水平，證候表征背后的生物學(xué)基礎(chǔ)或病理生理依據(jù)并未被透徹挖掘，建立證候模型應(yīng)注重以動(dòng)物體表特征為模型評(píng)價(jià)的依據(jù)，再進(jìn)一步探討其生物學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。因此，挖掘動(dòng)物身上具有診斷意義的信息特征，尋找四診范圍內(nèi)人和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的聯(lián)系和相似性，對(duì)模型進(jìn)行恰當(dāng)?shù)谋孀C診斷以及建立證候模型評(píng)價(jià)指標(biāo)體系有著十分重要的意義。②結(jié)合實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)：疾病證候的存在，必然有其賴以確立的關(guān)鍵物質(zhì)基礎(chǔ)，因此，科學(xué)精確及微觀量化的現(xiàn)代分子生物學(xué)客觀指標(biāo)在一定程度上可為病證結(jié)合模型評(píng)價(jià)的客觀化提供支持，但限制于目前科研水平，這些客觀指標(biāo)往往只能片面反映模型的生物學(xué)物質(zhì)變化，故現(xiàn)階段通常被當(dāng)作模型評(píng)價(jià)中的輔助指標(biāo)。③重視藥物反證：鑒于“有是證用是方”思路，結(jié)合方證相應(yīng)理論，采用藥物反證，通常選用臨床上常用且療效確切的經(jīng)典方藥，以方測(cè)證，通過(guò)對(duì)證候模型的佐證判別來(lái)衡量該模型是否成功，從而加強(qiáng)病證結(jié)合模型建立的合理性和科學(xué)性。

總之，基于“病證結(jié)合”思想，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型從單純的證候模型及疾病模型，向病證結(jié)合模型發(fā)展，為研究現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病及中醫(yī)證候的本質(zhì)創(chuàng)造了更好條件，對(duì)深層次研究和探討中醫(yī)藥防治相關(guān)病證具有重要意義。

2 潰瘍性結(jié)腸炎脾腎陽(yáng)虛證病證結(jié)合動(dòng)物模型建立與評(píng)價(jià)

當(dāng)前針對(duì)UC病證結(jié)合動(dòng)物模型，研究較多的是肝郁脾虛證模型及脾虛證模型，脾腎陽(yáng)虛型則較少。筆者在查閱眾多文獻(xiàn)資料后，發(fā)現(xiàn)真正為該模型設(shè)計(jì)建立方案并予以評(píng)價(jià)的文章寥寥可數(shù)。就模型研究思路而言，大體的理論體系已形成，現(xiàn)在的病證結(jié)合模型都是建立在相應(yīng)“病”和“證”存在的基礎(chǔ)上，UC脾腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型也不例外。單從 UC“疾病”動(dòng)物模型而言，目前在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯糠矫嬉演^為成熟，建立模型有多種方法，如免疫法、化學(xué)法、復(fù)合法以及基因模型等，其中三硝基苯磺酸-乙醇復(fù)合法通過(guò)對(duì)結(jié)腸黏膜屏障的損害與免疫調(diào)節(jié)失衡原理造模，是目前較為公認(rèn)的UC經(jīng)典造模方法。模型建立后再?gòu)谋碚?、病理組織形態(tài)學(xué)和生化指標(biāo)等方面進(jìn)行驗(yàn)證及評(píng)價(jià)。同時(shí)，“脾腎陽(yáng)虛”證候模型則是基于中醫(yī)基礎(chǔ)理論指導(dǎo)，在脾陽(yáng)虛證、腎陽(yáng)虛證模型基礎(chǔ)上進(jìn)行組合。其在造模方法上既有中醫(yī)傳統(tǒng)病因（苦寒瀉下、寒濕傷陽(yáng)、過(guò)食肥甘、饑飽失常等），同時(shí)綜合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究，即通過(guò)外源性糖皮質(zhì)激素（如氫化可的松等）、腺嘌呤、硫脲類等藥物影響腎上腺皮質(zhì)軸、甲狀腺軸、性腺軸等靶腺軸負(fù)反饋調(diào)節(jié)途徑，使動(dòng)物體內(nèi)的激素代謝紊亂。所研制的動(dòng)物模型能較好模擬脾腎陽(yáng)虛證的臨床表現(xiàn)（大便溏泄、消瘦、食欲下降、體質(zhì)量減輕、畏寒聚堆、弓背蜷縮等），建模后再根據(jù)中西醫(yī)理論選擇相關(guān)性好、特異性強(qiáng)的客觀生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，從而系統(tǒng)綜合評(píng)價(jià)所建立模型的科學(xué)性及合理性。如朱氏等［7］采用番瀉葉煎劑灌胃+氫化可的松頸部皮下注射聯(lián)合 2，4-二硝基氯苯-乙酸法建立慢性UC脾腎陽(yáng)虛型大鼠模型，通過(guò)大鼠行為學(xué)、宏觀表征、病理組織形態(tài)學(xué)評(píng)分及光鏡評(píng)估模型成功率。實(shí)驗(yàn)表明，該模型的表征及潰瘍炎癥類似人慢性復(fù)發(fā)性、持續(xù)性UC脾腎陽(yáng)虛型的改變。許氏等［8］通過(guò)采用灌服大黃水煎液+肌肉注射氫化可的松并結(jié)合2，4，6-三硝基苯磺酸加乙醇灌腸復(fù)合建立UC脾腎陽(yáng)虛型大鼠模型，在此基礎(chǔ)上通過(guò)相關(guān)藥物干預(yù)，以探討該藥物治療脾腎陽(yáng)虛型UC的作用機(jī)制。

總之，目前UC脾腎陽(yáng)虛證病證結(jié)合動(dòng)物模型建立方法多采用在脾腎陽(yáng)虛證候模型基礎(chǔ)上再施加UC疾病模型誘導(dǎo)因素，通過(guò)該復(fù)合因素法建立的模型能較好地體現(xiàn)“病”與“證”各方面的特征。筆者認(rèn)為，雖然人為干預(yù)因素在一定程度上會(huì)影響模型的可靠性，但與單純的疾病或證候模型比較，這種模型更加接近中醫(yī)辨病辨證的臨床實(shí)際；同時(shí)，采用復(fù)合因素法造模是今后中醫(yī)動(dòng)物模型發(fā)展的趨勢(shì)，并將具有更加廣闊的應(yīng)用前景。在模型評(píng)價(jià)方面，目前研究多數(shù)將證候和疾病各自兩套評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)整合在同一動(dòng)物上，這種評(píng)價(jià)方法是最常用，也是有一定根據(jù)和理論支撐的。UC脾腎陽(yáng)虛證模型在宏觀表征上必須要求突出“潰瘍性結(jié)腸炎”與“脾腎陽(yáng)虛證”各自的特征表現(xiàn)；在微觀指標(biāo)上既要展現(xiàn)UC病理結(jié)腸組織的鏡下?lián)p害及血清生化檢測(cè)對(duì)炎癥反應(yīng)的標(biāo)示，也要通過(guò)目前比較公認(rèn)的血清D-木糖、血清皮質(zhì)醇等相關(guān)性及特異性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)來(lái)為證候模型評(píng)價(jià)的客觀化提供支持；最后，選擇臨床上常用且療效確切的經(jīng)典方藥（如四神丸等），通過(guò)藥物的反證衡量該模型是否成功是必要的標(biāo)準(zhǔn)，其對(duì)證候模型的判別佐證起關(guān)鍵作用。

3 對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎脾腎陽(yáng)虛證“病證結(jié)合”動(dòng)物模型的思考

基于已有研究基礎(chǔ)上并結(jié)合自身實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，筆者認(rèn)為，UC脾腎陽(yáng)虛病證結(jié)合模型的建立及評(píng)價(jià)體系還存在諸多亟待解決和完善的問(wèn)題，這些問(wèn)題同樣是其他病證結(jié)合模型面臨的難題。將疾病模型與證候模型簡(jiǎn)單相疊加建立的復(fù)合模型，忽視了疾病與證候之間的關(guān)聯(lián)性，故建模時(shí)應(yīng)以兩者在臨床上的結(jié)合點(diǎn)為基礎(chǔ)。如UC與脾腎陽(yáng)虛證型的結(jié)合點(diǎn)體現(xiàn)在免疫方面，研究顯示，免疫因素在UC發(fā)病機(jī)制中占重要地位［9］，而脾腎陽(yáng)虛證型則多表現(xiàn)機(jī)體免疫功能低下及紊亂，故建議通過(guò)該思路尋找與兩者聯(lián)系緊密且特異性強(qiáng)的免疫因素復(fù)合模型，不僅可讓該模型病證緊密結(jié)合，更可從本質(zhì)上真實(shí)反映病證結(jié)合的內(nèi)涵；同時(shí)，建模過(guò)程中采用化學(xué)藥物、物理及機(jī)械性刺激方法等人為干擾因素，使動(dòng)物模型表現(xiàn)出的是藥物干預(yù)后的毒性反應(yīng)或機(jī)械損傷，雖然客觀指標(biāo)符合相應(yīng)疾病和證候的外在表現(xiàn)，但動(dòng)物體內(nèi)的機(jī)能狀態(tài)和病理生理可能已發(fā)生較大變化，從而大大降低模型可靠性［10］。就UC脾腎陽(yáng)虛證模型而言，氫化可的松、腺嘌呤等都是通過(guò)藥物不良反應(yīng)誘導(dǎo)造模的，其肝腎功能損害難以避免，從而導(dǎo)致模型建立后可能會(huì)向腎炎、腎衰竭等方向發(fā)展，即模型的多重性；另外，目前病證結(jié)合動(dòng)物模型缺乏合理的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)體系是不爭(zhēng)的事實(shí)，“病”與“證”各自局限的兩套指標(biāo)的簡(jiǎn)單相加貌似兩者兼顧，實(shí)則未挖掘出二者結(jié)合后的本質(zhì)特征及其內(nèi)在聯(lián)系。臨床上，疾病的發(fā)生伴隨著證候的動(dòng)態(tài)及階段性的變化，可見(jiàn)“病”與“證”幾乎是同時(shí)進(jìn)行并發(fā)展的，因此兩者作為一個(gè)整體時(shí)所體現(xiàn)的指標(biāo)變化才是臨床上的論治點(diǎn)。鑒于病證結(jié)合模型多采用復(fù)合法先后建立而成，這樣的一個(gè)整體性指標(biāo)可對(duì)這種動(dòng)物模型的“結(jié)合”作出最本質(zhì)的反映。因此，筆者認(rèn)為，深入改進(jìn)該模型建立及評(píng)價(jià)體系，建立更加完善的UC脾腎陽(yáng)虛型病證結(jié)合動(dòng)物模型，已成為相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究刻不容緩的任務(wù)。

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Discussion on Establishment and Evaluation of Ulcerative Colitis Animal Models with Sp leen-kidney Yang Deficiency Pattern Based on the Theory of “Combination of Disease with Syndrome”

ZHENG Jie1， CAO Ze-biao1， ZHU Ying2
（1. Graduate School of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410007， China； 2. The Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410005， China）

Theory of “combination of disease with syndrome” has been widely used in the establishment and evaluation of experimental animal models. The ulcerative colitis animal models with spleen-kidney yang deficiency pattern were established based on the theory according to complex factors. These models were not only required to show the features of “disease” and “syndrome” at the macro characterization， but also combined with microscopic biological indicators and prescription test so as to make comprehensive evaluation. But the problems in the establishment and evaluation of “combination of disease with syndrome” models hindered further development， such as the weak connection between disease and syndrome， multiplicity of models， and limitations in evaluation standards. Therefore， further improvement in the establishment and evaluation of models will make great sense to better ulcerative colitis animal models with spleen-kidney yang deficiency pattern.

ulcerative colitis； spleen-kidney yang deficiency； combination of disease with syndrome； animal models

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.06.005

R228

A

1005-5304（2016）06-0016-03

2015-05-26）

（

2015-09-25；編輯：梅智勝）

湖南省教育廳重點(diǎn)課題（13A069）；湖南省科技廳課題（2013SK3080）；長(zhǎng)沙市科技計(jì)劃項(xiàng)目（k1403023-31）

朱瑩，E-mail：zhuying089@126.com