蒙華琳，陸玉婷，卓 燊

(廣西科技大學，柳州 545005)

實驗研究

復方澤瀉制劑的體外抑石作用及組方篩選

蒙華琳，陸玉婷，卓 燊

(廣西科技大學，柳州 545005)

目的：研究復方澤瀉制劑的體外抑石作用并篩選最佳組方。方法：采用正交實驗方法，以體外草酸鈣結晶溶解率為檢測指標，將澤瀉水提液(A)、金錢草水提液(B)、枸櫞酸鉀(C)和維生素B6(D)四種有效成分按正交表進行實驗，測定草酸鈣結晶溶解率。結果：四種藥物配伍制劑均能產生體外溶石作用(P<0.05)，其中A3B3C2D1配比組溶石率為22.23%，體外抑制草酸鈣結晶效果最好(P<0.05)。結論：澤瀉水提液(A)、金錢草水提液(B)、枸櫞酸鉀(C)和維生素B6(D)四種藥物合用在體外能起到良好的抑制結石作用，最佳組方配比為A3B3C2D1，即高劑量的澤瀉和金錢草、中劑量的枸櫞酸鉀、小劑量的維生素B6混合時能最有效地抑制體外草酸鈣結晶的形成。

澤瀉水提液，金錢草水提液，枸櫞酸鉀，維生素B6，正交實驗，草酸鈣結晶，溶解率

腎結石是臨床上常見的疾病之一，發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1]。當前結石的治療手段很多，可以通過激光碎石、微創(chuàng)手術等方法處理各種結石。但手術治療結石僅是對因治療，術后如果沒有很好的預防措施，7年后結石復發(fā)率高達51%[2，3]。因此，尋找有效、作用明確且服用方便的藥物仍是防治腎結石的重要課題。

用己知中藥有效提取成分和有確切療效的西藥進行組方，是當前新藥快速研發(fā)及與國際接軌的重要發(fā)展途徑之一，是一個比較新穎、合理的研究方向[4]。這種有效成分清楚、藥理作用明確、作用機理清晰的組方，既可以節(jié)約藥材、減少毒副作用，還可以確保臨床應用的安全有效。目前，對澤瀉水提液、金錢草水提液、枸櫞酸鉀和維生素B6四種藥物的研究均較透徹，發(fā)現(xiàn)均有減少腎結石生成的作用，但將這四種有明確溶石、排石功效的藥物組成方劑還未有研究。本實驗圍繞上述四種藥物如何配置成組方并達到最佳抑石效果進行研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 生藥材澤瀉(桂林興安縣鑫鑫中藥飲片有限公司，批號140403)；金錢草顆粒(重慶和平制藥有限公司，批號140911)；枸櫞酸鉀顆粒(麗珠制藥，批號140605)；維生素B6片(廣東恒健制藥有限公司，批號150710)；草酸鈣(上海麥克林生化科技有限公司，批號140817)。

1.2 藥物制備方法 將生藥材澤瀉500 g加水1 000 ml煮沸60 min, 取濾液, 8 000 r/min離心10 min，取上清液濃縮至50 ml，制成每1 ml含澤瀉10 g的溶液。另將金錢草顆粒750 g、枸櫞酸鉀顆粒110 g、維生素B6片250 mg分別溶于100 ml蒸餾水中充分溶解并混和均勻，濾除雜質，分別制備成濃度為7.5 g/ml的金錢草溶液、濃度為1.10 g/ml的枸櫞酸鉀溶液和濃度為2.5 mg/ml的維生素B6溶液。

1.3 測定方法 以成人每天服藥的最低劑量(按《中國藥典》澤瀉成人服用10 g/d；按藥品說明書，金錢草顆粒成人服用30 g/d，枸櫞酸鉀成人服用4.38 g/d，維生素B6成人服用10 mg/d)作為本次實驗的高劑量，高劑量的1/2為中劑量，中劑量的1/2為低劑量，見表1。取潔凈試管18支，共分9組，分別為9個不同配比制劑組。稱量0.5 mg市售草酸鈣結晶于試管中，按L9(34)正交設計表，每組分別加入高、中、低劑量藥液，各種藥液加完后，將試管置于37 ℃恒溫箱內恒溫10 d，每2 d換藥液1次，換藥方法為用雙層紗布捆緊封閉瓶口，每次濾干藥液后再用6號針頭加入新鮮的滅菌藥液，末次換藥后48 h，濾干藥液，37 ℃恒溫24 h，用萬分之一天平稱重[5]。進行方差分析，確定復方配比。

表1 因素水平表

2 結果

復方澤瀉制劑組對體外草酸鈣結晶均具有較好的溶解作用，接觸10 d的溶石率分別為8.3%、11.81%、14.13%、13.8%、14.63%、15.17%、17.23%、17.25%和22.23%。與加藥前比較，差異具有顯著意義(P<0.05)，其中A3B3C2D1的配比(即澤瀉高劑量、金錢草高劑量、枸櫞酸鉀中劑量、維生素B6小劑量)優(yōu)于其他配比組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 正交試驗及結果

3 討論

在我國醫(yī)學領域中，中、西藥在臨床上都發(fā)揮著重要作用。西藥通常為單一的化學成分，作用靶點明確，在病因清楚、發(fā)病機理明確的疾病治療中占優(yōu)勢。但是，有很多疾病(如腎結石)，僅靠單一成分很難獲得最佳療效，且長時間大量應用單一成分也易產生耐藥、增加不良反應；中藥的復方制劑強調治病求源，藥有個性之長，方有和群之妙，即便是單味中藥也具有多層次、多靶點的作用，且毒性小，可長期服用。但是，按現(xiàn)代醫(yī)學理論，傳統(tǒng)中藥方劑中的各組分所起作用不明確，而真正發(fā)揮作用的僅是其中某一類或幾類成分，其他的成分則多為無效成分，或藥效尚待證實，這些無效成分起干擾或拮抗作用，因此要獲得國際認可還需要進行單一成分研究，工作難度非常大。而應用己知的中藥有效成分提取物和有確切臨床療效的西藥進行組方(如維C銀翹片等)，是中藥新藥研發(fā)的方向之一，能讓新藥更好更快地為臨床服務[4]，可確保臨床用藥有效安全，亦可克服傳統(tǒng)方劑的缺點。

澤瀉的水提取液體外能明顯抑制草酸鈣結晶的生長和聚集[6]，體內能顯著降低腎鈣含量并抑制大鼠實驗性腎結石的形成；金錢草是中醫(yī)治療泌尿系統(tǒng)結石的傳統(tǒng)中藥，可使一水合草酸鈣晶體完全消失，說明金錢草可以較好地抑制腎結石的形成[7]；枸櫞酸則是尿液中最強的內源性結石抑制物之一，研究顯示枸椽酸可絡合鈣離子從而形成可溶性鈣復合物，可直接抑制尿液中晶體的成核、生長和聚集，還可以通過提高尿液的pH值，防止尿液過度酸化，降低成石成分飽和度，從而抑制腎結石形成[8]；維生素B6是催化乙醛酸轉化為甘氨酸酶的輔酶，體內缺乏時，乙醛酸不能轉化為甘氨酸，使草酸的形成增加，從而促進草酸鈣結石的形成，維生素B6能減少腎組織中草酸含量，使腎臟草酸鈣結晶的形成減少，表現(xiàn)出抑制草酸鈣結晶形成的作用[9]。

本實驗通過體外研究快速篩選出四種排石藥物的最佳組方，結果顯示四種藥物搭配在體外能有效地溶解草酸鈣結晶，而其中A3B3C2D1配比，即高劑量的澤瀉和金錢草、中劑量的枸櫞酸鉀、小劑量的維生素B6混合時，能最有效地抑制體外草酸鈣結晶的形成。

1 陳之白主編.現(xiàn)代外科治療學[M].濟南:山東科學技術出版社，1997: 410

2 Hess B, Medizinische K, Spital Z，etal. Pathophysiology, diagnosis and conservative therapy in calcium kidney calculi[J]. Therapeutische Umschau,2003,60(2):79-87

3 Pak C Y C .Citrate and renal calculi：an update [J]. Mineral and electrolyte metabolism, 1994, 20(6):371-3774 簡潔，梁鋼.天然抗氧化劑多靶點作用在防治心腦血管疾病中的研究進展[J].華夏醫(yī)學，2004，17(1)：109

5 萬堯德，廖雪松，曾曉嵐，等.肝膽結石片的體外溶石、抑菌、解痙作用[J].中國藥房，1998，9(2):62-63

6 尹春萍，劉繼紅，章詠震，等.澤瀉水提取液預防草酸鈣結石形成的體外及動物實驗研究[J]. 同濟醫(yī)科大學學報，1997，26(2):99-101

7 王萍，沈玉華，謝安建，等. 金錢草提取液對尿液中草酸鈣晶體生長的影響[J]. 安徽大學學報，2006，30(1):80-84

8 何慧嬋， 鐘惟德，謝克基，等. 枸櫞酸鉀緩釋劑對尿液pH值及枸櫞酸含量的影響[J]. 中華醫(yī)學雜志，2004，84(21):1825-1826

9 李山，吳闖，農華，等. 芭蕉芯及維生素B6對小鼠腎草酸鈣結晶抑制作用的研究[J]. 中華外科雜志，1998，36(12):763-765

Screening for compound preparations for in vitro inhibition of stone

Meng Hualin, Lu Yuting, Zhuo Shen

(1. Guangxi University of Science and Technology,Liuzhou 545005)

Objective:To screen an efficient compound preparation for the inhibition of stone in vitro. Method：Alisma water extract(A),loosestrife water extract(B), potassium citrate (C)and vitamine B6(D) were grouped by orthogonal table and detected for their dissolution rates of calcium oxalate crystals.Result：Compound preparations could dissolve calcium oxalate crystals (P<0.05) ,but the group of A3B3C2D1was the most efficient with a disllution rate of 22.23%.Conclusion The compound preparation of alisma water extract(A),loosestrife water extract(B), potassium citrate (C)and VitB6(D) can inhibit the stone well in vitro and the Group A3B3C2D1is the best.

alisma water extract，loosestrife water extract，potassium citrate，VitB6，orthogonal，calcium oxalate crystals，dissolution rate

2015-11-06

R944

A

1006-5687(2016)01-0001-03